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ELISA法在艾滋病HIV抗体筛查中的应用价值

2021-09-30 98 上传者：管理员

摘要：目的研究经腹超声和经阴道超声对剖宫产术后子宫瘢痕妊娠的诊断价值。方法选取2018年2月-2021年2月在我院就诊的46例剖宫产术后子宫瘢痕妊娠患者为研究对象,均采用经腹超声和经阴道超声检查,比较经腹超声和经阴道超声检查诊断准确率、不同分型诊断准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果经阴道超声检查诊断准确率为91.30%,高于经腹部超声的78.26%,差异有统计学意义(P<0.05);经阴道超声检查灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于经腹部超声检查,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与经腹部超声比较,经阴道超声诊断剖宫产术后子宫瘢痕妊娠准确率、灵敏度、特异度高,可为早期剖宫产术后子宫瘢痕妊娠诊断提供可靠的价值。

关键词：
ELISA法
HIV抗体
胶体金法
艾滋病
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艾滋病是临床中危害性极大的传染病之一，主要是由于感染人类免疫缺陷病毒导致的[1]。HIV会对机体的免疫系统造成攻击，破坏淋巴细胞，导致患者丧失免疫功能，增加了其他疾病的感染率，致死率极高[2]。AIDS具有传播速度快、潜伏期长、危害范围广等特点，及时、有效的诊断及监测是控制HIV病毒传播的主要措施，对临床治疗及患者预后也有重要的意义。HIV抗体检测是临床判断HIV感染的重要指标，虽然检测方法较多，但对于HIV抗体的初筛，仍面临着种种困难，不同方法的检验结果存在一定的差异[4]。本研究主要分析AIDS检验中HIV抗体酶联免疫吸附剂测定法的筛查价值，现报道如下。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2018年12月-2020年12月无锡市疾病预防控制中心共359例疑似AIDS患者作为研究对象，其中男性324例，女性35例，年龄19～60岁，平均年龄（35.16±6.11）岁。

1.2方法

1.2.1免疫印迹法检测

严格遵照试剂盒说明书进行判断。HIV-1抗体阳性：检测出2条env带（gp160/gp41和gp120）以及gag(p17、p24、p55）或pol(p31、p51、p66）带；HIV抗体阴性：无病毒特异性皮带或仅检出p17抗体无其他条带。HIV抗体不确定性：有任何病毒特意条带，但不足以评价为阳性；HIV-2抗体阳性：HIV-1阳性或不确定基础上有HIV-2清晰条带。

1.2.2胶体金快速法

首先制备待标记蛋白溶液，将pH7.0的氯化钠溶液与待标记蛋白透析，当多余盐离子去除后，进行10000g4℃离心处理，持续1h，保证聚合物彻底清除。随后准备待标胶体金溶液，先用0.1mol/L氯化氢调节胶体金液pH值，根据待标记蛋白需求的不同，对胶体金的pH值调节后分别装入不同试管，每个试管1ml。

1.2.3ELISA法

将待检血液以3000r/min的速率离心，分离血清，根据HIV抗体检测试剂盒说明进行ELISA法检测，具体步骤如下：先取出酶标板，分别设置3孔阳性对照、2孔阴性对照、1孔空白对照、1孔样品。除空白孔外，其余分别对应阳性、阴性对照组以及样品各100μl。经孵育30min、洗板6次后拍干。除空白孔外，每孔均加入酶标记抗原100μl，再次孵育20min、洗板6次后拍干。增加底物液，避光反应15min后再加入终止液。通过酶标仪读取不同孔的吸光度（OD）值。

1.3观察指标

以免疫印迹法检测结果作为金标准，分析ELISA、胶体金法检测阳性率、灵敏度、特异度、检测时间及成本，并分析ELISA筛查结果的影响因素。灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%；特异度=真阴性/（真阴性+假阴性）×100%。

1.4统计学方法

通过SPSS22.0统计软件进行数据分析，计量资料以（±s）表示，采用t检验；计数资料以（n）表示，采用χ2检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2、结果

2.1胶体金法和ELISA法检测阳性率、灵敏度、特异度比较

359例疑似AIDS患者中，免疫印迹法检测显示HIV抗体阳性337例，阳性率为93.87%。ELISA法检测HIV抗体阳性率为93.04%(334/359），高于胶体金法的87.74%(315/359），差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA法灵敏度为97.95%(334/341）、特异度为83.33%(15/18），高于胶体金法的95.17%(315/331）、21.43%(6/28），差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2胶体金法和ELISA法检测时间及成本比较

ELISA法检测时间长于胶体金法，但检测成本低于胶体金法，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3ELISA法筛查结果影响因素

ELISA法检测HIV抗体共出现7例假阳性，其中2例因血液标本未妥善处理、2例血液标本污染、3例血液标本溶血。

3、讨论

HIV病毒是一种攻击人体免疫系统的病毒，也是AIDS发病的主要原因。当患者感染HIV病毒后，机体内的CD4+T细胞会受到严重损伤，使得免疫功能逐渐失调，导致其他细菌、病毒的入侵，对患者的生命安全造成了严重的影响。AIDS的潜伏期较长，未发病前患者不会表现出任何症状，但此时仍可以通过血液、体液进行传播，危害严重[7]。近年来，全球AIDS的发病率逐年上升，已经成为全球性的公共卫生问题，受到了社会的广泛关注。

定期进行AIDS检验，及时发现HIV病毒，早诊断、早治疗是预防AIDS的重要措施之一。目前临床中检测HIV病毒的方法较多，如免疫印迹法、胶体金法、ELISA法等[8]。免疫印迹法是临床检测HIV的“金标准”，由于检验步骤较为复杂，因此多用于确诊试验，灵敏度与特异度较高。胶体金法主要通过胶体金进行检测，由于胶体金的外观为红色，因此检测过程中安全性较高，且标记物稳定性强，检测过程简单，反应时间一般在30min内，但该方法诊断阳性率较低，HIV病毒敏感性相对较差，因此其结果准确性不高[9]。ELISA法的检测原理是当抗体与酶结合后，不会导致抗体免疫性反应的特异性变化，对酶活性也无明显影响，补充底物后能够使基质水解呈色，能够改变还原性氢体的颜色，并通过呈色发现酶，从而在细胞水平上显示抗体的部位，具有较高的特异性、敏感性[10]。本研究结果显示，359例疑似AIDS患者中免疫印迹法检测显示HIV抗体阳性337例，阳性率93.87%。ELISA法和胶体金法检测HIV抗体阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA法检测HIV抗体阳性率、灵敏度、特异度高于胶体金法，差异有统计学意义（P<0.05）；且ELISA法检测时间长于胶体金法，但检测成本低于胶体金法，差异有统计学意义（P<0.05）。由此可以看出，胶体金法和ELISA法均是检验HIV抗体的有效方式，但相比之下，ELISA法的阳性准确率更高。同时，ELISA法虽然时间较长，但检测成本较低，患者接受能力强，可作为临床首选的检测方式。

本研究结果还发现，ELISA法检测HIV抗体共出现7例假阳性，其中2例因血液标本未妥善处理、2例血液标本污染、3例血液标本溶血。因此，在对HIV抗体进行ELISA法检测时，应注意以下几方面：(1)血液标本是临床检测的主体，一旦标本发生异常，会严重影响检测结果的准确性，导致假阴性、假阳性等情况，根据血液标本的影响因素，包括内源性干扰和外源性干扰[11];(2)合理选择试剂，临床中选用的试剂必须经注册批准且检验通过，根据临床评估结果、鉴定报告内容选择特异度、灵敏度较高的试剂盒[12]，因此检测前，应对试剂进行全面的预处理；(3)标本质量是影响临床检测结果的另一个重要因素[13,14,15]，血清分离时应保证完全彻底分泌，避免发生纤维蛋白混入血清样本导致的假阳性；血清在保存时应冷冻保存，避免反复冻融对蛋白分子造成破坏，导致假阴性结果；此外，临床检测时，应在试验前至少进行2次洗板机冲洗，保证清除游离血红蛋白，从而减少对检测结果的不良影响[16];(4)HIV抗体检测需严格遵守《全国艾滋病检测技术规范》流程[17]。