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LMP1与CRT在鼻咽癌组织中的表达情况及临床意义

2025-07-11 46 上传者：管理员

摘要：目的探究EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）和钙网蛋白（CRT）在鼻咽癌组织中的表达及临床意义。方法利用TIMER数据库和UALCAN数据库分析CRT mRNA在不同类型肿瘤中的表达情况及其表达水平与其临床病理特征的关系。收集60例鼻咽癌组织和30例鼻咽炎黏膜组织，运用免疫组化检测鼻咽癌组织中LMP1与CRT蛋白的表达情况，分析鼻咽癌组织中LMP1、CRT蛋白的表达水平与鼻咽癌临床病理特征的关系。采用Pearson相关性分析鼻咽癌组织中LMP1与CRT蛋白表达的相关性。结果数据库结果显示CRT在16种恶性肿瘤中呈现异常高表达，在头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）中尤为显著（P<0.05）;HNSCC组织中CRT mRNA在41～60岁、肿瘤TNM分期Ⅱ～Ⅲ期、T3、T4期呈高表达（P<0.05）。鼻咽癌组织LMP1、CRT表达水平高于鼻咽炎组织（P<0.05）,两者间存在正相关（P<0.05）,CRT表达水平与T分期有关（P<0.05）。结论 LMP1与CRT在鼻咽癌组织中高表达，两者呈正相关；CRT表达水平与T分期密切相关。

关键词：
EB病毒
发病机制
潜伏膜蛋白1
钙网蛋白
鼻咽癌
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鼻咽癌是中国南方高发的头颈部恶性肿瘤,其发病机制与EB病毒(EB virus,EBV)潜伏感染密切相关[1-2]。潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)作为EBV编码的核心致癌蛋白,参与调节肿瘤细胞增殖与转移[3-4]。本课题组前期鉴定出LMPl参与促进细胞增殖作用相关的蛋白质钙网蛋白(calreticulin,CRT)[5]。本文拟在前期研究基础上,观察LMP1、CRT在鼻咽癌组织中的表达水平及其临床意义。

1、资料和方法

1. 1一般资料

收集2020年6月—2022年9月本院耳鼻咽喉头颈外科活检手术患者的组织样本,其中鼻咽癌组织样本60例,同时期收集鼻咽炎黏膜组织样本30例。鼻咽炎患者中,男16例,女14例;年龄18 ~79岁,平均(48. 5±30. 5 )岁。鼻咽癌患者中,男44例,女16例;年龄29 ~ 77岁,平均( 54. 75±12. 19)岁;肿瘤TNM分期Ⅱ~Ⅲ期36例,Ⅳ期24例;其中T分期中T1 ~ 219例,T3 ~ 441例;N分期中N0 ~ 119例;N3 ~ 441例。鼻咽癌组织病理类型:分化型非角化性癌21例,未分化型非角化性癌39例。本研究经本院伦理委员会批准,且符合《赫尔辛基宣言》。纳入标准:①患者符合鼻咽癌判定标准,且经术后病理学确诊;②受试者或其家属签署知情同意书。排除标准:①复发患者;②临床资料不全;③有放化疗史;④其他肿瘤病史。

1. 2数据库和软件分析

通过TIMER ( https: / / cistrome. shinyapps. io /timer/ )分析23种TCGA肿瘤中CRT在肿瘤组织和邻近正常组织中的表达水平。通过UALCAN( http: / / ualcan. path. uab. edu / analysis. html)数据库分析520例头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)肿瘤组织与44例邻近正常组织中CRT mRNA表达水平及其与临床病理特征的相关性。

1. 3组织标本收集

收集患者经手术切除的鼻咽部组织,剪取一部分置于福尔马林中固定,制备石蜡切片;另一部分迅速置于液氮中,24 h后置于-80℃冰箱保存备用。

1. 4免疫组化染色

取4μm厚石蜡切片,SP法染色,依据免疫组化试剂盒说明书进行常规操作,一抗为EBV LMP1抗体(福州迈新生物技术开发有限公司)、CRT兔抗人多克隆抗体(武汉三鹰生物技术有限公司),经DAB显色(北京中杉金桥生物技术有限公司)、复染、脱水、封片后在显微镜(日本尼康(NIKON)公司)下拍照。LMP1及CRT蛋白的表达定位在细胞质或细胞膜上,LMP1及CRT蛋白根据组织切片上胞质或胞膜出现明显黄色或棕黄色的颗粒判读为阳性。其表达情况按染色程度与阳性细胞比例评分的乘积≥3分判定阳性,否则为阴性[6-7]。

1. 5统计学分析

采用SPSS 20. 0统计软件进行数据分析。计数资料比较采用χ2检验或Fisher确切概率法检验。采用Pearson相关性分析鼻咽癌组织中LMP1与CRT表达的相关性。P < 0. 05为差异有统计学意义。

2、结果

2. 1数据库分析结果

TIMER数据库结果显示,23种TCGA肿瘤中共16种肿瘤组织的CRT表达水平高于其邻近正常组织(P<0. 05),如乳腺浸润癌、食管癌、头颈部鳞状细胞癌等(P<0. 05;图1)。

图1 TIMER数据库分析不同类型肿瘤中CRT的表达情况

UALCAN数据库结果显示,HNSCC组织的CRTmRNA表达水平高于其正常组织(P<0. 05;图2A)。CRT表达水平,在不同性别中的差异无显著性(P>0. 05;图2B);41 ~ 60岁高于61 ~ 80岁(P<0. 05;图2C);肿瘤TNM分期Ⅱ、Ⅲ期高于Ⅰ、Ⅳ期(P<0. 05;图2D);其中T分期T3、T4期高于T1、T2期( P <0. 05;图2E);N分期间差异无显著性(P>0. 05;图2F)。

图2 UALCAN数据库分析HNSCC组织CRT的表达情况

2. 2免疫组化检测

LMP1与CRT在鼻咽癌、鼻咽炎黏膜组织中的阳性表达LMP1阳性表达区域分布于目的细胞的胞膜或胞质,呈黄色、棕黄色或棕褐色颗粒沉积;CRT蛋白定位于胞膜和(或)胞质,阳性表达目的区域呈现黄色、棕黄色或棕褐色颗粒沉积(图3)。鼻咽癌组织LMP1 [ 55. 00% ( 33 / 60 )]与CRT阳性表达率[68. 33% ( 41 / 60 )]水平高于鼻咽炎黏膜组织[30. 00% (9 / 30)和43. 33% (13 / 30);P<0. 05]。

图3免疫组化检测LMP1、CRT在鼻咽癌、鼻咽炎黏膜组织中的阳性表达(100×)

2. 3 LMP1、CRT表达与鼻咽癌患者临床病理特征的关系

在60例鼻咽癌组织中,CRT蛋白表达水平与患者T分期有关系(P<0. 05;表1)

表1 LMP1、CRT表达与鼻咽癌患者临床病理特征的关系

2. 4鼻咽癌组织中LMP1与CRT表达的相关性

在33例LMP1阳性表达的鼻咽癌组织中,28例(84. 8% )CRT表达阳性;在41例CRT阳性表达的鼻咽癌组织中,28例(68. 3% ) LMP1表达阳性。CRT与LMP1呈正相关(r = 0. 393,P<0. 05)。

3、讨论

鼻咽癌是一种多见于中国南部以及东南亚地区的头颈部恶性肿瘤,其病因学与EBV感染、隐匿的解剖位置、显著的种族聚集和地理分布等相关[8]。LMP1不仅能够激活多种细胞信号通路,共同促进细胞增殖和生存、血管生成、侵袭和有氧糖酵解,还能影响细胞间的相互作用、抗原呈递以及细胞因子和趋化因子的产生[9]。

Zhao等[10]研究发现LMP1表达水平与鼻咽癌转移风险呈正相关。既往研究显示,LMP1通过核因子-κB信号通路激活NTRK2 / Akt / ERK级联反应,进而上调Twist蛋白介导上皮-间充质转化[11]。课题组前期研究通过生物信息学分析软件构建了CRT介导上皮间质转化的信号通路模型[12]。

本研究发现CRT在头颈部肿瘤中的高表达与T分期显著相关(P<0. 05),提示其可能参与局部浸润的调控过程。Serrano等[13]在血液肿瘤中发现CRT与免疫微环境重塑相关,结合本研究发现的CRT、LMP1共表达特征,推测在鼻咽癌中可能存在独特的“病毒-宿主-免疫”三方互作模式:EBV通过LMP1上调CRT表达,CRT可能通过上皮间质转化、调节肿瘤细胞免疫原性、介导异常凋亡抵抗而发挥作用;提示CRT可能处于LMP1下游调控网络的交叉节点。

本研究揭示的CRT表达特征具有重要临床意义:首先,CRT在肿瘤TNM分期Ⅱ~Ⅲ级中高表达,提示其可作为疾病进展的生物标志物;其次,CRT与T分期的相关性(P<0. 05)表明其可能参与局部侵袭的分子调控;再者,CRT、LMP1的共表达特征为EBV相关致癌机制提供了新视角。

在治疗策略方面,本研究发现CRT、LMP1表达水平为鼻咽癌免疫治疗提供了新思路。目前PD-1单抗联合疗法在鼻咽癌中已展现出良好前景[14-15],而CRT作为调控蛋白,可能通过以下途径增强治疗效果:①提高肿瘤细胞抗原呈递效率;②促进免疫细胞浸润;③协同PD-1抑制剂逆转免疫抑制微环境。这为开发CRT靶向的联合免疫治疗方案提供了理论依据。

本研究的局限性在于:首先,数据库分析未细分HNSCC亚型,可能影响结果的特异性;其次,临床样本量有限,需扩大队列验证CRT的分期相关性;再者因出血风险,活检时通常获取病变部位;因而在本研究中,实验对照组选用鼻咽炎组织。

本研究系统揭示鼻咽癌中LMP1与CRT的表达特征及其临床意义,证实CRT表达水平与肿瘤分级、T分期及EBV感染状态密切相关。研究结果不仅深化了对EBV致癌机制的理解,还为鼻咽癌的分子分型、预后评估及免疫治疗策略优化提供了新的理论依据。后续研究将着重解析CRT、LMP1调控网络的具体分子机制,并探索其临床转化价值。

参考文献:

[5]张志伟,张琼,刘洁琼,等. EB病毒LMP1促鼻咽上皮细胞增殖的蛋白分子鉴定[ J].中国病理生理杂志, 2010, 26 (2 ):287-292.

[6]解立武,张欣,王晶. EB病毒编码的小RNA表达与鼻咽癌预后的关系[J].实用医技杂志, 2023, 30(2): 131-133.

[7]杨安,王亚明,王静,等. Kiss-1和AEG-1在胃癌中的表达及其相关性[J].标记免疫分析与临床, 2019, 26(1): 64-69.

[14]黄宁欣,何佳琦,罗海清.免疫治疗在局部晚期鼻咽癌中的研究进展[J].肿瘤代谢与营养电子杂志, 2024, 11(4): 467-472.

基金资助:湖南省卫健委科研计划项目(B202307019066);湖南省临床医疗技术创新引导项目(2020SK51703);

文章来源:肖博铭,王集星,王英翔,等.LMP1与CRT在鼻咽癌组织中的表达情况及临床意义[J].中南医学科学杂志,2025,53(04):613-616.