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幽门螺杆菌感染和基因型与儿童胃、十二指肠溃疡的相关性

2022-01-05 61 上传者：管理员

摘要：目的分析儿童胃、十二指肠溃疡患儿幽门螺杆菌（Hp）的感染率和基因型（cagA、iceA、vacA、dupA、oipA及luxS）的检出率,探讨Hp基因型与儿童胃、十二指肠溃疡疾病的相关性。方法选择2016年8月—2020年2月在该院住院治疗的胃、十二指肠溃疡患儿320例,胃镜检查取胃黏膜活检,分离Hp进行培养,采用聚合酶链反应（PCR）和测序进行Hp基因型鉴定,检测Hp感染率和各基因及其组合在不同类型消化性溃疡患儿的检出率,并采用Logistic回归筛选诱发胃、十二指肠溃疡患儿的Hp基因型。结果320例胃、十二指肠溃疡患儿中共分离培养141株Hp（胃溃疡56例,十二指肠溃疡69例和胃、十二指肠复合溃疡16例）,总体感染率为44.1%,3组间Hp感染率比较差异有统计学（P<0.05）,且十二指肠溃疡感染率明显高于胃溃疡（χ2=5.778,P=0.016）和胃、十二指肠复合溃疡组（χ2=4.108,P=0.043）;Hp基因型在胃溃疡、十二指肠溃疡及胃、十二指肠复合溃疡3组间的阳性检测率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;经二分类Logistic回归分析示,Hp感染中cagA、iceA1、VacA-s1、VacA-s1/m2、oipA及luxS基因型是儿童胃、十二指肠溃疡发生的危险基因型（P<0.05）。结论Hp基因型与儿童胃、十二指肠溃疡类型无相关性,cagA、iceA1、VacA-s1、VacA-s1/m2、oipA及luxS基因型可能是儿童胃、十二指肠溃疡危险因素,对于疾病的诊断及早期靶向治疗具有重要的意义。

关键词：
儿童胃、十二指肠溃疡
基因型
幽门螺杆菌
相关性研究
胃黏膜
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幽门螺杆菌(Hp)是一种定植于胃肠黏膜的需氧性革兰阴氏菌，存在于胃黏膜层，主要由携带一系列糖基结构的黏液蛋白组成，这些糖基结构可作为细菌黏附的表位参与定植性生长，其感染与儿童消化性溃疡密切相关，在10岁以下儿童的感染率已超过50%[1,2]。Hp在胃黏膜定植后通过产生毒性作用，导致胃肠黏膜功能破坏，胃酸分泌减少，且HP毒力基因型和耐药株的出现能够影响HP的根治效率，由于机体的免疫炎症反应可引发一系列疾病的发生，甚至影响患儿的生长发育[2,3]。HP毒力基因主要包括cagA、iceA、vacA、dupA、oipA及luxS基因型，是导致消化性溃疡的主要致病性因子[3,4,5]。本研究拟通过分析胃、十二指肠溃疡患儿中HP感染及毒力基因型分布情况，探讨Hp感染及基因型与儿童胃、十二指肠疾病的相关性，为临床指导诊断及治疗儿童胃、十二指肠溃疡疾病提供有力的理论依据。

1、资料与方法

1.1 资料来源

选择2016年8月—2020年2月在本院住院治疗的胃、十二指肠溃疡患儿320例，男156例，女164例，平均年龄(8.6±4.1)岁，其诊断标准表现为上腹部疼痛、腹胀、呕吐、呕血及黑便等上消化道症状，经胃镜检查确诊。纳入标准：胃黏膜完整，无胃大部分切除史，同意进行胃肠镜检查和胃窦黏膜活组织取样；排除标准：已进行幽门螺杆根治治疗的患者；胃镜检有活动性出血、胃穿孔的患者；近1月内服用质子泵或H2抑制剂、抗菌药治疗的患儿；有严重肝肾、心肺及呼吸系统疾病患儿；所有患者均进行胃镜检查，取胃窦部的黏膜进行细菌培养和活检。

1.2 方法

HP培养和毒力基因型检测：胃黏膜组织充分研磨，将组织悬混液滴在幽门螺杆菌培养基中，于37℃培养箱中培养5～7d,培养5d左右可见菌落，进行革兰染色，镜下可见细菌呈螺旋状、杆状，脲酶、氧化酶及触酶试验均为阳性，纯化并进行传达培养，即可鉴定为Hp感染[3,4]。收集细菌菌液用北京天根试剂盒提取DNA,用特异性引物鉴定Hp基因16SrRNA和ureA。基因。根据cagA、iceA、vacA、dupA、oipA及luxS基因型，设计相应的PCR引物，其引物分别为cagA(F-GATAACAGGCAAGCTTTTGAGG,R-CTGCAAAAGATTGTTTGGCAGA,349bp),iceA1(F-GTGTTTTTAACCAAAGTATC,R-CTATAGCCACTTTCTTTGCA,247bp),iceA2(F-GTTGGGTATATCACAATTTAT,R-TTACCCTATTTTCTAGTAGGT,229/334bp),VacA-s1(F-ATGGAAATACAACAAACACAC,R-CTGCTTGAATGCGCCAAAC,258bp),VacA-s2(F-ATGGAAATACAACAAACACAC,R-CTGCTTGAArGCGCCAAAC,286bp),VacA-m1(F-CAATCTGTCCAATCAAGCGAG,R-GCGTCAAAATAATTCCAAGG,567bp),VacA-m2(F-CAATCTGTCCAATCAAGCGAG,R-GCGTCAAAATAATTCCAAGG,642bp),dupA(F-ATGAGTTCTATTAACAG,R-TTAAATACTCTTCCTTATAAG,1839bp),oipA(F-CGCGGAAAGGAACGGGTTTT,R-TTAGCGTCTAGCGTTCTGCC,519bp),luxS(F-CTGTGCGCCCTCTAAAGTGT,R-CACATGGACATGCCTAGCCT,261bp),根据相应引物进行PCR扩增，95℃预变性2min,95℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸30s,35个循环，72℃延伸7min,4℃保存，PCR产物于2%的琼脂糖跑胶鉴定，PCR产物于北京擎科公司测序鉴定。

1.3 统计学分析

采用SPSS21.0软件进行统计分析，计数资料采用频数和百分比表示，组间比较采用χ2检验，率的比较采用OR(95%CI)表示，采用Logistic回归筛选诱发胃、十二指肠溃疡患儿的Hp基因型，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 不同类型消化性溃疡患儿幽门螺杆菌的感染率

本次研究共纳入320例患儿，其中胃溃疡患儿145例，十二指肠溃疡患儿130例；胃、十二指肠复合型溃疡患儿45例，其HP感染率分别为38.4%(56例)、53.1%(69例)和35.6%(16例),总体Hp阳性率为44.1%,3组间Hp感染率比较差异有统计学(P<0.05),且十二指肠溃疡感染率明显高于胃溃疡(χ2=5.778,P=0.016)和胃、十二指肠复合溃疡组(χ2=4.108,P=0.043),差异有统计学意义。见表1。

2.2 消化性溃疡患儿幽门螺杆菌基因型及组合基因型的检测

对141例HP株进行复苏、传达及培养，分别对其cagA、iceA(iceA1、iceA2)、vacA(VacA-s1、VacA-s2、VacA-m1、VacA-m2)、dupA、oipA及luxS基因型、组合基因型进行PCR扩增及测序鉴定，测序结果显示，cagA基因检出率为95.0%,iceA1、iceA2及iceA1/A2基因检测率分别为79.4%、10.6%及24.1%,VacA、VacA-s1、VacA-s2、VacA-m1及VacA-m2的检测率分别为100%、90.1%、9.9%、39.7%及60.3%,其中各基因型组合(VacA-s1/s2、VacA-m1/m2、VacA-s1/m1、VacA-s1/m2、VacA-s2/m1及VacA-s2/m2)检出率分别为0.0%、0.7%、30.5%、69.5%、0.0%及0.0%,其中VacA-s1/m2检出率最高；Hp基因型在胃溃疡、十二指肠溃疡及胃、十二指肠复合溃疡3组间的阳性检测率比较，差异无统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 幽门螺杆菌基因型与儿童消化性溃疡的相关性

经二分类Logistic回归分析示，Hp感染中cagA、iceA1、VacA-s1、VacA-s1/m2、oipA及luxS基因型是儿童胃、十二指肠溃疡发生的危险基因型，差异有统计学意义(P<0.05)。Hp各基因型与胃、十二指肠溃疡患儿的Logistic回归分析结果见表3。

3、讨论

HP是引起儿童胃、十二指肠消化性溃疡的重要病原菌，其对胃黏膜的损害程度受宿主遗传因素、环境因素及细菌的毒力因子影响，Hp的致病性依赖于鞭毛、螺旋状结构等定值因子、黏附素、脂多糖、尿素酶及细胞毒素等毒力因子，在胃黏膜定值性生长，并诱发炎症免疫反应，促进疾病的发生[5,6]。在儿童中，胃、十二指肠溃疡与Hp感染有关，在大多数情况下，在没有潜在的全身性疾病或服用胃毒性药物的情况下，这些溃疡主要影响10岁以内的儿童[1,7]。不同消化性疾病慢性萎缩性胃炎、慢性浅表性胃炎及消化性溃疡与Hp的感染密切相关，不同Hp基因型在儿童胃肠十二指肠疾病的发生发展中发挥着重要作用[3,4,6,8]。因此，检测Hp毒力基因型对诊断儿童消化性溃疡具有重要意义。

本研究中发现320例胃、十二指肠溃疡患儿中共分离培养141株Hp,其中胃溃疡56例，十二指肠溃疡69例和胃、十二指肠复合溃疡16例，总体感染率为44.1%,十二指肠溃疡感染率明显高于胃溃疡和胃、十二指肠复合溃疡组，可见，十二指肠溃疡的Hp感染率明显增加。一项23年回顾性研究[7]表明，儿童胃、十二肠溃疡Hp感染率为21.3%,与胃肠道病变相关的独立危险因素是年龄、Hp感染及男性性别，对不同类型病变的分析表明，Hp感染与十二指肠溃、胃糜烂及十二指肠糜烂相关，而与胃溃疡无明显相关性。因此，Hp感染主要与十二指肠溃疡的发生有关，今后需扩大样本检测其与胃肠糜烂、慢性胃炎的相关性，且探讨相关危险因素，为进一步Hp感染与儿童消化性疾病的相关性提供有力证据。

有研究[2,3,9,10,11,12]表明，Hp感染存在毒力基因的差异性，Hp感染和毒力基因型与儿童消化性溃疡密切相关，而根治性HP治疗的耐药株的出现可能与各基因型的突变有关。CagA基因为由27～31个基因构成，其编码的细胞毒素相关基因A(CagA)感染后可使胃上皮发生磷酸化，干扰宿主信号通路，导致局部的组织炎症反应，Hp感染可在胃黏膜上持久性定值作用，通过分泌尿素酶、脂多糖及其毒力因子，抵抗胃酸和中性粒细胞的抑菌作用，破坏黏膜-碳酸盐屏障，导致胃黏膜严重受损[3,11,12,13]。VacA基因编码的空泡毒素基因A(vacA)包括中间区(m区)和信号序列区(s区),其中m区具有m1和m2两个等位基因，SI基因具有s1和s2两个等位基因，不同基因型的Hp菌株毒性具有差异性，可引起细胞损伤和细胞骨架改变，抑制上皮细胞的迁移和增殖，通过内吞作用使细胞变性，从而诱导细胞凋亡等作用，亦可通过相应的免疫应答发挥重要[1,11,12,14]。而感染vacA-s1m2型的Hp患者的消化性溃疡风险明显增加，而vacA-s1m1基因型主要与慢性胃炎相关[1]。IceA基因编码的接触诱导基因A(iceA),包括iceA1和iceA2两个等位基因，主要以iceA1检出率为主，iceA1通过影响胃黏膜的免疫炎症反应，破坏微生态平衡，可作为消化性溃疡病的独立危险因子[1,10,15]。dupA、oipA及luxS基因型亦是影响消化性溃疡疾病的Hp毒力基因[4,6]。本研究发现cagA、iceA1、VacA-s1、VacA-s1/m2、oipA及luxS基因型可能是诱发儿童胃、十二指肠溃疡危险因素，因此需识别此类Hp感染的基因型对疾病诊断具有十分重要的意义。

综上所述，Hp感染与儿童胃、十二指肠疾病密切相关，对儿童胃溃疡和十二指肠溃疡的处理的考虑包括对幽门螺旋杆菌状态及其根除的评估，以防止溃疡复发。不同Hp独立基因型致病性不同，cagA、iceA1、VacA-s1、VacA-s1/m2、oipA及luxS基因型可能是儿童胃、十二指肠溃疡危险因素，分析和检测Hp毒力基因型，能够为儿童胃、十二指肠溃疡疾病的诊治和Hp基因分型和流行病学调查提供重要参考依据。

参考文献:

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文章来源：何昀,罗威耀,刘志刚.幽门螺杆菌感染和基因型与儿童胃、十二指肠溃疡的相关性[J].中国妇幼保健,2022,37(01):78-81.