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子宫内膜异位症Treg细胞上调的机制研究

  2022-04-26    111  上传者:管理员

摘要:目的研究子宫内膜异位症Treg细胞上调的原因。方法选41例子宫内膜异位症患者,其中16例术前经过GnRH-a治疗的为治疗组,另25例术前未经治疗的为未治疗组,同时选25例子宫肌瘤患者为对照组,通过采血、腹腔液取样,用化学发光、流式细胞和ELISA方法检查化验,观察治疗组、未治疗组和对照组的基础雌二醇水平、腹腔液Treg细胞百分比及与Treg细胞诱导有关的IL-10、TGF-β、PGE-2炎症因子水平。结果经GnRH-a治疗后,治疗组的基础雌二醇下降显著,相比于治疗组治疗前、未治疗组及对照组,差异有统计学意义(P=0.00)。未治疗组Treg细胞百分比明显升高,相比于治疗组治疗后、对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与Treg细胞诱导有关的TGF-β、PGE-2在未治疗组显著增高,相比于对照组、治疗组治疗后,差异有统计学意义(P=0.00)。IL-10在治疗组、未治疗组、对照组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论子宫内膜异位症经GnRH-a治疗后,Treg细胞及TGF-β、PGE-2炎症因子水平下降,提示患者腹腔存在炎症,Treg细胞的上调可能与其诱导的炎症因子的升高有关。

  • 关键词:
  • GnRH-a
  • Treg细胞
  • 免疫调节
  • 子宫内膜异位症
  • 炎症因子
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子宫内膜异位症的发病机制有多种学说,其中免疫抑制因素也受到关注。近年来国内外研究发现,多数子宫内膜异位症患者的腹腔液和病灶均有调节性T细胞(Treg)升高的现象[1,2,3,4,5],认为免疫抑制参与了子宫内膜异位症的发生发展,Treg细胞升高形成免疫抑制,降低了机体清除盆腔异位细胞的能力,进而导致子宫内膜异位症的发生发展[6]。但是我们认为,子宫内膜异位症表现为炎症性疾病,患者腹腔表达许多炎症因子,Treg细胞上调可能是继发于炎症的免疫调节事件,与其诱导的炎症因子的升高有关。因此在本研究中,我们以子宫内膜异位症的巧克力囊肿患者为研究对象,以Treg细胞为免疫抑制的观察指标,比较经GnRH-a治疗和未经GnRH-a治疗患者腹腔液Treg细胞及与Treg细胞诱导有关的炎症因子水平,观察Treg细胞与其诱导的炎症因子的关系。现将结果报告如下。


1、资料与方法


1.1 一般资料

以2019年收治的41例子宫内膜异位症患者为研究对象,巧克力囊肿大小5~7cm,其中16例术前经GnRH-a治疗、3个周期后来院手术的为治疗组,另25例未经GnRH-a治疗直接手术的为未治疗组,2组的囊肿大小、CA125、分期情况见表1。同时选25例子宫肌瘤患者为对照。纳入对象均排除心、肝、肾、内分泌疾病和盆腔感染疾病,近3个月未服用激素类药物。本研究通过医院伦理委员会批准。

1.2 主要试剂及仪器

雌二醇检测试剂盒为雅培公司产品,流式细胞仪为BD公司产品,Treg细胞检测试剂盒购自Bio-Science公司(内含抗人FITC-CD4和PE-Foxp3单抗,及配套的固定透膜和透膜缓冲试剂),IL-10、TGF-β、PGE-2ELISA试剂盒购自南京森贝伽生物科技有限公司。

1.3 治疗方法

术前经GnRH-a亮丙瑞林治疗的子宫内膜异位症患者,在月经周期的1~5天(28天为1个周期),第1次皮下注射亮丙瑞林3.75mg,部位为上臂或臀部,每1周期给药1次,剂量同第1次,连续给药3个周期。

1.4 检测方法

1.4.1 腹腔液取样

术前经GnRH-a治疗的子宫内膜异位症患者3个周期后入院手术,未经GnRH-a治疗的子宫内膜异位症和子宫肌瘤患者月经干净2~7天后入院手术,术中取腹腔液。

1.4.2 雌二醇和IL-10、TGF-β、PGE-2检测

雌二醇采用电化学发光免疫法检测,IL-10、TGF-β、PGE-2采用ELISA检测,相关操作按说明书进行。

1.4.3 Treg细胞检测

腹腔液离心取沉淀细胞,用1mlPBS悬浮,取100μL加入测定管,加10μLFITC-CD4抗体,再加1ml固定透膜液,混匀,室温避光孵育40min,离心去上清,用透膜缓冲液100μL重悬,加10μLPE-Foxp3抗体,混匀,室温避光孵育30min,离心去上清,用200μLPBS重悬上机检测。

1.5 统计方法

用SPSS19.0软件中的方差分析、T检验、卡方分析和Kruskal-Wallis秩和分析进行统计检验,P<0.05为差异具有统计学意义。


2、结果


2.1 治疗组治疗前后、未治疗组、对照组的基础雌二醇水平

月经第3天的雌二醇值为基础水平,血清化学发光免疫检测显示,治疗组治疗后、治疗组治疗前、未治疗组、对照组的基础雌二醇分别为(11.6±4.9)ng/L、(34.8±8.7)ng/L、(39.4±12.4)ng/L、(33.7±9.5)ng/L(图1)。治疗组治疗后的基础雌二醇值相比治疗前明显下降,差异有统计学意义(t=9.29,P=0.00),表明子宫内膜异位症患者经药物治疗后,基础雌二醇的水平显著下降,达到了药物绝经状态。治疗组治疗前、未治疗组和对照组的基础雌二醇差异无显著性(P>0.05)。

2.2 治疗组治疗后、未治疗组、对照组腹腔液Treg细胞百分比

流式细胞检测显示,治疗组治疗后、未治疗组、对照组的Treg细胞百分比分别为2.94±0.83、5.32±1.16、2.05±0.59(图2),未治疗组的Treg细胞百分比较对照组和治疗组高,差异有统计学意义(P<0.01),表明子宫内膜异位症上调了Treg细胞。使用GnRH-a治疗后,治疗组雌二醇下降,同时Treg细胞百分比下降,提示雌二醇水平与Treg细胞百分比有关。治疗组治疗后和对照组的Treg细胞百分比差异不明显,无统计学意义(P>0.05)。

2.3 治疗组治疗后、未治疗组、对照组腹腔液IL-10、TGF-β、PGE-2炎症因子水平

子宫内膜异位症患者腹腔液中存在许多炎症因子[7,8],经GnRH-a治疗后Treg细胞下调,我们认为这可能和诱导Treg细胞的IL-10、TGF-β、PGE-2的下降有关,因此离心取腹腔液的上清,进一步实施了IL-10、TGF-β、PGE-2的检测。ELISA显示,IL-10在治疗组治疗后、未治疗组、对照组中的水平分别为18.26±4.53ng/L、19.23±5.64ng/L、20.56±5.21ng/L,TGF-β在治疗组治疗后、未治疗组、对照组中的水平分别34.01±12.89ng/L、75.14±16.86ng/L、25.32±10.26ng/L,PGE-2在治疗组治疗后、未治疗组、对照组中的水平分别22.49±4.65ng/L、50.26±6.51ng/L、16.34±6.43ng/L(图3),统计显示,未治疗组与治疗组治疗后、对照组相比,TGF-β、PGE-2明显更高,差异有统计学意义(P=0.00),而IL-10在三者间差异不明显,无统计学意义(P>0.05)。


3、讨论


子宫内膜异位症是一种妇科常见病,发病机制尚不清楚,可能与腹腔内环境有关,其中免疫因素的作用受到关注。研究发现[1,2,3,4,5],多数子宫内膜异位症患者的腹腔液和病灶常伴Treg细胞的升高。

Treg细胞是机体重要的免疫抑制细胞,通过分泌IL-10、TGF-β等细胞因子,或和T效应细胞直接接触,发挥免疫抑制功能。研究认为[6]子宫内膜异位症患者病灶的Treg细胞升高,会形成局部免疫抑制,降低清除盆腔异位细胞的能力,进而导致子宫内膜异位症的发生发展。

但是我们认为,异位子宫内膜是由在位子宫内膜逆流而来,是机体的正常组成部分,子宫内膜在妊娠期间得到了母体激素的有效刺激,接触了自身免疫细胞,形成了免疫耐受,用局部的免疫抑制解释子宫内膜异位症的发生发展可能不合理。

GnRH-a是治疗子宫内膜异位症的药物,其机制是抑制垂体促性腺激素的分泌,导致卵巢分泌的性激素减少,造成体内低雌激素状态。结果显示,子宫内膜异位症患者确实上调了Treg细胞,未治疗组相比于对照组,Treg细胞百分比明显升高,但经过GnRH-a治疗后,伴随雌二醇的下降,治疗组的Treg细胞百分比也明显降低,而且,诱导Treg细胞的TGF-β、PGE-2的炎症因子也出现下降,因此我们认为子宫内膜异位症患者腹腔存在炎症,Treg细胞的上调可能与其诱导的炎症因子的升高有关。

研究发现,子宫内膜异位症表现为炎症性疾病,患者腹腔表达TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、VEGF、TGF-β、PGE-2等许多炎症因子[7,8]。对于炎症因子出现的原因,我们认为这与异位内膜出血引起的炎症有关,异位内膜出血后囊壁压力增大,反复形成破裂口,破裂后的囊内容物刺激腹膜和卵巢,形成炎症,周期性出血强化了这一作用,并一直持续,形成了永不愈合的伤口(此话原本是用来描述肿瘤的[9],用来描述子宫内膜异位症可能更合适)。

然而,炎症激活之后,机体会实施免疫调节[10],免疫抑制相伴发生,形成抗炎反应抑制炎症,炎症和抗炎相继出现、相伴发生,Treg细胞作为典型的免疫抑制抗炎细胞,这可能是子宫内膜异位症激活炎症后,Treg细胞随后上调的原因。

这一现象也见于肿瘤,研究显示肿瘤虽存在免疫抑制,但在使用免疫调节的CTLA-4、PD-1治疗后,只有少数患者有效,多数患者疗效不明显[11,12,13],这一结果提示免疫抑制和肿瘤发生有一定关系,但关系可能不充分,究其原因,我们认为这可能也和免疫调节有关,肿瘤组织因为血管生长不协调,特别是生长较快的恶性肿瘤,不能及时供应营养,会出现缺氧或坏死,引起损伤性炎症,如出现TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、VEGF、TGF-β等[14,15],炎症激活后实施免疫调节,免疫抑制出现,免疫抑制细胞继发性聚集,但这种免疫抑制细胞的聚集在肿瘤发生之后。肿瘤发生与免疫抑制之间的因果关系不充分,这可能是肿瘤在解除免疫抑制后,因多数肿瘤来源于自身,突变负荷量不大,肿瘤抗原不强,免疫治疗效果不明显的原因。

使用GnRH-a治疗子宫内膜异位症,雌激素下降,子宫内膜萎缩或凋亡,无周期性出血,炎症反应减弱,同时,抗炎反应也减弱,Treg细胞开始下降,这可能是使用GnRH-a治疗后,Treg细胞下降的原因。

综上所述,我们认为子宫内膜异位症Treg细胞的上调可能是继发于炎症的免疫调节事件,与其诱导的炎症因子有关。


参考文献:

[4]吴晶晶,陈雄,黄娟.RORyt、Foxp3在子宫内膜异位症组织中的表达及意义[J].山东医药,2015,41(55):77-78.

[5]李素红,冯春蝶,付秀虹Treg细胞及Foxp3在子宫内膜异位症患者的表达及临床意义[J].中国计划生育和妇产科,2014,4(6):43-46.

[6]丰有吉,沈铿.妇产科学[M].第1版,北京:人民卫生出版社,2005:361.

[10]曹雪涛,何维.医学免疫学[M].第3版,北京:人民卫生出版社,2015:240-250.


文章来源:朱义保,吴斐,万磊.子宫内膜异位症Treg细胞上调的机制研究[J].实用癌症杂志,2022,37(04):528-531.

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