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B7-H5在慢性乙型肝炎及HBV相关肝癌患者中的表达及临床意义

2025-06-19 61 上传者：管理员

摘要：目的探讨B7-H5在慢性乙型肝炎及乙型肝炎病毒(HBV)相关肝癌患者中的表达及临床意义。方法通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2023年3月至2024年7月在南京大学医学院附属苏州医院检验科收集的慢性乙型肝炎(CHB组，104例)患者、HBV相关肝癌患者(肝癌组，28例)及体检健康者(对照组，35例)血清标本的B7-H5水平，分析其差异性、相关性及诊断价值。结果肝癌组、CHB组及对照组血清B7-H5水平从高到低依次是肝癌组、CHB组、对照组，差异均有统计学意义(P<0.05);HBV-DNA阴性的CHB患者B7-H5水平显著高于对照组(P<0.01);慢性乙型肝炎患者B7-H5水平与HBV-DNA载量呈正相关(P<0.05),肝癌组患者B7-H5水平与HBsAg、HBeAg、AFP水平呈正相关(P<0.05);B7-H5对慢性乙型肝炎及HBV相关肝癌均有一定诊断价值，其中对HBV相关肝癌的诊断价值高于CHB;肝癌组患者手术后的B7-H5水平显著低于手术前(P<0.05)。结论血清B7-H5与CHB及HBV相关肝癌疾病的进展有关，可作为CHB与HBV相关肝癌的辅助诊断及术后病情判断的有效检测指标。

关键词：
B7-H5
CHB
乙型肝炎病毒相关肝癌
慢性乙型肝炎
肝纤维化
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乙型肝炎病毒(HBV)感染仍然是影响全球健康的重要因素,影响全世界约3.16亿人[1],HBV若不能及时清除,会进一步发展成慢性乙型肝炎(CHB),可能导致进行性肝纤维化,甚至造成肝硬化终末期肝病并显著增加肝细胞癌的风险[2]｡然而,单独的抗病毒药物并不能直接靶向共价闭合环状DNA(cccDNA),在停止核苷(酸)类似物后,HBV往往会重新激活[3],尽管在大多数患者中实现了抑制HBV复制的作用,但长期抗病毒治疗很少实现乙型肝炎表面抗原(HBsAg)消失和血清学转换[4],因此HBV感染的复发成了CHB及HBV相关肝癌诊疗的难题,寻求一种有效的检测标志物及治疗靶点具有重要的意义｡

众所周知,T细胞是抗感染及抗肿瘤免疫的主要效应细胞,而T细胞的活化是由先天免疫系统通过正､负共刺激分子调控的[5-6],其中B7家族发挥至关重要的作用[7-9]｡它属于免疫球蛋白超家族,通过与CD28受体家族结合从而发挥共刺激作用[10-11],在肿瘤免疫､感染免疫､移植免疫及自身免疫性疾病等方面都具有重要意义[12-14]｡B7-H5是一种新型的免疫检查点调节因子,又称VISTA,它在免疫应答中发挥双重作用,一方面通过与T细胞上的CD28H受体结合发挥协同刺激作用[15],另一方面与人类杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIR3DL3结合抑制T细胞应答[16]｡有研究表明,B7-H5在结肠直肠癌､胃癌､胰腺癌､皮肤鳞状细胞癌等肿瘤中呈高表达[17-19]｡然而,B7-H5在HBV抗感染免疫中的作用仍不清楚,因此本研究旨在探讨B7-H5在CHB及HBV相关肝癌患者中的表达及临床意义｡

1、资料与方法

1.1一般资料本研究于2023年3月至2024年7月在南京大学医学院附属苏州医院检验科收集104例CHB患者(CHB组)及28例HBV相关肝癌(肝癌组)患者的血清标本｡CHB组男62例,女42例,年龄39~68岁,平均(51.2±7.1)岁｡CHB患者的诊断均符合国家卫生健康委发布的《乙型肝炎诊断标准(WS/T299-2022)》,均未合并肝硬化,排除艾滋病患者和其他肝炎病毒感染者,并排除血液系统疾病患者及妊娠或哺乳期女性等｡肝癌组男16例,女12例,年龄43~66岁,平均(54.0±6.6)岁｡所有肝癌患者的诊断符合《原发性肝癌诊疗规范(2019年版)》中的诊断标准,并排除合并其他肝炎病毒感染及其他器质性疾病或恶性肿瘤患者｡另收集同期35例体检健康者作为对照组,其中男21例,女14例,年龄36~63岁,平均(50.3±6.9)岁｡3组性别､年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05)｡所有参与者对本研究知情同意｡本研究经医院伦理委员会审批通过(伦理审查编号:IRB202212004RI)｡

1.2方法

1.2.1血清B7-H5水平检测取出-80℃冰箱保存的血清标本,待标本解冻后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测B7-H5水平,操作步骤根据人B7-H5ELISA试剂盒(旭光科星抗体生物,苏州)说明书进行,试剂盒的检测范围为31.25~2000.00pg/mL,敏感度为8pg/mL,重复性为板内板间变异系数均小于5%｡使用SUNRISE酶标仪读取各孔吸光度值,通过ELISACalc软件绘制标准曲线并计算各标本B7-H5水平｡

1.2.2血清HBsAg､乙型肝炎e抗原(HBeAg)､HBVDNA载量､丙氨酸氨基转移酶(ALT)及甲胎蛋白(AFP)水平检测采用HBsAg和HBeAg检测试剂盒(磁微粒化学发光法,安图生物,郑州)进行血清HBsAg､HBeAg定量检测,使用ALT测定试剂盒(速率法,世诺临床诊断,日本)进行血清ALT水平检测,使用AFP检测试剂盒(电化学发光法,罗氏诊断,上海)进行血清AFP水平检测;使用HBV核酸测定试剂盒(PCR-荧光探针法,圣湘生物,湖南)进行HBVDNA定量检测｡

1.3统计学处理采用SPSS22.0及GraphPadPrism6.0软件对数据进行统计分析,血清B7-H5水平､HBV-DNA定量呈偏态分布,采用Kruskal-WallisH检验比较3组间B7-H5水平的差异,采用MannWhitneyU检验比较两组B7-H5水平的差异｡采用Spearman相关性分析比较B7-H5水平与临床参数的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析B7-H5对CHB､HBV相关肝癌的诊断价值｡以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1肝癌组､CHB组及对照组血清B7-H5水平比较肝癌组､CHB组､对照组血清B7-H5水平从高到低依次为肝癌组､CHB组､对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),说明B7-H5在CHB组及肝癌组患者血清中呈高表达,在肝癌组患者血清中表达水平最高｡HBV-DNA定量阴性的CHB组患者血清B7-H5水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)｡见图1｡

图1肝癌组､CHB组及对照组血清B7-H5水平比较

2.2CHB组､肝癌组患者B7-H5水平与临床参数的相关性CHB组患者B7-H5水平与年龄､HBsAg､HBeAg､ALT水平无相关性(r=0.061､-0.062､-0.117､0.036,均P>0.05),与HBV-DNA载量呈正相关(r=0.297,P=0.019);肝癌组患者B7-H5水平与年龄､HBV-DNA载量及ALT水平无相关性(r=0.097､0.126､0.105,均P>0.05),与HBsAg､HBeAg､AFP水平呈正相关(r=0.381､0.512､0.394,P=0.046､0.005､0.038)｡

2.3B7-H5对CHB及肝癌组的诊断价值ROC曲线分析结果显示,B7-H5诊断CHB组的曲线下面积(AUC)为0.656,B7-H5诊断肝癌组的AUC为0.789,提示B7-H5对CHB及HBV相关肝癌均有一定诊断价值,并且B7-H5对HBV相关肝癌的诊断价值高于CHB｡见图2｡

图2B7-H5水平对CHB及HBV相关肝癌的诊断价值

2.4肝癌组患者手术前后血清B7-H5水平比较肝癌组患者手术前后血清B7-H5水平比较,手术后血清B7-H5水平为显著低于手术前,差异有统计学意义(Z=-2.357,P=0.018)｡见图3｡

图3肝癌组患者手术前后血清B7-H5水平比较

3、讨论

B7-H5作为负性共刺激分子参与阻断抗肿瘤免疫及抑制肿瘤微环境受损[20],然而其在CHB及HBV相关肝癌中的作用尚不清楚,本研究通过检测血清B7-H5水平,进一步探讨其对疾病诊断及治疗预后的临床意义｡本研究结果发现,B7-H5在对照组､CHB组患者､肝癌组患者血清中的表达差异有统计学意义(P<0.05),其在肝癌组患者中的水平升高最为显著,表明B7-H5在CHB及HBV相关肝癌中发挥重要作用,且水平随着HBV感染的疾病进程而升高,说明B7-H5可能与HBV感染期间机体的免疫应答下调有关,也进一步体现了其在抗肿瘤､抗感染免疫应答过程中的负性调节作用[21],为CHB及HBV相关肝癌的免疫治疗提供新的方向｡

值得注意的是,本研究发现HBV-DNA阴性的CHB患者体内的B7-H5水平显著高于对照组,且CHB患者的B7-H5水平与HBV-DNA载量呈正相关,表明随着HBV载量增加B7-H5也呈高表达,同样也体现了B7-H5在抗HBV感染免疫中的负性作用｡然而在肝癌组患者体内B7-H5水平与HBVDNA载量未显出相关性,可能是由于目前标本量有限,与收集的肝癌组患者的HBV-DNA载量差异较小有关,后续会增加不同核酸载量的肝癌组标本继续分析统计｡众所周知,HBV-DNA是感染治疗监测的常用分子标志物[22],它能较准确地反映HBV在患者体内的病毒载量,但是并不能直接反映患者自身的抗感染能力,所以B7-H5在HBV-DNA阴性CHB患者中的高表达突出其检测价值｡并且有研究发现聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)诱导HBsAg血清清除的CHB患者中,肝内HBsAg仍为阳性[23],这一现象增加了HBV感染的复发风险,所以在CHB患者治疗过程中,除HBsAg､HBeAg､HBV-DNA､ALT等检测指标,停药前增加血清B7-H5水平检测可能会降低HBV感染复发的风险,因此B7-H5在CHB临床用药方面可能也具有重要的指导作用｡

本研究ROC曲线分析显示,B7-H5对CHB及HBV相关肝癌均具有诊断价值,其中对HBV相关肝癌的诊断价值更高,说明B7-H5可以作为CHB及HBV相关肝癌的辅助诊断标志物,结合其表达水平随着疾病进程逐步升高的现象,进一步证实B7-H5与HBV感染的病情发展及严重程度有关｡此外,本研究发现肝癌组患者B7-H5水平与HBsAg､HBeAg和AFP水平呈正相关,已知AFP是临床检测原发性肝癌的常用生化标志物,但其敏感性较差[24],对于早期肝癌的检测缺乏优势,增加B7-H5水平的检测也许能提高原发性肝癌的检出率,有利于临床及时干预和治疗从而提高患者的生存率｡本研究还发现,HBV相关肝癌患者手术后的B7-H5水平明显低于手术前(P<0.05),可能与其促进肿瘤细胞的增殖有关[25],进一步说明了B7-H5是HBV相关肝癌的诊断和术后病情判断较好的检测指标｡

综上所述,B7-H5与CHB及HBV相关肝癌疾病的进展有关,可以被认为是CHB与HBV相关肝癌的辅助诊断及术后病情判断的有效检测指标｡当然,关于B7-H5后续还需要更深入的研究:第一,B7-H5指导CHB患者用药方面的作用还需进一步验证;第二,B7-H5对于患者治疗预后方面的影响也需要继续跟踪回访;第三,B7-H5针对HBV相关肝癌的影响价值需要增大标本量继续分析总结｡此次研究也希望能为CHB及HBV相关肝癌的免疫治疗提供新型的治疗靶点｡

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基金资助:苏州市科技发展计划(医疗卫生科技创新)项目(SKY2021032);

文章来源:赵晨,严茹红,张长松,等.B7-H5在慢性乙型肝炎及HBV相关肝癌患者中的表达及临床意义[J].国际检验医学杂志,2025,46(11):1325-1328+1335.