观察胸腔热灌注对兔急性肺损伤中C反应蛋白的影响

2021-10-26 123 上传者：管理员

摘要：目的观察胸腔热灌注(IHP)对兔急性肺损伤(ALI)中C反应蛋白(CRP)的影响。方法选取新西兰大白兔31只,随机分为假撞击组(A)、胸部撞击组(B)、撞击+35度灌洗组(C)和撞击+43度热灌注组(D),垂直撞击右侧胸部,造成ALI,行IHP观察CRP的影响。结果IHP后6和12小时,4组CRP分别是A组(0.97±0.16和0.91±0.13),B组(15.42±0.29和2.73±0.19),C组(14.53±0.21和9.34±0.17),D组(11.72±0.19和11.35±0.24)。D组CRP与B组比较,差异有统计学意义(P<0.01),与C组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对胸部撞击致兔ALI,IHP的CRP明显降低,减轻了炎症反应,为IHP对ALI的治疗提供理论依据。

关键词：
C反应蛋白
急性肺损伤
炎症
肺水肿程度
胸腔热灌注
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随着各种车辆的逐年增多，交通事故胸部撞击所致的急性肺损伤（Acute lung injury,ALI），也较为常见和多发，严重影响患者的生命及生存质量，是外伤及临床重症监护病人主要的死亡原因,迄今尚无有效治疗ALI的方法。胸腔热灌注(Intrapleural hyperthermic perfusion,IHP)是胸腔内予43℃热生理盐水灌注，抑制炎症反应，提高免疫应答，对ALI具有保护作用。设计IHP对胸部撞击致兔ALI的影响，并观察C反应蛋白（C-Reactive Protein,CRP）的变化，有利于IHP治疗兔ALI的炎症反应。

1、材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物：

新西兰大白兔31只(宁波大学实验动物中心提供),体重(2.95±0.37)kg,雌雄不拘，按国际实验动物饲养标准，全组实验兔健康。

1.1.2仪器和试剂：

自制垂直胸部撞击固定支架。测定CRP，试剂盒酶联免疫分析（ELISA）试剂盒（双抗体夹心法），灵敏度为0.1μg/ml。

1.2方法：

随机分组用SPSS程序，随机序列隐藏的随机分组，随机选取新西兰大白兔31只。实验设计类型为成组设计。A组(7只)：胸部撞击（-）胸腔灌注（-）；B组(8只)：胸部撞击（+）胸腔灌注（-）；C组(8只)：胸部撞击（+）胸腔灌注（+35度生理盐水灌洗）；D组(8只)：胸部撞击（+）胸腔灌注（+43度热生理盐水灌洗）

使用1.5%戊巴比妥钠1ml/kg行兔耳缘静脉麻醉，撞击物在自制的垂直胸部撞击固定支架上，以自由落体的方式，呼气末准静态撞击实验兔右侧胸部（右锁骨中线第四肋间）。股动脉采集动脉血1ml后，立即使用i-STAT携带式手持血液分析仪检测Pa O2、Pa CO2值，动脉血氧合指数(Pa O2/Fi O2)≤300mm Hg，达到急性肺损伤模型标准。

造模成功后右侧胸腔穿刺留置胸管，每1小时行右侧胸腔热/非热灌注（每次灌注10～20ml，热灌注液为43℃热生理盐水，非热灌注液为35℃生理盐水，灌注持续时间0.5小时，造模后12小时共胸腔灌注6次）。

1.3观察指标：

(1)氧和指数：CRP于垂直胸部撞击前，经股动脉置管采集动脉血1ml,用血气分析仪即刻测定Pa O2、Pa CO2值,记录氧合指数(Pa O2/Fi O2)。造模后6,12小时，分别经股动脉置管处采集动脉血1ml,用血气分析仪即刻测定Pa O2、Pa CO2值,记录氧合指数(Pa O2/Fi O2)。CRP：于胸部撞击前，灌注后6,12小时，分别测定实验兔CRP数值（μg/ml）并记录。(2)测定肺干重/湿重比值：取左肺标本吸净表面液体,分析天平测量肺湿重,电烤箱(80℃)供干,至重量不变时得肺干重,判断肺水肿程度。肺干重/肺湿重×100%=肺干重/湿重比值。(3)肺组织病理形态学观察及急性肺损伤病理评分：右肺组织用甲醛溶液固定48小时后,常规脱水、包埋、苏木素伊红染色，光镜下观察肺组织病理形态变化。采用Mikaw等的方法进行肺损伤评分,累加各项评分为急性肺损伤的病理评分。

1.4统计学方法和计算：

统计学JADAD量表为4分。其中统计学的随机分组，分配隐蔽，样本含量估计，ITT分析等，由第三方完成。

数据处理应用SPSS 17.0软件和SNPAlyze V7.0软件。计数资料比较使用四格表χ2检验。计量资料采用均数±标准差(±s)表示,各组间均数比较为配对t检验或方差分析。检验水准为α=0.05,P<0.05差异有统计学意义。

2、结果

2.1四组实验兔损伤程度观察指标比较显示胸部撞击+热灌注组（D组），在损伤评分和病理评分无差异的情况下，肺干湿比明显高于胸部撞击组（B组）和胸部撞击+常温灌注组（C组）。见表1。

2.2四组实验兔氧合指数比较显示胸部撞击+热灌注组（D组），胸腔热灌注后6和12小时，氧合指数明显高于胸部撞击组（B组）和胸部撞击+常温灌注组（C组）。见表2。

2.3四组实验兔C反应蛋白（CRP）比较显示，胸部撞击+热灌注组（D组），胸腔热灌注后6和12小时，C反应蛋白（CRP）明显低于胸部撞击组（B组）和胸部撞击+常温灌注组（C组）。见表3。

2.4病理学改变：双侧肺可有肋骨压迹，表面可见大小不等散在红色斑片，肺组织体积增大实变。切面呈部分肺泡壁变薄，肺泡扩张严重至部分破裂，可见大量红细胞分在在组织各部分。气管周围有炎症细胞浸润，肺动脉壁及支气管壁明显增厚，血管平滑肌增生。除假撞击组（A组）外，胸部撞击+热灌注组（D组）的炎症细胞浸润明显少于胸部撞击组（B组）和胸部撞击+常温灌注组（C组）。

3、讨论

胸部撞击致急ALI无论由交通事故或高处坠落，均较为常见，在胸部创伤中均占有非常重要的地位，是肺组织失控性炎症反应的结果[1,2,3,4,5]。CRP是由活化巨细胞分泌的细胞因子刺激肝细胞产生的急性时相反应蛋白，常作为炎症、组织损伤程度以及治疗效果的指标[3,4,5,6,7,8]。ALI现有的临床治疗多局限于支持治疗，迄今尚无有效治疗的方法。胸腔热灌注(IHP)是胸腔内予43℃热生理盐水灌注，通过启动热休克蛋白的表达，抑制炎症反应，提高免疫应答，在恶性肿瘤的临床治疗上已经取得了良好的效果。适度的热应激可以提高机体对损伤的抵抗能力，对ALI具有保护作用[4,5,6,7]。IHP后6和12小时，在创伤相同的情况下，和胸部撞击组比较，IHP明显降低兔CRP，减轻了炎症反应，为进一步研究IHP治疗ALI创造了条件，有利于治疗胸部撞击致ALI及其继发性炎症反应的基础研究。但还需要观察IHP对其他炎性细胞因子的变化，对炎症信号通路的影响，并延长实验观察时间，为IHP治疗ALI炎症反应提供理论依据。

表1四组实验兔损伤程度观察指标比较

表2四组实验兔氧合指数比较

表3四组实验兔C反应蛋白（CRP）比较

参考文献：

[2]徐薇涵.张立泽,李欣,等.黄芩素调控热休克蛋白70表达对溃疡性结肠炎大鼠的影响.[J]中国临床药理学杂志,2020,36(1):36-38.

[4]陈超蕾,林雨婷,张桑桑,等GPC3-WNT-JNK通路介导脂多糖诱导肺局部细胞炎症[J] .温州医科大学学报,2019, 49(10):703-711.

[6]王立,杜萍,古丽尼格尔.吐尔逊,等胸部垂直撞击致兔急性肺损伤中C反应蛋白的变化[J]中华实验外科杂志,2013.11(30):2349-235.

文章来源：王立,张裕祥,尚文军,应俊杰,丁东晓,陈忠杰,许春春.兔急性肺损伤中胸腔热灌注对C反应蛋白的影响[J].浙江创伤外科,2021,26(04):623-625.