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标本处理方法对甲状旁腺激素检测的影响

2020-10-09 844 上传者：管理员

摘要：目的：探讨不同的血液标本及处理方法在日本东曹AIA2000全自动化学发光分析仪上测定甲状旁腺激素（PTH）水平的差异，以选择合适的上机标本类型及处理办法。方法：用血清管、肝素抗凝管（肝素管）、乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝管（EDTA管）3种不同的真空采血管采集同一患者血液，每一患者每种试管各采3管，共10例患者纳入研究，均在2h内测定iPTH水平；然后分3组，每组每例患者3种试管各一管，一组放于冷藏2～8℃，一组放冷冻-18～-22℃（分离血清或血浆），分别在第一次检测后8、24h及72h测定；另外一组，放于室温（18～25℃），分别在第一次测定后2、4、8、24h进行检测；最后对所有数据进行统计分析。结果：所有标本在2h内的测定结果，血清管与EDTA管、肝素管与EDTA管比较差异均无统计学意义（P>0.05）。血清管的结果在室温、冷藏下均随着时间的推移逐渐降低，2、4、8、24h的检测结果与0h比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。肝素管的结果在室温下4h内结果差异无统计学意义（P>0.05),8h后结果下降，8、24h的检测结果与0h比较，差异有统计学意义（P<0.05）；肝素管在冷藏下72h内结果稳定性较好，8、24、72h的检测结果与0h比较，差异无统计学意义（P>0.05）。EDTA管的结果在室温下24h内结果差异无统计学意义（P>0.05），在冷藏下72h内结果差异无统计学意义（P>0.05）。血清管、EDTA管和肝素管在冷冻保存下，8、24、72h的检测结果均较0h降低，差异均有统计学意义（P<0.05），但是在冷冻8h后，随着时间增加降低效果不明显。结论：在日本东曹AIA2000全自动化学发光分析仪上测定PTH最好使用EDTA抗凝标本，如果使用肝素标本，需放于2～8℃保存，可保存72h，血清标本则必须在2h内尽快进行测定分析。

关键词：
临床检验
抗凝剂
标本处理
标本类型
甲状旁腺激素
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甲状旁腺激素（PTH）在甲状旁腺合成，并分泌到血液中。完整甲状旁腺激素（iPTH）是含有84个氨基酸的单个直链多肽，相对分子质量约为9500；其生物活性决定于N端的第1～27个氨基酸残基；生物活性N-端片段的半衰期仅有几分钟。iPTH的选择性测定可直接判定甲状旁腺的分泌能力[1,2,3]。血液中PTH存在3种形式[4]:(1)iPTH(1～84），具有生物活性，占5%～20%，半衰期非常短（2～4min);(2）羧基端PTH片段，无生物活性，如PTH(36～84）、PTH(44～84）、PTH(49～84）、PTH(53～84）等，占75%～95%，半衰期可达25～60min;(3）氨基端PTH片段，有生物活性，如PTH(1～34），血中水平较低，半衰期亦短。《全国临床检验操作规程》[5]推荐使用血清检测；世界卫生组织（WHO）文件[6]则推荐使用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝血浆检测，但针对不同的机型，也可使用或限制性使用血清、肝素抗凝血浆和枸橼酸钠抗凝血浆。本院使用日本东曹AIA2000全自动化学发光分析仪，在测定PTH的说明书上要求使用血清或者EDTA抗凝血浆。由于笔者曾遇到过因质控保存问题导致结果失控的事件，后来在文献中发现标本保存对其结果存在影响，为了明确标本类型及保存条件对PTH检测结果的影响，特设计此试验进行验证。

1、资料与方法

1.1标本来源

选择2019年3-7月在本院就诊的10例患者，所取标本的iPTH结果覆盖本仪器测定的线性范围（0～1000pg/mL）高中低值。

1.2仪器与试剂

日本东曹AIA2000全自动化学发光分析仪及其配套的iPTH检测试剂（批号：I9R5217）及校准品（批号：200520646180000），质控品采用美国伯乐公司生产的内分泌质控品（批号：54640）双水平，采血管采用成都瑞琦科技实业有限公司生产的血清管（黄管）、EDTA管（紫管）、肝素管（绿管），所有试管、试剂、定标液、质控品均在有效期内。

1.3方法

仪器处于稳定状态，所有测试与患者标本同时检测，在检测过程中，两水平质控CV值均低于8%(1/3个最大允许误差25%）。所有标本在采集后2h内进行初次检测，每例患者采集9管血液，每种试管各3管，分为3组，每组包括每例患者每种试管各一管，一组冷藏（2～8℃，平均温度4.9℃）保存，一组冷冻（-18～-22℃，平均温度-21℃）保存，测定时间均为0、8、24、72h；一组室温（18～25℃）保存，测定时间为0、2、4、8、24h。

1.4统计学处理

采用SPSS19.0对数据进行处理及统计分析，非正态分布的计量资料以M(P25～P75）表示，组间比较均采用非参数秩和检验；正态分布的计量资料以±s表述，组间比较采用t检验；以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1各种试管0h结果比较

以试剂说明书及WHO推荐的EDTA抗凝管作为标准管进行比较。所有标本0h(2h内）测定结果的比较时，血清管、肝素管分别与EDTA管之间的结果比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1血清及不同抗凝剂0h(2h内测定结果）所测PTH结果比较

2.2室温保存结果

血清管检测结果随着时间的推移，iPTH检测结果逐渐降低，2、4、8、24h的检测结果与0h比较，差异均有统计学意义（P<0.05），放置24h后，结果降低幅度达22.56%。EDTA管检测结果随时间推移变化不大，2、4、8、24h的检测结果与0h比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。肝素管检测结果在4h内结果稳定，8、24h的检测结果与0h比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2室温保存中血清及不同抗凝剂所测iPTH结果的比较及变化情况

2.3冷藏保存结果

血清管随时间的推移逐渐降低，8、24、72hiPTH的检测结果与0h比较，差异均有统计学意义（P<0.05），放置72h后，结果降低幅度达23.35%，从结果上显示冷藏降低的幅度略低于室温，24h达15.98%;EDTA管和肝素管在冷藏下72h内结果稳定性较好，8、24、72h的检测结果与0h比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。

表3冷藏（2～8℃）血清及不同抗凝剂所测iPTH结果的比较及变化情况

2.4冷冻保存结果

血清管、EDTA管和肝素管在冷冻保存下，8、24、72hiPTH的检测结果均较0h降低，差异均有统计学意义（P<0.05），但是在冷冻8h后，随着时间增加降低效果不明显。见表4。

表4冷冻（-18～-22℃）血清及不同抗凝剂所测iPTH结果的比较及变化情况

3、讨论

PTH调节钙磷代谢，是维持机体钙平衡的主要激素，其分泌水平影响着血钙和血磷水平，促使血钙水平升高，血磷水平下降[7,8]。PTH作用的主要靶器官是骨和肾脏，其主要是通过促进肾小管对钙离子的重吸收和磷酸盐的排泄，使血钙水平增加和血磷水平下降。血清中PTH水平过低导致低钙血症，低钙血症导致的症状包括肌肉痉挛、手足抽搐，影响心功能，甚至引起心肌损伤，并有报告显示PTH导致的钙离子平衡紊乱与高血压相关。PTH通过抑制近端肾小管磷酸钠协同转运蛋白增加肾脏排磷，其缺乏可引起高磷血症、甲状旁腺功能亢进等，可造成肾性骨病、周围神经系统改变以及顽固性的皮肤问题等，对患者的生命质量造成影响。因此，准确测量PTH水平对于采取何种治疗，以及对治疗的效果进行评估都非常重要。检验科的责任就是为临床提供真实、可靠的检验指标，为其诊疗提供指导和帮助，而分析前的因素对检验准确性影响巨大，检验人员必须严格控制这些因素，降低这些因素带来的危害，为患者为临床提供一份高质量的检验报告。

PTH的检测最早使用放射免疫分析法，由于放免方法的污染性强，现在基本试剂厂家均采用化学发光法进行检测。本科室的日本东曹AIA2000全自动化学发光分析仪采用双抗体夹心的方法测定血清中iPTH，该片段为活性成分，但是半衰期较短，因此标本的保存处理将会大大地影响结果。通过本次研究，笔者发现该公司检测试剂的最佳抗凝剂与WHO推荐的使用EDTA抗凝管[6]相符，EDTA抗凝血清在室温（18～25℃）及冷藏（2～8℃）的稳定时间可以达到72h，与之前王春雷[9]的研究结果基本相符，也可以使用肝素抗凝，虽然冷藏（2～8℃）稳定时间可达到72h，但是在室温时，4h内尚稳定，8h后下降明显，可能是随着时间的推移，部分iPTH与肝素非特异性结合导致[10]；对于血清管，在放置2h结果就已经开始下降大约4%，并且随后成倍降低，24h就降低高达20%；原因可能为血标本在凝固时释放某些物质加速了iPTH的降解，而EDTA和肝素可以维持完整iPTH的稳定，降低其降解速度。虽然不同厂家在检测具体物质方面可能存在差异，但是通过本研究发现，对于检测完整的iPTH片段来说，最好使用ED-TA或者肝素抗凝，而且在标本采集后应尽快离心检验，如果不能及时检验，可以放置于2～8℃冰箱内，可以稳定72h，最好不要分装冻存。

参考文献：

[1]张萌萌.甲状旁腺素的生物学研究与成骨作用[J].中国骨质疏松杂志,2017,12(23):1648-1653.

[2]邱丹丹,蒋松.慢性肾脏病甲状旁腺激素代谢异常的研究进展[J].肾脏病与透析肾移植杂志,2017,26(2):174-178.

[3]秦辛玲,石青峰.甲状旁腺激素检测的临床应用进展[J].医学理论与实践,2018,31(23):3498-3500.

[5]尚红,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].4版.北京:人民卫生出版社,2015:137.

[7]朱建明,黄建平.甲状旁腺功能减退症的激素替代治疗进展[J].医药导报,2017,36(A1):59-61.

[8]陈澎涛.甲状腺全切手术后患者甲状旁腺激素和血钙的水平变化[J].上海医药,2017,38(13):45-47.

[9]王春雷.标本不同处理方法对全段甲状旁腺激素测定的影响[J].国际检验医学杂志,2015,36(23):3467-3468.

王路长,魏晓玲,贺晨,游婷,胡莹.标本处理方法对甲状旁腺激素检测的影响[J].检验医学与临床,2020,17(18):2661-2664.