摘要:目的探讨血清长链非编码RNATapSAKI对肾结石患者术后并发症的预测价值。方法收集2020年5月至2021年4月辽健集团铁煤总医院收治的103例肾结石患者为研究对象,根据术后患者是否出现并发症将其分为并发症组(n=28)和无并发症组(n=75),并于同期随机选取60例健康体检者为对照组。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测病例组术前及对照组血清LncRNATapSAKI水平,酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平。采用Pearson积矩相关分析血清LncRNATapSAKI与TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清LncRNATapSAKI对术后并发症的预测价值。结果肾结石患者术后14d内并发症发病率为27.18%(23/103)。并发症组、无并发症组血清LncRNATapSAKI及TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1水平高于对照组,且并发症组高于无并发症组(P<0.05)。经Pearson积矩相关分析,肾结石患者血清LncRNATapSAKI与TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1均呈正相关性(r=0.537、0.622、0.596、0.608,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清LncRNATapSAKI预测术后并发症的AUC为0.835,临界值为1.92,灵敏度、特异性分别为0.87、0.82。结论血清LncRNATapSAKI表达上调是肾结石患者术后并发症独立危险因素,早期检测可作为预测术后并发症的指标。
肾结石是指机体代谢异常、尿路病变或者药物因素等所致的聚集于肾脏的晶体物质,主要临床症状包括不同程度腰疼、排尿困难、血尿等,好发于男性[1]。肾结石严重时需外科手术治疗,经皮肾镜取石术是目前临床治疗肾结石的主要手段,具有结石清除率高,术后出血少,恢复快等优点[2]。但是,取石术后患者常出现不同程度感染、尿瘘、输尿管损伤等并发症,严重影响患者预后[3]。寻找有效手段提前预测术后并发症发生情况,并制定针对性护理干预措施,对改善患者预后具有重要意义。LncRNATapSAKI属LncRNA家族成员,研究显示[4],其表达上调通过加速肾组织的凋亡而致脓毒症,进而诱发急性肾损伤。我们推测,LncRNATapSAKI可能参与了肾脏疾病的发生、发展,并与预后有关,但是目前鲜见相关报道,本研究通过测定其在肾结石患者中的表达水平,旨在探讨其在肾结石取石术后并发症发生过程中的作用。现报告如下。
1、资料与方法
1.1 一般资料
收集2020年5月至2021年4月辽健集团铁煤总医院收治的行经皮肾镜取石术的肾结石患者103例为研究对象,所有患者均行经皮肾镜取石术,根据术后14d内患者是否出现并发症将其分为并发症组和无并发症组。并于同期随机选取60例健康体检者为对照组。各组研究对象性别、年龄、BMI、FPG等基线资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性,见表1。本研究获得医院伦理委员会的批准,所有患者及家属均签署手术知情同意书。
1.2 选取标准
纳入标准:患者符合《泌尿系统结石诊治指南》[5]中关于肾结石诊断标准;符合经皮肾镜取石术手术指征,且无手术禁忌证;所有患者均完成术后的定期随访,且随访资料齐全。排除标准:心功能障碍及肝功能不全的患者;肾积水、肾小管中毒、各类肾炎等肾脏疾病;患者曾接受过传统开放或者腔镜治疗者;急、慢性炎症反应性疾病以及自身免疫性疾病患者;甲状腺功能亢进、痛风等可能影响本研究结果的疾病;纳入研究前接受过抗凝药物、类固醇类药物治疗者;精神疾病患者及恶性肿瘤患者;孕产妇及哺乳期女性患者。
1.3 方法
1.3.1 经皮肾镜取石术
所有患者均行经皮肾镜取石术治疗,患者全麻后取截石位于手术台上,经输尿管插管后将膀胱镜置入输尿管导管中,并及时调整体位为仰卧位,将腰腹垫高后在手术消毒皮肤表面L11~12间隙做长度≤1cm的微小切口,穿刺定位到肾盏中心,同时结合B超进一步定位穿刺位置并扩张筋膜,经皮建立手术通道后在膀胱镜直视下确定结石位置及大小,大结石(直径>8mm)先使用钬激光将结石击碎,再将其使用钳夹夹出,小结石通过流水冲出或直接取出,最后查看有无残留结石,必要时行留肾造瘘管。
1.3.2 血清炎症因子水平检测
抽取肾结石患者入院次日(术前)清晨空腹肘静脉血5mL,健康体检者于入院当日清晨空腹抽取5mL肘静脉血,血液标本置于含EDTA的抗凝试管中室温下静置1h,以3000r/min的转速离心,离心半径10cm,离心持续时间10min,留取血清并将其分装到两个试管中,在-80℃冰箱中保存,留待检测。其中1管试管采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,相关试剂盒购自于上海瑞番生物科技有限公司,检测仪器为铂金埃尔默企业管理(上海)有限公司提供的EnVision型多功能酶标仪,检测过程严格按照试剂盒上相关说明进行。
1.3.3 血清LncRNATapSAKI水平检测
检测另1试管中的血清LncRNATapSAKI水平,检测方法如下。(1)提取总RNA:在无菌环境下冰上冻融血清,采用TRIzol试剂(焦作路非凡生物科技有限公司,生产批号:JMS12279)提取血清中的总RNA,操作过程参考说明书进行,利用紫外分光光度计测定提取得到的总RNA浓度及纯度,得到OD260/280比值在1.9~2.1的RNA即纯度最高,留存。(2)逆转录合成cDNA:根据QuantiTectReverseTranscription逆转录试剂盒(天津泰泽兴业生物科技有限公司,生产批号:205314)将RNA逆转录合成为cDNA。(3)检测LncRNATapSAKI水平:参考PerfectstartTaqmanqPCRmastermix试剂盒(上海瑶韵生物科技有限公司,生产批号:TQ2301-01)说明,以cDNA为模板进行扩增,GAPDH为内参,其中LncRNATapSAKI上游引物序列为5’-GCCTGGTCAAAGTCCATCC3’,下游引物序列为5’-TAACATAGGTCTCGTCTCT-GCTC-3’,GAPDH上游引物序列为5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’,下游引物序列为5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’,上述引物序列均由上海生工合成。扩增后按照实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)构建20μL反应体系:SYBRPremixExTapⅡ共9μL,cDNA共2μL,正向引物0.8μL,反向引物0.8μL,并加入无酶蒸馏水7.4μL。反应条件设置为95℃预变性60s,循环1次,95℃变性,持续时间20s,60℃退火,持续时间30s,72℃延伸,持续时间20s,上述程序循环36次。LncRNATapSAKI相对表达量采用2-△△CT表示。
1.4 随访
对所有患者术后均进行随访,随访方式为住院复查、出院后的电话和门诊复查,随访时间至少14d以上,随访终点为患者出现感染、出血、输尿管损伤、尿瘘等并发症。
1.5 统计学方法
采用SPSS24.0软件进行数据分析,计量资料用均数±标准差(±s)表示,多组比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验,两组比较采用t检验,计数资料用率表示,比较采用χ2检验,LncRNATapSAKI与炎症因子的相关性采用Pearson积矩相关分析,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,并计算ROC曲线下面积(AUC)评估血清LncRNATapSAKI对肾结石术后并发症的预测价值,P<0.05表示差异有统计学意义。
2、结果
2.1 并发症组并发症发生情况
术后对所有患者进行随访,术后14d内,共有28例患者出现不同程度并发症,其中感染11例,出血12例,输尿管损伤4例,尿瘘1例,术后并发症发病率为27.18%(23/103)。
2.2 各组研究对象血清LncRNATapSAK及炎症因子水平比较
各组研究对象血清LncRNATapSAK及炎症因子水平比较,差异有统计学意义(F=24.835、57.133、79.472、63.328、67.038,P<0.05),两两比较,并发症组、无并发症组血清LncRNATapSAK及炎症因子水平高于对照组,且并发症组高于无并发症组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。
2.3 血清LncRNATapSAK与炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1的相关性
经Pearson积矩相关分析,肾结石患者血清LncRNATapSAK与炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1均呈正相关性(r=0.537、0.622、0.596、0.608,P<0.05),见图1。
2.4 血清LncRNATapSAK对肾结石患者术后并发症的预测价值
绘制ROC曲线评价血清LncRNATapSAK对肾结石患者术后并发症的预测价值,结果显示,血清LncRNATapSAK预测术后并发症的AUC为0.835(95%CI:0.819,0.852,SEAUC=0.029,P<0.001),约登指数0.69,临界值为1.92,敏感度、特异度分别为0.87、0.82,见图2。
3、讨论
LncRNA位于细胞质或核内的长度超过200nt的无蛋白质编码功能的RNA转录本,通过多层次调控染色体转录及转录后蛋白质编码基因的表达而介导细胞的分化、增殖、凋亡,以及器官形成,物质代谢等生理过程,异常表达与感染、免疫反应等密切相关[6]。LncRNA在肾脏病发病过程中的作用尚处在研究初期,研究显示[7],LncRNATCF7通过激活miR-200c表达,可引发内质网应激反应而参与糖尿病肾病的发生、发展过程。Jiang等[8]发现,LncRNAHOTAIR表达上调与miR-34c相互作用共同促进肾组织凋亡,进而介导脓毒症所致的急性肾损伤。Zhang等[9]证实,LncRNACHCHD4P4在肾结石患者中表达上调,其主要机制与促进草酸钙结晶沉积有关。基于上述研究,LncRNA功能的异常改变可能与肾脏疾病密切相关。
LncRNATapSAKI位于人第22号染色体上,研究发现,其在缺氧损伤的肾小管上皮细胞以及内皮细胞中表达丰富,通过转染TapSAKIsiRNA后可抑制TapSAKI表达,进而促进肾小管上皮细胞的增殖并抑制其凋亡[10]。本研究结果显示,肾结石患者血清LncRNATapSAK水平高于健康体检者,并且经皮肾镜取石术后出现并发症的患者血清LncRNATapSAK水平高于无并发症患者,提示该指标参与了肾结石发病过程,并与术后并发症有一定关系。研究还发现肾结石患者TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1水平显著升高,尤其是取石术后出现并发症的患者。相关性分析结果显示,肾结石患者血清LncRNATapSAK与炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1均呈正相关性,上述结果提示,LncRNATapSAK可能通过介导机体炎症反应而参与调控肾结石发病过程,并进一步与术后并发症有关。
其机制可能是:尿液中LncRNATapSAK表达上调导致草酸钙晶体大量沉积,诱发炎症反应,炎症反应又协助晶体通过细胞外基质进入肾间质,加重肾间质炎症反应而促使结石形成,两者协同作用不断加重肾结石病情[11,12];与此同时,加重的炎症反应导致血管腔狭窄,血压升高,并进一步导致血管破裂出血,肾实质脆性增大,而手术过程中容易造成肾实质撕裂,最终引发感染、出血、输尿管损伤等术后并发症[13,14]。绘制ROC曲线表明血清LncRNATapSAK能有效预测术后并发症发生风险,AUC为0.835,敏感度、特异度分别为0.87、0.82,提示术前通过检测血清LncRNATapSAK水平,并以1.92为异常界值,有助于早期预测术后并发症发生风险,从而指导临床制定针对性干预措施,改善患者预后。
综上所述,血清LncRNATapSAK表达上调通过介导机体炎症反应而参与肾结石患者经皮肾镜取石术后并发症的发生过程,早期检测该指标有望辅助临床早期预测术后并发症,从而指导临床治疗。
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文章来源:贾志林.血清LncRNATapSAKI对肾结石患者术后并发症的预测价值[J].中国疗养医学,2022,31(01):23-26.
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