摘要:目的探究银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠催醒的作用。方法 32只昆明种小鼠随机均分为对照组、阿替美唑组、低剂量组及高剂量组。各组小鼠腹腔注射1 mg/kg右美托咪定,90 min后分别注射2 mg/kg阿替美唑、50 mg/kg(低剂量)及100 mg/kg(高剂量)银杏叶提取物,评估小鼠镇静、镇痛水平,并记录苏醒时间。检测各组脑组织中Ca2+、Mg2+-ATP酶、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、鸟苷酸环化酶(cGMP)活性、Orexin A及Orexin B蛋白表达。结果麻醉给药95、120及180 min时,与对照组比较,阿替美唑组和高剂量组镇静、镇痛评分均降低(P<0.05),且麻醉给药180 min时,阿替美唑组和低剂量组镇静、镇痛评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,阿替美唑组和高剂量组苏醒时间缩短(P<0.05),且阿替美唑组苏醒时间短于高剂量组(P<0.05);与对照组比较,阿替美唑组和高剂量组Ca2+、Mg2+-ATP酶活性、NO、NOS、cGMP活性、OrexinA及OrexinB蛋白表达升高(P<0.05)。结论银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠具有催醒作用,可能与提高Ca2+、Mg2+-ATP酶活性、促进NO/cGMP信号转导和Orexin系统有关。
随着各类手术和无痛诊疗技术的不断发展,全身麻醉的应用范围也越来越广泛[1]。右美托咪定是临床常用的麻醉药物,属于高选择性α2-肾上腺素能受体激动剂,尽管右美托咪定在实践中体现出良好的应用价值,但术后对患者循环、呼吸的抑制作用无法立即恢复正常,需要采取必要手段使患者尽快苏醒,以减少相关并发症[2]。阿替美唑是α2-肾上腺素能受体的拮抗剂,具有高效性、高特异性和高专一性的特点,但其临床应用仍需要更多的安全性研究[3]。银杏叶提取物是从银杏叶中分离纯化的提取物,具有抗炎、抗氧化、保护神经、增强记忆等生理活性[4]。本研究旨在探讨银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠催醒作用及其潜在机制。
1、材料和方法
1.1 材料
32只昆明种小鼠,清洁级,雌雄各半,体质量18~22g,购于北京维通利华实验动物技术有限公司,动物许可证号为SCXK(京)2019-0001。银杏叶提取物滴剂(德国威玛舒培博士药厂),右美托咪定(江苏恒瑞医药股份有限公司),阿替美唑(美国辉瑞动物保健品有限公司),Ca2+ATP酶、Mg2+-ATP酶、一氧化氮(nitricoxide,NO)、一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所),鸟苷酸环化酶(guanylatecyclase,cGMP)ELISA试剂盒(上海一基生物试剂有限公司),OrexinA、OrexinB、β-actin蛋白一抗(美国Abcam)。
1.2 动物分组与处理
取32只昆明种小鼠随机分为对照组、阿替美唑组、银杏叶提取物低剂量组(低剂量组)及银杏叶提取物高剂量组(高剂量组),每组8只;各组小鼠腹腔注射1mg/kg右美托咪定,90min后分别注射2mg/kg阿替美唑、50mg/kg及100mg/kg银杏叶提取物,对照组以生理盐水替代。
1.3 镇静、镇痛评估
参照Granholm等[5]评分标准,于右美托咪定给药后90、95、120及180min,对小鼠进行镇静、镇痛评分,其中镇静评分从自主体位(0~4分)、对声音刺激的反应(0~3分)、下颌及舌张力(0~3分)方面进行评估,总分值越高表明镇静效果越好;用钳夹鼠爪进行镇痛评分(0~3分),分值越高表明镇痛效果越好。
1.4 苏醒时间记录
以小鼠翻正反射消失持续时间为苏醒时间。翻正反射消失评估标准为连续3次仰卧后5s无法恢复站立,翻正反射恢复评估标准为连续3次仰卧后可恢复站立[6]。
1.5 取材
各组小鼠苏醒并完成镇静、镇痛评估后断头处死,迅速取出脑组织,放入生理盐水制备组织匀浆液,2000r/m离心10min,分离上清液冻存待测。
1.6 脑组织Ca2+、Mg2+-ATP酶活性、NO、NOS及cGMP含量检测
采用比色法,检测各脑区Ca2+、Mg2+-ATP酶、NO及NOS含量,采用ELISA法检测cGMP含量,蛋白定量后,以每小时每毫克组织蛋白中ATP产生的1mol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。
1.7 脑组织OrexinA和OrexinB蛋白表达检测
采用蛋白印迹法检测脑组织中OrexinA和OrexinB蛋白表达,提取脑组织总蛋白,定量后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,再转移至PVDF膜上,放入封闭液中室温孵育2h,再分别加入OrexinA、OrexinB、β-actin蛋白一抗(1∶1000)4℃下孵育过夜,次日加入辣根过氧化物酶标记的蛋白二抗(1∶5000)室温孵育1h,最后暗室中曝光显影,结果用ImageJ软件进行灰度值定量,计算目标蛋白相对表达量。
1.8 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行分析与处理,计量资料采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2、结果
2.1 银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠镇静、镇痛评分的影响
右美托咪定麻醉90min时,各组镇静、镇痛评分的比较,差异无统计学意义(P>0.05);麻醉给药95、120及180min时,与对照组比较,阿替美唑组和高剂量组镇静、镇痛评分均降低(P<0.05),且麻醉给药95、120及180min时,阿替美唑组和低剂量组镇静、镇痛评分差异有统计学意义(P<0.05;表1)。
2.2 银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠苏醒时间的影响
对照组、阿替美唑组、低剂量组及高剂量组小鼠苏醒时间分别为(90.56±11.84)min、(24.35±5.58)min、(83.62±10.62)min、(42.68±7.14)min,各组苏醒时间差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,阿替美唑组和高剂量组苏醒时间缩短,且阿替美唑组苏醒时间短于高剂量组(P<0.05)。
2.3 银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠脑组织Ca2+、Mg2+-ATP酶活性的影响
与对照组比较,阿替美唑组和高剂量组Ca2+、Mg2+-ATP酶活性升高(P<0.05),阿替美唑组和低剂量组Ca2+、Mg2+-ATP酶活性差异有统计学意义(P<0.05;表2)。
2.4 银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠脑组织NO/cGMP信号通路的影响
与对照组比较,阿替美唑组和高剂量组NO、NOS活性及cGMP水平升高(P<0.05),阿替美唑组和低剂量组NO、NOS活性及cGMP水平差异有统计学意义(P<0.05;表3)。
2.5 银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠脑组织Orexin系统的影响
与对照组比较,阿替美唑组和高剂量组OrexinA和OrexinB蛋白表达明显升高(P<0.05),阿替美唑组和低剂量组OrexinA和OrexinB蛋白表达的比较,差异有统计学意义(P<0.05;图1和表4)。
3、讨论
高龄、电解质紊乱、麻醉药物、体温过低等因素均可引起患者全麻后苏醒延迟[7]。临床使用药物催醒存在一定的不良反应,需要探索高效、安全的催醒手段。银杏叶提取物是目前应用最为广泛的植物药提取物之一,含有黄酮类、萜类内酯、有机酸等多种活性成分,常用于心脑血管疾病的治疗[8]。近期研究表明,银杏叶提取物对患者全身麻醉后认知功能障碍具有防治作用[9]。同时,本课题前期实验发现,对右美托咪定麻醉小鼠注射银杏叶提取物后可加快小鼠的苏醒,但具体机制尚不清楚。苏醒延迟是全身麻醉常见的并发症,本研究以不同剂量银杏叶提取物处理右美托咪定麻醉小鼠,发现高剂量银杏叶提取物可明显降低麻醉小鼠的镇静、镇痛评分,显著缩短其苏醒时间。
ATP酶是一类能将ATP水解为二磷酸腺苷和磷酸根离子的酶,普遍存在于活细胞内,参与物质运输、能量转换、信息传递及维持细胞膜完整等过程[10]。Ca2+、Mg2+-ATP酶是体内的钙离子泵,可维持细胞内低含量的游离Ca2+,其活性水平反映出线粒体功能和能量代谢水平[11]。据报道,麻醉过程中,麻醉药物可引起脑组织突触体Ca2+、Mg2+-ATP酶活性的变化,引起突触内Ca2+含量变化,释放突触前异质性神经递质,阻滞信号转导,发挥麻醉性镇痛作用[12]。本研究结果显示,注射银杏叶提取物后脑组织Ca2+、Mg2+-ATP酶活性明显提高,有利于维持神经细胞内Ca2+含量低稳态,从而降低右美托咪定的镇静、镇痛效果,缩短小鼠苏醒时间。
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综上所述,银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠具有催醒作用,可能与提高Ca2+、Mg2+-ATP酶活性、促进NO/cGMP信号转导和Orexin系统有关,这为临床催醒药物的选择提供了新的思路。
参考文献:
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文章来源:孙睿,王振红,谢欣怡.银杏叶提取物对右美托咪定麻醉小鼠催醒的作用[J].中南医学科学杂志,2022,50(02):198-201.
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2024-01-26人气:14036
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期刊名称:中华神经外科疾病研究杂志
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专业分类:医学
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