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无症状感染者引起的COVID-19疫情的跟踪检测报告

2020-10-14 175 上传者：管理员

摘要：目的分析绵阳市一起由无症状感染者引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的实验室跟踪检测结果,为制定病人及无症状感染者的防治措施、精准施策提供科学依据。方法采用实时荧光定量PCR技术对采集的咽拭子、痰液、粪便及外环境等标本进行新型冠状病毒核酸检测。结果本起疫情共波及92人;发现1例确诊病例、4例无症状感染者,外环境样本1份核酸阳性、2份可疑(N靶标阳性);无症状感染者持续排毒时间长达47天。结论本次疫情以无症状感染者为主,且具有较强传播性。加强病人和无症状感染者的发现与管理,密切接触者的追踪、管理及病原学筛查;加强健康教育宣传,养成良好个人卫生习惯是新型冠状病毒肺炎防控的关键措施。

关键词：
实时荧光定量PCR
措施
新型冠状病毒肺炎
无症状感染者
检测结果
防控
防疫
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2019年12月初,武汉市发生不明原因肺炎疫情,经科研工作者对从病人体内分离出的病毒全基因组测序分析,确定该病原体是一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)[1]。2020年1月30日该疫情被世界卫生组织认定为国际关注的突发公共卫生紧急事件[2],并于2020年2月11日正式将该病命名为新型冠状病毒肺炎)[3]。新型冠状病毒肺炎疫情发生以来,全球累计确诊病例数量和死亡人数持续攀升。截至2020年3月30日,我国累计报告新型冠状病毒肺炎确诊病例81518例(含境外输入723例),累计死亡病例3305例(境外输入0例)[4]。同时,中国以外的207个国家和地区累计报告确诊病例693282例,死亡33106例[5]。随着疫情的蔓延,截至3月30日绵阳市相继发生22例确诊病例,其中2020年2月5日X县人民医院收治1例不明原因肺炎发热病例,经绵阳市疾控中心核酸检测阳性后,确诊为新型冠状病毒肺炎病例。此后,在对病人流行病学调查及密切接触者追踪过程中,陆续发现多名无症状感染者。为明确感染来源、探索对病人及无症状感染者的管控模式、防控疫情蔓延提供参考依据,绵阳市疾控中心在病人治疗、无症状感染者管控过程中多次采样检测。笔者现将跟踪检测结果报告如下。

1、材料与方法

1.1样本来源及种类

2020年2月5日绵阳市X县发生的一起新型冠状病毒肺炎疫情的病例、无症状感染者以及密切接触者的咽拭子、痰液、粪便及外环境等样本。

1.2方法

采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测样本新型冠状病毒核酸,胶体金法检测新型冠状病毒抗体。

1.2.1样本处理

1.2.1.1咽拭子及环境样本56℃60min水浴灭活(用盖板确保样本一直处于液面下),确保样本管拧紧,放入自封袋封口后充分振荡混匀,瞬时离心。

1.2.1.2痰液样本放入自封袋封口后56℃60min水浴灭活(用盖板确保样本一直处于液面下),加入病毒采样液约3ml,确保样本管拧紧,放入自封袋封口后充分振荡混匀(根据实际情况,一般>1min),离心取上清(3500rpm,3～5min。如采于50ml离心管应转移至15ml离心管离心)。

1.2.1.3粪便将样本管装入自封袋封口后于水浴锅内56℃60min水浴灭活(用盖板确保样本一直处于液面下),在15ml离心管中加入2mlTRIzol,打开采样管用一次性接种环挑取0.2g粪便样本(水样便可用带滤膜吸头的移液器吸取200μl水样便)加入已装好TRIzol的离心管中,盖紧盖子后混匀,静置10min取上清液提取核酸。

1.2.2主要试剂与仪器新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒(双重荧光ORF1ab/N),生产厂家:江苏硕世生物科技有限公司。新型冠状病毒(2019-nCoV)抗体检测试剂盒(胶体金法),生产厂家:英诺特(唐山)生物技术公司。检测仪器:罗氏LC480II实时荧光定量PCR仪。

1.2.3检测结果按试剂盒说明书判定。

1.2.4病例分类依据由于新型冠状病毒诊疗方案及防控方案进行过多次更新,本研究采用发布于2020年3月4日的新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)[6]和2020年3月7日的新型冠状病毒肺炎防控方案(第六版)[7]最新版作为确诊病例与无症状感染者分类依据。

2、结果

2.1基本情况

首发病例A,女,57岁,2020年2月1日因“发热、寒战”前往X县某药房自购感冒药(具体药物不祥)。服用3天后,症状未缓解,于2月5日前往X县人民医院就医,经专家会诊诊断为疑似不明原因肺炎病例。X县疾控中心接到X县人民医院报告后立即开展流行病学调查及采集咽拭子样本送绵阳市疾控中心检测,经检测为新型冠状病毒核酸阳性,该病例确诊为新型冠状病毒肺炎病例。后经流行病学调查,本起疫情共涉及92人。截止到2020年3月2日共发现确诊病例A(X县本地人,无外出史)1例,无症状感染者B(女,32岁,武汉1月19日回乡人员)、C(男,50岁,武汉1月19日回乡人员)、D(男,18岁,X县本地人,无外出史)、E(女,51岁,X县本地人,无外出史)4例,无二代确诊病例及无症状感染病例。

2.2本次疫情传播链

本起疫情涉及92人,由武汉回X县无症状感染者B、C引起,B传给确诊病例A和无症状感染者E,C传给无症状感染者D(图1)。

图12020年2月绵阳市X县一起新型冠状病毒肺炎疫情传播关系图

2.3样本检测总体情况

本起疫情采集92人的标本咽拭子、痰液、粪便样本共计264份,发现确诊病例A1例,无症状感染者B、C、D、E共4例;采集无症状感染者C家环境表面样本36份,发现1份环境表面样核酸阳性,2份可疑(单次样品N靶标阳性)。

2.3.1确诊病例及无症状感染者核酸检测情况

2020年2月6日～2020年4月1日间对A、B、C、D、E进行多次核酸样本采集。共采集确诊病例A6次10份核酸检测样本,除首次咽拭子样本阳性外,其余均为阴性;无症状感染者B4次9份样本、无症状感染者C12次24份样本、无症状感染者D10次22份样本、无症状感染者E11次22份样本,4例无症状感染者的咽拭子、痰液均检测到阳性,粪便均未检测到阳性。具体检测结果见表1。

表1确诊病例及无症状感染者病毒核酸跟踪检测情况*

注:*P表示阳性,N表示阴性,/表示未采集标本检测。

2.3.2确诊病例及无症状感染者血清抗体检测情况

本次共采集确诊病例A2次急性期和1次恢复期血清样本,急性期早期IgM和IgG抗体检测呈弱阳性,急性期第2次抗体检测及恢复期抗体检测均为阳性;无症状感染者B1次急性期和1次恢复期血清标本,IgM和IgG抗体检测均为阳性;无症状感染者C2次急性期和2次恢复期血清样本,IgM和IgG抗体检测均为弱阳性;无症状感染者E1次急性期和2次恢复期血清样本,IgM和IgG抗体检测均为阳性;无症状感染者D1次急性期和2次恢复期血清样本,IgM和IgG抗体检测均为阴性(表2)。

表2确诊病例及无症状感染者血清抗体跟踪检测情况*

注:*P(弱)表示弱阳性,N表示阴性。

3、讨论

本起疫情共发现1例确诊病例、4例无症状感染者,以无症状感染者为主,通过确诊病例的密切接触者的追踪调查发现。

从本起疫情样本核酸跟踪检测结果发现,只从咽拭子和痰液样本中检测到新冠病毒核酸,未在粪便(或肛拭子)中检测到病毒核酸,可能与本次疫情以无症状感染者居多,无症状感染者病毒主要存在部位有关,也可能与样本采集质量、样本处理等有关,具体原因有待进一步研究。本研究发现无症状感染者排毒时间长达47天,17岁无症状感染者D在出院前连续2次检测阴性后的第14天咽拭子检测复阳;董玉颖等也有类似报道,1例73岁的无症状感染者检测阴性后14天复阳[8],可能与其停止治疗后病毒未完全清除再次复活,也可能与病人自身免疫力有关,原因有待进一步研究。因目前技术很难区分病毒是否具有活性,所以复检阳性病例是否具有传染性有待进一步观察。

从本起疫情血清样本IgM和IgG抗体跟踪检测结果发现,确诊病例A感染后7天内双抗体阳性;无症状感染者B、E感染后7天内双抗体阳性,无症状感染者C感染33天后双抗体均为弱阳性,无症状感染者D感染32天后双抗体仍为阴性,这可能与病毒的特性、病人感染的途径、感染的病毒量及机体自身免疫应答水平不同有关。

绘制的传播链关系图显示,本起疫情由武汉回X县人员无症状感染者B、C引起,B传给A和E,C传给D,B与C是在武汉同时感染还是从武汉一起乘坐交通工具回X县的过程中相互感染,无从追溯。本起疫情还从无症状感染者C家发现环境表面样核酸阳性,表明居住环境受到污染。因COVID-19可通过接触传播,提示不随地吐痰、勤洗手等良好的个人卫生习惯和对可接触部位进行定期消毒的生活习惯可预防COVID-19感染。

国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》[6]指出,COVID-19病人为主要传染源,但无症状感染者也可能成为传染源。无症状感染者造成人际传播的案例屡有报道:2月21日《美国医学会杂志》(JAMA)一篇来自河南安阳的研究提示,1例从接触传染源到经核酸确诊经历19天的无症状感染者,可能造成了包括5人在内的传播[9];德国慕尼黑发生的一起无症状感染者(尔后出现短暂非特异性症状)也导致4人发病[10];河南省卫生健康委员会2020年3月29日《河南省新增1例新冠肺炎确诊病例情况通报》中也表明1例有武汉旅居史无症状感染者造成了1例确诊病例和2例无症状感染病例的传播[11]。本起疫情是一起典型的无症状感染者作为传染源引起的疫情,因此加强COVID-19无症状感染者的发现与管理也是当前疫情防控的重要工作。李克强总理在3月26日主持召开的中央应对新冠肺炎疫情工作领导小组会议时强调“要高度重视防治无症状感染者”[12]。无症状感染者无临床症状,资料显示,发现无症状感染者主要有四种途径:一是对新冠肺炎病例的密切接触者医学观察期间的主动检测;二是聚集性疫情调查中开展的主动检测;三是新冠肺炎病例的传染源追踪过程中对暴露人群的主动检测;四是对部分有新冠肺炎病例持续传播地区的旅行史和居住史人员的主动检测。

目前可通过核酸、抗体及肺部CT等检测手段发现COVID-19病人及无症状感染者。因核酸诊断受标本采集质量、标本取材、检测试剂盒等多种因素影响,其检测结果假阴性较高[13];血清抗体检测受检测试剂的质量、病人的病程及机体自身免疫力等因素影响可能造成假阳性或假阴性结果;王艳芳等研究报道159例无症状感染者胸部CT均发现病灶[14],与本次疫情中4例无症状感染者胸部CT均发现病灶一致,胸部CT检查虽更有助于发现无症状感染者,但显然不适合用于人群的广泛筛查[15]。因此在COVID-19防控工作中,建议医疗卫生机构根据自己的实际条件综合运用合适的检测手段,有针对性加大无症状感染者筛查力度,将检测范围进一步扩大至新冠肺炎病例和已发现的无症状感染者的密切接触者、有特殊要求的重点地区和重点人群等。对高度疑似者及密切接触者应多次采样检测,避免核酸及抗体检测“假阴性”造成的漏检。

目前,我国的COVID-19防控工作已进入外防输入、内防反弹的关键时期,不仅要加强治愈病人及无症状感染者的跟踪随访和健康管理,还应加强对公众的健康教育和宣传,养成不随地吐痰、勤洗手等良好的卫生习惯,保持安全的社交距离和社交礼仪。从目前的证据而言,大多数密接人群和恢复期人群14天的隔离期还是一个恰当的做法,极少数恢复期人群14天的隔离期满后样本核酸检测阳性则需要更长时间的自我隔离和医学观察。建议社区及临床防控两手抓,强化重点人群的管理,公共卫生团队下沉到社区,查清每一例新增确诊、疑似病例和无症状感染者来源,并做好医学观察,找出防控的关键点、薄弱点和隐患点,快速发现传染源,及时切断传播途径,对可能传播的人群和场所实施精准管控,是有效防止疫情局部暴发和反弹的关键措施。

参考文献：

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[11]河南省卫生健康委员会.河南省新增1例新冠肺炎确诊病例情况通报[EB/OL].(2020-03-29)[2020-04-03].

[12]中国政府网.李克强:要高度重视防治无症状感染者[EB/OL].(2020-03-27)[2020-04-03].

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