首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 妇产科论文 > 子宫肌瘤论文 > SFRP基因甲基化与临床病理特征及HPV感染的关系

SFRP基因甲基化与临床病理特征及HPV感染的关系

2020-10-24 123 上传者：管理员

摘要：目的:探讨子宫颈鳞状细胞癌患者分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)基因甲基化与临床病理特征及人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:选取87例子宫颈鳞状细胞癌患者术中切除的癌组织及配对癌旁正常组织，采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)法检测组织中SFRP基因甲基化率，采用实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)检测子宫颈鳞状细胞癌患者HPV感染情况，采用Spearman相关分析子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化水平与其临床病理特征及HPV感染的相关性。结果:子宫颈鳞状细胞癌组织中SFRP基因甲基化率高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度的子宫颈鳞状细胞癌患者癌组织SFRP基因甲基化率比较，差异无统计学意义(P>0.05);不同WHO病理分级、FIGO分期的子宫颈鳞状细胞癌患者癌组织SFRP基因甲基化率比较，差异具有统计学意义(P<0.05);HPV感染阳性子宫颈鳞状细胞癌患者癌组织SFRP基因甲基化率显著高于HPV感染阴性子宫颈鳞状细胞癌患者，差异有统计学意义(P<0.05);SFRP基因甲基化率与子宫颈鳞状细胞癌患者年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度无相关性(P>0.05)，与子宫颈鳞状细胞癌患者的WHO病理分级、FIGO分期、HPV感染呈正相关(r=0.445、0.305、0.260,P<0.05)。结论:SFRP基因甲基化率与子宫颈鳞状细胞癌患者的WHO病理分级、FIGO分期、HPV感染呈正相关，有望成为子宫颈鳞状细胞癌诊断的生物标志物。

关键词：
临床病理特征
人乳头瘤病毒
分泌型卷曲相关蛋白
基因甲基化
子宫肌瘤
子宫颈鳞状细胞癌
癌
细胞癌诊断
鳞状细胞
加入收藏

子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，原位癌高发年龄为30～35岁，浸润癌高发年龄为45～55岁，其病理类型主要分为鳞状细胞癌、腺癌及腺鳞癌，其中以鳞状细胞癌为最常见[1]。有研究显示，子宫颈癌发病率和病死率位居我国女性恶性肿瘤第2位，仅次于乳腺癌，发病率和病死率逐年上升并呈年轻化趋势[1,2]。子宫颈癌发生及发展是一个涉及多因素、多基因及多阶段的复杂过程，人乳头瘤病毒感染已被证实是子宫颈癌发生及发展的主要因素，子宫颈癌患者HPV感染率可高达90%[2]。除此之外，表观遗传学改变在子宫颈癌发病过程中也具有重要作用[3]。DNA甲基化是表观遗传学的重要分支，能够引起染色质结构改变、DNA构象及稳定性改变，在基因表达调控、基因组印迹及发育调节等方面起到重要作用[4]。分泌型卷曲相关蛋白是细胞外因子信号通路的拮抗因子，可通过半胱氨酸富集区域与Wnt配体结合而阻断Wnt信号转导，抑制肿瘤增殖[5]。有研究显示SFRP基因甲基化与乳腺癌、结肠癌等恶性肿瘤相关[6]，但其与子宫颈鳞状细胞癌相关性尚不清楚。因此本研究就子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化与其临床病理特征及HPV感染的关系进行探讨，报告如下。

1、资料与方法

1.1一般资料

经医院伦理会审查批准，选择2018年8月—2019年8月收治的87例子宫颈鳞状细胞癌患者，收集其术中切除的癌组织及配对癌旁正常组织。患者年龄25～70岁、中位年龄50岁，<50岁59例、≥50岁28例，肿瘤直径<4cm58例、≥4cm29例;FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期73例、Ⅲ～Ⅳ期14例，WHO病理分级G1级37例、G2级29例、G3级21例。纳入标准:(1)子宫颈鳞状细胞癌经病理学检查确诊[1];(2)未合并其他恶性肿瘤;(3)入院资料详细;(4)入院前未接受任何抗癌治疗;(5)所有研究对象及其家属同意入组该实验，并获得书面知情同意书。排除标准:(1)合并凝血系统疾病、自身免疫性疾病、传染性疾病、精神系统疾病、感染性疾病;(2)合并心、肝、脾、肺、肾、脑等重要脏器功能障碍;(3)妊娠或哺乳期女性;(4)依从性差;(5)合并转移性肿瘤。

1.2方法

1.2.1SFRP基因甲基化检测

采用甲基化特异性聚合酶链式反法，收集子宫颈鳞状细胞癌患者术中切除的癌组织及配对癌旁正常组织，采用组织基因组DNA提取试剂盒(杭州博日科技有限公司)提取DNA，采用DNA甲基化试剂盒(上海信裕生物科技有限公司)进行DNA变性及亚硫酸氢盐转化。以转化后的DNA为模板，进行PCR扩增。设计SFRP基因甲基化特异引物和非甲基化特异引物，甲基化特异引物上游为5'-GGTATATTTTCGAGGGGTACG-3'，下游为5'-TTCCCGACCCGCACTCCGC-3';SFRP基因非甲基化特异引物上游为5'-TGTGAGGGTATATTTTTGAGGGGTAT-3'，下游为5'-CTTCTCTCTCCACTTCCCAACCCA-3'。PCR反应体系:DNA模板1μL,5×PCR缓冲液10μL，上下游引物各0.5μL，加无核酶水补充至20μL。PCR反应条件:95℃预变性120s,95℃变性60s、55℃退火60s、72℃延伸60s,40次循环。PCR产物经凝胶成像系统摄像分析，如基因甲基化特异引物扩增出目的条带则提示SFRP基因甲基化阳性，计算SFRP基因甲基化率。

1.2.2HPV感染检测

采用实时荧光定量聚合酶链反应法，采用无菌棉签采集子宫颈拭子，洗涤到含1mL生理盐水(武汉益普生物科技有限公司)的离心管中，取100μL于离心管中，采用离心机(上海臻诺生物科技有限公司，型号ThermoFisher)10000r/min离心10min，弃上清;采用DNA提取试剂盒(广州健仑生物科技有限公司)提取沉淀细胞中的DNA，以此DNA为模板进行PCR扩增。取一支洁净离心管，分别加入DNA5μL、阴性质控品5μL、阳性质控品5μL，将管盖盖紧，瞬时离心后进行q-PCR扩增。PCR反应条件:95℃预变性60s,95℃变性10s、62℃退火40s、72℃延伸40s,40个循环，根据Ct值和扩增曲线判断结果，Ct值<38判定为HPV感染阳性。

1.3统计学方法

本研究数据的统计分析在SPSS22.0软件上进行，组间计数资料采用均数±标准差表示，数据比较采用t检验;计数资料以百分比(%)表示，数据比较采用χ2检验。采用Spearman相关分析SFRP基因甲基化率与子宫颈鳞状细胞癌患者临床病理特征及HPV感染的相关性，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2、结果

2.1子宫颈鳞状细胞癌组织及癌旁正常组织中SFRP基因甲基化率

结果显示，子宫颈鳞状细胞癌组织中SFRP基因甲基化率高于配对癌旁正常组织，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2不同临床病理特征的子宫颈鳞状细胞癌患者癌组织SFRP基因甲基化率

结果显示，不同年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度的子宫颈鳞状细胞癌患者癌组织SFRP基因甲基化率比较，差异无统计学意义(P>0.05);不同WHO病理分级、FIGO分期的子宫颈鳞状细胞癌患者癌组织SFRP基因甲基化率比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1子宫颈鳞状细胞癌组织及癌旁正常组织中SFRP基因甲基化率比较

表2不同临床病理特征的子宫颈鳞状细胞癌患者癌组织SFRP基因甲基化率

2.3HPV感染子宫颈鳞状细胞癌患者癌组织SFRP基因甲基化率

结果显示，HPV感染阳性子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化率高于HPV感染阴性子宫颈鳞状细胞癌患者，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.4Spearman相关分析

Spearman相关分析结果显示，SFRP基因甲基化率与子宫颈鳞状细胞癌患者年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度无相关性(P>0.05)，与子宫颈鳞状细胞癌患者WHO病理分级、FIGO分期、HPV感染呈正相关(P<0.05)。见表4。

表3不同HPV感染情况的子宫颈鳞状细胞癌患者癌组织SFRP基因甲基化率

表4SFRP基因甲基化率与患者临床病理特征及HPV感染的相关性分析

3、讨论

早期子宫颈癌通常无明显症状和体征，随着病情进展，根据病灶累及范围的大小可出现阴道排液、阴道流血、尿急、尿频、便秘、下肢肿痛、肾盂积水、输尿管梗阻、尿毒症、贫血等继发性症状[7]。目前临床采用以手术和放射性治疗为主、化学药物治疗为辅的综合治疗方案，虽然能够改善患者临床症状、控制亚临床转移、缩小肿瘤病灶及延长生存时间，但晚期子宫颈癌治疗比较困难，常因远处转移或局部复发导致治疗失败，预后较差[7,8,9]。因此早发现、早诊断、早治疗是提升子宫颈癌预后的关键。

HPV是一种球形DNA病毒，属于乳多空病毒科，能引起人体皮肤或黏膜的鳞状上皮增殖，引起人类上皮的恶性肿瘤和良性肿瘤，如尖锐湿疣、子宫颈癌、肛门癌等，近年来HPV感染受到诸多临床工作者的广泛关注[10,11]。据报道14～59岁人群HPV总感染率为26.8%，其感染途径包括性传播、密切接触、间接接触、医源性感染、母婴传播[12]。HPV感染是引发子宫颈癌的主要生物学因素，与子宫颈癌发病过程密切相关。除此之外，表观遗传学改变在子宫颈癌发病过程中也具有重要作用[4]。DNA甲基化是一种表观遗传修饰，指在DNA甲基化转移酶作用下，甲基基团与基因组中胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸的胞嘧啶环第5碳原子以稳定的共价键形式结合而形成5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)的化学修饰过程，该过程能够在不涉及DNA序列变化的前提下改变遗传表现，能够引起染色质结构改变、DNA构象改变、DNA稳定性改变、DNA与蛋白质相互作用方式改变，调控基因表达[13,14,15]。有研究显示抑癌基因甲基化异常与子宫颈癌相关[16]。Wnt信号通路是一条在进化上非常保守的具有传递生长刺激信号功能的信号途径，在细胞增殖、细胞分化、细胞黏附、细胞运动、胚胎发育、中枢神经系统形成等方面发挥重要作用[17,18,19]。SFRP是Wnt信号通路的拮抗因子，可通过CRD与Wnt配体结合而阻断Wnt信号传导[20,21]。SFRP基因是一种抑癌基因，能够抑制肿瘤增殖，其基因多态性是部分恶性肿瘤的高危因素[22,23]。有研究发现在结直肠癌细胞株及口腔鳞状细胞癌细胞株中SFRP基因有较高的甲基化率[24,25]。本研究显示子宫颈鳞状细胞癌组织中SFRP基因甲基化率高于配对癌旁正常组织，提示子宫颈鳞状细胞癌患者存在明显SFRP基因甲基化，可能与子宫颈鳞状细胞癌发病有关。本研究结果还显示不同年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度的子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化率比较差异无统计学意义(P>0.05)，不同WHO病理分级、FIGO分期的子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化率差异有统计学意义(P<0.05)，并且子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化与WHO病理分级、FIGO分期呈正相关，提示SFRP基因甲基化与子宫颈鳞状细胞癌恶性进展有一定关系。进一步研究发现HPV感染阳性子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化率高于HPV感染阴性子宫颈鳞状细胞癌患者，并且子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化与HPV感染呈正相关，提示SFRP基因甲基化的子宫颈鳞状细胞癌患者发生HPV感染的可能性越大。

综上所述，子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化与患者的WHO病理分级、FIGO分期、HPV感染呈正相关，SFRP有望成为子宫颈鳞状细胞癌诊断的生物标志物。但本研究纳入病例数不足，有待进一步加大样本量及多中心研究。

参考文献:

[1]王稳,伏世杰,张师前.2017ESMO《子宫颈癌临床实践指南:诊断､治疗和随访》解读[J].医学综述,2018,12(10):2345-2348.

[9]戴永刚,张乃馨,穆家康.HPV亚型与子子宫颈癌前病变及癌变的关系研究[J].中国肿瘤临床与康复,2018,2(6):8756-8757.

[13]钟焱,徐慧,彭凤兰.DNA甲基化在基因表达调控中的意义及研究进展[J].中国医药导报,2019,4(14):33-36.

[14]沙英娇,何赏,王成彬.非小细胞肺癌DNA甲基化研究进展[J].中华检验医学杂志,2017,40(6):475-477.

[17]郭玉霞,马利国,陈递林,等.Wnt信号通路成分相关因子在卵巢癌中的表达以及临床预后价值[J].山西医药杂志,2018,47(13):1245-1247.

[18]刘学刚,刘艳彩,吴春平,等.CD151对结肠癌中Wnt信号通路变化的影响[J].中国医药导报,2018,15(16):8765-8767.

徐志红,邓莹.子宫颈鳞状细胞癌患者SFRP基因甲基化与临床病理特征及HPV感染的关系[J].贵州医科大学学报,2020,45(10):1214-1218.

基金:四川省卫生厅科研课题(130439).