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GC法测定蒙药安神补心六味丸中两种挥发性成分的含量

2021-09-14 154 上传者：管理员

摘要：目的建立气相色谱法测定蒙药安神补心六味丸中丁香酚、去氢木香内酯含量的方法。方法采用HP-5MS毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm),FID检测器,进样口温度220℃,检测器温度为250℃。柱温以50℃为初始温度,保持1min,以10℃/min升温至120℃,保持1min,以20℃/min升温至250℃,保持1min;气为氮气,流速为1ml/min,进样方式为分流进样,分流比为10∶1;进样量为1μl,空气流速为400ml/min;氢气流速为20ml/min;尾吹气流速为25ml/min。结果丁香酚、去氢木香内酯线行范围分别为0.429～2.145μg(r=0.9992),0.196～0.976μg(r=0.9992),在此范围内线行良好;平均回收率分别为100.58%、103.34%,RSD值分别为1.84%、1.36%。结论建立气相色谱法测定蒙药安神补心六味丸中丁香酚和去氢木香内酯含量,该方法有效可靠,可用于蒙药安神补心六味丸的质量控制。

关键词：
丁香酚
去氢木香内酯
含量测定
气相色谱法
蒙药安神补心六味丸
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蒙药安神补心六味丸是蒙药传统方剂，记载于《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》（1998版），由广木香100g、丁香100g、牛心100g、肉豆蔻100g、枫香脂100g、广枣100g等6味药材组成，功能与主治有祛“赫依”，镇静，用于心慌，气短等[1]。丁香功能与主治具有镇“赫依”，散寒，温中，消食，开欲，解毒，利咽喉。用于命脉“赫依”病，失眠，精神病，喑哑，痘疹。木香功能与主治有破痞，调元，去痰，排脓祛腐，解“赫依”血相讧，止痛。用于“协日”痞，血痞及“赫依”血相讧，肺脓肿，痞咳，气喘，耳脓，“宝日”，胃痛，嗳气，呕吐，胃痧，结喉[2]。目前对蒙药安神补心六味丸的定性、定量检测，临床疗效及质量控制方面研究极少，针对这些问题，建立GC法测定蒙药安神补心六味丸中的丁香酚及去氢木香内酯的含量并为进一步研究蒙药安神补心六味丸的临床疗效及质量控制提供科学依据。

1、材料

1.1 仪器

Agilent7890B型气相色谱仪（美国Agilent公司），包括氢火焰离子化检测器（FID）、5190型手动进样器（美国Agilent公司）；KQ-300VDY型超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；QUINTIX35-1CN型十万分之一电子分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]。

1.2 药材与试剂

丁香酚对照品（批号：110725～201917，含量：99.1%）、去氢木香内酯对照品（批号：111525～201912，含量：99.5%）均购自中国食品药品检定研究院；蒙药安神补心六味丸（批号：190722、190913、191218）内蒙古奥特奇蒙药股份有限公司生产；无水乙醇为分析纯；纯化水。

2、方法与结果

2.1 色谱条件

HP-5MS毛细管色谱柱（30m×0.32mm×0.25μm),FID检测器，检测器温度250℃，进样口温度220℃。柱温以50℃为初始温度，保持1min，以10℃/min升温至120℃，保持1min，以20℃/min升温至250℃，保持1min；载气为氮气，流速为1ml/min，进样方式为分流进样，分流比为10∶1；进样量为1μl，氢气流速为20ml/min；空气流速为400ml/min；尾吹气流速为25ml/min。见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取丁香酚对照品8.58mg、去氢木香内酯对照品3.91mg于10ml定量瓶内，加入无水乙醇定容，摇匀，作为混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品药材粉碎过4号筛，精密称取药材粉末2.0g，置于50ml塞锥形瓶中，同时加入20ml无水乙醇，称定重量，超声35min，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇均，滤过，即得。

2.3 方法学验证

2.3.1 线性关系考察

将“2.2.1”项下混合对照品溶液按照“2.1”项下色谱条件进样（0.5μl、1μl、1.5μl、2μl、2.5μl）测定。以混合对照品质量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得到丁香酚、去氢木香内酯的回归方程及线性范围，结果显示，蒙药安神补心六味丸中丁香酚和去氢木香内酯在0.429～2.145μg、0.196～0.978μg质量范围内线性关系良好。见表1。

2.3.2 精密度试验

将“2.2.1”项下混合对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样测定6次，记录峰面积，结果表明，丁香酚、去氢木香内酯峰面积RSD分别为1.71%、1.67%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验

按照“2.2.2”项配置供试品溶液1份，室温放置，按“2.1”项色谱条件下分别于0、2、4、6、8、10、12、24h进样测定，记录峰面积。结果显示，丁香酚、去氢木香内酯峰面积的RSD值分别为1.19%、1.75%，供试品溶液在室温下24h内稳定。

2.3.4 重复性试验

精密称取同一批蒙药安神补心六味丸粉末（批号：191218），共6份，按照“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。计算丁香酚、去氢木香内酯平均含量分别为8.6332mg/g、2.7470mg/g,RSD值分别为1.36%、1.44%，表明该方法重复性良好。

2.3.5 加样回收率试验

取同一批蒙药安神补心六味丸粉末（批号：191218)6份，每份样品精密称取1g，再每份精密加入浓度为8.63mg/ml丁香酚、2.74mg/ml去氢木香内酯的混合对照品溶液1ml，同时分别加入19ml无水乙醇溶液，称定重量，超声35min，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇均，滤过，再按照“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果显示，丁香酚、去氢木香内酯平均回收率分别为100.58%、103.34%,RSD值分别为1.84%、1.36%。见表2。

2.3.6 样品含量测定

取不同批次的蒙药安神补心六味丸（批号：190722、190913、191218），每批精密称取3份，分别按照“2.2.2”项操作条件下配置供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果显示，丁香酚、去氢木香内酯平均含量分别为8.70mg/g、2.77mg/g,RSD值分别为1.46%、1.51%。见表3。

3、讨论

文献报道，丁香酚是丁香的主要有效成分并且含量最高。丁香花蕾中主要含挥发油，其中含丁香酚（Eugenol）占70%～85%[3]。丁香酚有抗菌作用、保鲜作用，麻醉作用[4,5,6]等药理作用。木香中主要的挥发性成分为去氢木香内酯和木香烃内酯，其中去氢木香内酯具有抗炎、抗白血病的增殖、抗乳腺癌[7,8,9]等多种药理作用。通过本研究对蒙药安神补心六味丸未来的研究方向提供参考。

本研究测定蒙药安神补心六味丸中丁香酚和去氢木香内酯的含量，在选择样品提取方法中，无水乙醇提取的提取效率优于甲醇、正丁醇的提取。

在程序升温过程中，柱温以10℃/min升温至120℃，保持1min，当选择15℃/min、20℃/min的升温速度时，丁香酚和去氢木香内酯达不到完全的分离。通过调整进样口温度及检测器温度发现进样口温度220℃，检测器温度250℃时样品含量最高、分离度良好。

对3批次蒙药安神补心六味丸进行含量测定，结果表明，不同批次蒙药安神补心六味丸中的丁香酚、去氢木香内酯的含量范围分别为8.48～8.80mg/g、2.70～2.81mg/g，平均含量分别为8.70mg/g、2.77mg/g,RSD值分别为1.46%、1.51%，拖尾因子在0.95～1.05范围之内，分离度良好。在方法学考察试验分析中蒙药安神补心六味丸的丁香酚和去氢木香内酯的含量有较好的稳定性、重复性并且RSD值均小于2%。该方法快速、操作简便、灵敏度高，适合于蒙药安神补心六味丸挥发性成分的含量测定，同时为进一步深入研究蒙药安神补心六味丸临床疗效及质量标准化研究提供科学依据。

参考文献:

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册[M].赤峰:内蒙古科学技术出版社,1998:94.

[2]内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙药材标准[M].赤峰:内蒙古科学技术出版社,1987:351,371.

[3]肖培根.新编中药志[M].北京:化学工业出版社,2002:676.

[4]李朝.丁香酚对水产养殖致病菌鮼弧菌抑菌效果及机理研究[D].杭州:浙江海洋大学,2019.

[5]王明,张家涛,周斌,等.丁香酚复合保鲜剂对腐败希瓦氏菌的抗菌作用机制[J].食品科学,2021,42(13):10-16.

[6]黄小林,戴超,虞为,等.丁香酚对卵形娼醦幼鱼的麻醉效果[J].广东海洋大学学报,2020,40(4):124-131.

[7]荣玉美.去氢木香经内酯抗肺纤维化作用及机制研究[D].天津:天津医科大学,2019.

[8]史永久.去氢木香内酯对急性髓细胞白血病抗增殖作用的机制研究[D].大连:大连医科大学,2020.

[9]马强,陈洁,熊书,等.去氢木香内酯诱导乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡的机制研究[J].中药新药与临床药理,2021,32(2):200-207.

文章来源：新图雅,王徽,美丽,于水,陈红梅,王秀兰.GC法测定蒙药安神补心六味丸中两种挥发性成分的含量[J].中国处方药,2021,19(09):34-36.