首页 >
论文范文 >
医药卫生论文 >
药学论文 >
中药学论文 >
高效液相色谱法测定直立百部药材中2种生物碱的含量
摘要：目的：应用高效液相色谱法测定中药材百部直立百部中2种有效生物碱成分（对叶百部烯酮、脱氢对叶百部碱）的含量。方法：采用高效液相色谱法，使用THERMOHypersilODS-C18色谱柱（250mm×4.6mm,2.5μm）,以乙腈0.2%甲酸氨缓冲溶液为流动相进行梯度洗脱（0～35min,体积比为45∶55;35～55min,体积比为45∶55～55∶45;55～70min,体积比为55∶45）,柱温为30℃,检测波长为235nm,进样量为20μl,流速为1.0ml/min。结果：对叶百部烯酮的线性关系方程为：Y=0.9124×10~4X+3.9856×10~4（r=0.9998）,脱氢对叶百部碱的线性关系方程为：Y=1.3062×10~4X+9.5647×10~4（r=0.9996）,2种成分分别在0.0267～0.267、0.0235～0.1635mg/ml范围内线性关系良好。对叶百部烯酮的平均加样回收率为99.71%,RSD为1.02%,脱氢对叶百部碱的平均加样回收率为99.91%,RSD为1.20%。结论：采用高效液相色谱法测定百部中药材中直立百部2种生物碱的含量，操作简便，检测方式简单，仪器精密度高，重现性好，可用于百部药材直立百部的质量控制。
加入收藏
1985年版《中华人民共和国药典》开始收载百部，并记录其来源为百部科植物直立百部Stemonasessilifolia(Miq.Miq)、蔓生百部StemonaJaponica(BL.)Miq或对叶百部StemonatuberoseLour.的干燥块根[1,2]。百部味甘、苦，性微温，归肺经，功能润肺下气止咳、杀虫。目前，临床上主要用于治疗新久咳嗽、肺痨咳嗽、顿咳，外用可治疗头虱、体虱、饶虫病、阴部瘙痒等[3]。前期的研究文献报道，百部中生物碱类成分是其镇咳效果的活性成分，其与传统的镇咳药物相比，其对多种原因引发的咳嗽具有针对性的高效、低毒的优势[4]。百部中生物碱类成分主要有对叶百部烯酮(tuberostemoenone)、脱氢对叶百部碱(didehydrotuberostemonine)、对叶百部酮(tuberostemonone)、氧化对叶百部碱等[5]。本研究应用高效液相色谱法测定直立百部中对叶百部烯酮、脱氢对叶百部碱2种生物碱成分的含量，以期为百部质量控制提供数据参考。
1、仪器与试药
1.1 仪器
采用美国安捷伦公司生产的Aglient1100型高效液相色谱仪器(包括配套的Aglient检测系统),色谱处理软件为Empower2数据处理软件系统；KQ-100DE型数字控超声波清洗仪器(北京昆山超声仪器责任公司),MettlerXO215DU型电子分析天平(美国梅特勒公司，精密度0.0001g);MilliPoreAdvantageB12自动纯水机器美国默克密理博公司；KNF102型恒温水浴锅(金坛市鸿科仪器厂)。
1.2 试药
百部生产批号分别为20161223、20170402、20170623,鉴定为百部科植物直立百部的干燥块根。其中百部中的对叶百部烯酮、脱氢对叶百部碱成分主要由本研究团队分离得到，并经过核磁、质谱确定其结构为上述生物碱成分，质量分数>98%。甲醇、乙腈为色谱纯(北京化工有限责任公司),水为三蒸水，甲酸铵溶液和试验中所用的其他检测试剂均为分析纯。
2、方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：THERMOHypersilODS-C18(250mm×4.6mm,2.5μm),流动相为乙腈-0.2%甲酸铵缓解溶液进行梯度洗脱(0～35min,体积比为45∶55;35～55min,体积比为45∶55～55∶45;55～70min,体积比为55∶45),流速为1.0ml/min,柱温为30℃,检测波长为235nm,进样量为20μl。理论塔板数以对叶百部烯酮计算>6000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液
分别称取对叶百部烯酮、脱氢对叶百部碱对照品，精密称定后置于5.0ml的容量瓶中，甲醇溶液稀释并定容至刻度，摇匀后放置室温，将不足部分补足后，置于-20℃冰箱中储存备用。
2.2.2 供试品溶液
取同一批次的直立百部，采用粉碎机进行粉碎后，过3号筛，精密称定10g,加入200ml乙醇(浓度为55%),精密称定重量后置于圆底烧瓶中，回流提取2h后放冷，对重量再次进行称定后，采用55%乙醇补足失重，摇匀后重复回流提取1次，将2次滤液合并。取滤液置于10000r/min离心机中离心10min[6]。静置，滤液过0.22μm微孔滤膜，得到供试品溶液，置于-20℃冰箱中保存备用。
2.3 系统适应性试验
分别精密吸取已储存备用的混合对照品溶液和供试品溶液20μl,按照2.1项下的色谱条件进行测定，对叶百部烯酮的拖尾因子为0.774,保留时间为45min左右，脱氢对叶百部碱的拖尾因子为1.070,保留时间为70min左右，在此色谱条件下，2种生物碱成分与其他成分可以有效地进行分离。
2.4 线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6ml,分别置于2.0ml容量瓶中，采用50%甲醇分别定容至刻度后，摇匀静置。按照试验采用的色谱条件分别进样。横坐标为对照品质量浓度，纵坐标为峰面积进行线性回归，得到2种生物碱的线性回归方程。对叶百部烯酮：Y=0.9124×104X+3.9856×104(r=0.9998);脱氢对叶百部碱：Y=1.3062×104X+9.5647×104(r=0.9996)。结果表明，对叶百部烯酮(0.0267～0.267mg/ml)、脱氢对叶百部碱(0.0235～0.1635mg/ml)与其峰面积的线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取已知混合对照品溶液，按照2.1项下的色谱条件重复进样6次，按照线性关系方程对峰面积进行测定，结果显示对叶百部烯酮峰面积的RSD值为0.99%,脱氢对叶百部碱峰面积的RSD值为0.87%,表明色谱仪器的精密度较好。
2.6 稳定性试验
取同一批次已配制并储存备用的供试品溶液，室温中放置0、1、2、4、6、8、10、12、15、18、21、24h后分别按照色谱条件进样并进行测定，对叶百部烯酮和脱氢对叶百部碱峰面积的RSD值分别为0.87%、1.21%,表明直立百部供试品溶液制备后24h时间内稳定性好。
2.7 重复性试验
取同一批次的直立百部药材6份，精密称定后按照2.2.2项下供试品溶液的制备方式配制成供试品溶液，并按照2.1项下的色谱条件进行测定，以线性关系方程计算2种生物碱成分的质量。结果显示对叶百部烯酮平均质量分数的RSD值为1.13%,脱氢对叶百部碱平均质量分数的RSD值为0.98%,表明试验方法在测定生物碱方面的重复性结果较好。
2.8 平均加样回收率试验
精密称取同一批次的直立百部中药材6份，精密称定后按照2.2.2项下的溶液配制方法制备供试品溶液，分别加入相应的对照品适量，按照2.1项下的色谱条件进行色谱峰的测定，并根据线性关系方程计算质量浓度，计算两种生物碱成分的平均加样回收率。(见表1)
2.9 样品含量测定结果
分别取20161223、20170402、20170623批次的直立百部各3份，精密称定后按照2.2.2项下供试品溶液的制备方式配制供试品溶液，按照2.1项下的色谱条件进行测定，以线性关系方程计算3批药材中对叶百部烯酮和脱氢对叶百部碱的含量。
3、讨论
3.1 色谱方法中流动相的选择
本次研究过程开始时对直立百部中生物碱类成分的流动相条件进行优选，分别比较了乙腈-磷酸缓冲溶液、乙腈-甲酸溶液、乙腈-甲酸铵缓冲溶液、乙腈-0.2%甲酸铵缓冲溶液[7,8,9,10],对4种不同溶剂系统下百部中生物碱类成分的色谱峰的理论塔板数、分离度以及对称性进行观察。研究结果表明，在采用了乙腈-0.2%甲酸铵缓冲溶液作为流动相进行测定时，直立百部中生物碱成分的色谱峰分离度>2.0,且色谱峰对称性好，重现性高，符合含量的测定要求，可以有效地对直立百部药材的质量进行控制。因此在试验时选择乙腈-0.2%甲酸铵缓冲溶液作为流动相进行考察。
3.2 检测波长的选择
取混合对照品适量，精密称定后加入50%甲醇配制成浓度为1.0mg/L的溶液，置于717型紫外分光光度计下进行全波长的扫描，确定检测成分最大吸收波长为235nm[11]。
3.3 供试品溶液制备方式的选择
针对直立百部中所含有的生物碱类成分，分别选择水、50%甲醇、甲醇、55%乙醇以及乙醇作为回流提取溶媒对供试品溶液中有效成分含量的提取效果进行比较[12,13],结果表明在采用55%乙醇回流提取后测定的色谱峰效果最佳。
本次研究以直立百部为试验对象，建立了药材总生物碱中对叶百部烯酮和脱氢对叶百部碱的高效液相含量测定方法，同时对选择的3类批次直立百部药材进行了含量测定。结果表明以高效液相色谱法对直立百部中的生物碱类成分进行测定，方法简便易行，测定结果准确性高，测定的生物碱类成分在直立百部中的质量分数较高，对直立百部的质量控制具有数据参考价值，同时可以有效控制药材的质量，为其长远的有效开发利用提供了依据。
参考文献:
[1]张彤,张亚中,陶建生,等.中药百部中原百部碱的分离及含量测定[J].中国药学杂志,2015,42(11):811-813.
[2]孙冬梅,董玉娟,江洁仪,等.百部配方颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究[J].时珍国医国药,2014,25(9):2157-2159.
[3]王腿,陈丽艳,张树明,等.不同产地对叶百部中新对叶百部碱含量比较研究[J].中华中医药学刊,2014,30(10):2295-2297.
[4]李昕,王月茹,马利,等.中药色谱指纹图谱在中药质量评价中的应用[J].生物医学工程学杂志,2015,29(1):192.
[5]吴旖,赵斌,江仁望.百部总生物碱缓释片的质量标准研究[J].中国现代中药,2016,18(4):497-499.
[7]王红,孙磊,韦云川,等.蔓生百部总生物碱的含量测定[J].中国中医药资讯,2014,1(3):36-38.
[8]张永太,冯年平,修彦凤,等.百部蜜炙前后总生物碱含量比较[J].中成药,2015,32(2):451-453.
[9]高卫东,高英,李卫民.百部总生物碱含量测定方法的研究[J].天然产物研究与开发,2015,19(15):124-126.
[10]王君,高羽,张朝凤,等.对叶百部中的非生物碱类成分[J].药学与临床研究,2015,20(3):193-195.
[11]陶冶,张亚中.电感耦合等离子质谱法测定百部药材中砷､镉､汞､铅的含量[J].安徽医药,2015,19(5):858-560.
[12]吕丽华,叶文才,赵守训,等.直立百部的化学成分[J].中国药科大学学报,2015,36(5):408-410.
[13]胡君萍,张因,毛一卿.《中国药典》3种百部的止咳作用比较[J].中国中药杂志,2009,34(23):10-14.
文章来源：赵侠,刘锦锦,张国民.高效液相色谱法测定直立百部药材中2种生物碱的含量[J].湖南中医杂志,2022,38(06):189-192.
分享：
白及为兰科白及属白及Bletilla striata (Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎，其味苦、甘、涩，微寒，归肺、肝、胃经，具有收敛止血、消肿生肌的作用，可用于咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂[1]。随着市场对白及的需求量增加，人工采挖导致野生资源越来越少，为了满足白及市场需求量的不断增加，人工种植成为白及商品的主要来源，而人工种植白及品质受土壤、气候和人为活动的影响。
2024-04-19
子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）是异位子宫内膜组织（腺体和间质）种植于子宫腔以外部位的一种慢性、雌激素依赖性疾病[1]。异位病灶受局部激素和炎症微环境支持，进一步累及子宫、输卵管及卵巢、腹膜等多个位置，引起周期性盆腔痛、痛经、性交痛、排便及排尿痛等症状。目前该病发病率约为16.1/1万人[2]，不仅影响孕育，同时会增加罹患子宫内膜癌[3]与卵巢癌[4]的风险。
2024-04-19
雷公藤最早记载于《神农本草经》,味苦辛，性寒，入肝、脾二经，有大毒，可祛风湿、活血通络、清热解毒、消肿止痛[1]。雷公藤多苷是从植物雷公藤根心部提取的一种混合物，被广泛应用于炎性反应性疾病、自身免疫性疾病、器官移植及肿瘤的治疗。
2024-04-19
疾病诊断相关分组(DRG)作为一种新型的医疗保险支付方式，在提高医疗服务透明度与服务效率、有效控制医疗支出方面具有巨大潜力，近年来被我国引入并实施。根据2021年11月份国家医保局发布的《DRG/DIP支付方式改革三年行动计划》,到2025年底，DRG/DIP支付方式要覆盖到所有符合条件的开展住院服务的医疗机构，基本实现统筹地区、医疗机构、病种分组、医保基金全面覆盖[1,2]。
2024-04-19
神经炎症对包括阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）、帕金森症（Parkinson’s disease,PD）等在内的多种急性和慢性神经退行性疾病的发生有着密切联系[1,2,3]，神经炎症[4]产生的主要病因有胶质细胞的激活、血脑屏障的破坏以及外周免疫细胞进入脑实质内等，胶质细胞的过度激活会导致细胞释放多种炎性因子，如一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子及前列腺素E2等，造成神经元的损伤和变性。
2024-04-19
在晋唐时期，葛洪、释僧深、谢士泰、孙思邈等对建中汤、肾气丸有所传承发展，出现了建中汤、肾沥汤、增损肾沥汤等方。这其中有许多论述清晰、疗效确切、应用广泛的代表方剂，至今依然给临床深刻的启示意义，值得应用和推广。如葛洪[1]提出的“建中肾沥汤法诸丸方”，孙思邈[2]29在《备急千金要方》中所载的“建中肾沥诸补汤”等。
2024-04-19
人参Panax ginseng C.A.Meyer是一种药用价值极高的五加科人参属多年生草本植物，广泛应用于中药领域。其根、茎、叶和花等部位都含有丰富的生物活性成分，如人参皂苷、多糖、维生素、氨基酸等。人参皂苷作为最重要的活性成分之一，具有提高免疫力、抗氧化、改善中枢神经系统紊乱等多种药理作用[1]。
2024-04-18
符合中医药特点的质量评价模式是中药质量研究中的重点和难点，同时也是限制中药现代化发展的关键问题之一[1]。目前中药质量评价研究有了全方位的进步，从整体上对中药质量评价水平进行了提升[2]。现行中药质量控制的基本模式参照国外植物药的质量控制方法，借鉴化学药质量控制的模式所建立，化学定性鉴别与指标成分检测是其主要内容[3]。
2024-04-18
根据最新研究，常山柚橙（常山胡柚）为酸橙的栽培变种[3]，从清朝起就作为枳壳药用[4]，规范的拉丁学名为Citrus aurantium‘Changshan-huyou’[5]。2015版《浙江省中药炮制规范》将常山柚橙（常山胡柚）Citrus aurantium‘Changshan-huyou’未成熟的干燥果实收载为“衢枳壳”，并被评为“新浙八味”之一。临床上常用治胸胁气滞、胀满疼痛、食积不化、痰饮内停、脏器下垂[6,7,8,9,10,11]。
2024-04-18
芫花Daphne genkwa Sieb.et Zucc是瑞香科瑞香属植物，多分枝，花期3～5月，果期6～7月。芫花的根皮也可药用，有消肿解毒、活血化瘀之效，可用于急性乳腺炎、痈疖肿毒、淋巴结结核、腹水、风湿痛、牙痛、跌打损伤等症。芫花具有广泛的生物活性，近年来关于其提取物如羟基芫花素、瑞香烷二萜等的研究屡见报道，芫花在抗病毒、抗肿瘤以及神经保护等方面有明显作用[1,2,3,4]。
2024-04-18
人气：18181
人气：16719
人气：14104
人气：13995
人气：13169
我要评论
期刊名称：中药材
期刊人气：3032
主管单位：国家食品药品监督管理局
主办单位：国家药品监督管理局,中药材信息中心站
出版地方：广东
专业分类：医学
国际刊号：1001-4454
国内刊号：44-1286/R
创刊时间：1978年
发行周期：月刊
期刊开本：大16开
见刊时间：1年以上
影响因子：0.550
影响因子：1.700
影响因子：0.961
影响因子：0.410
影响因子：1.433
学术期刊咨询、科普杂志阅读、专利申请方案、课题研究设计、专著挂名咨询、论文下载、文献查询、原创文章检测、SCI实验设计方案等多项服务。
服务热线
您的论文已提交，我们会尽快联系您，请耐心等待！
你的密码已发送到您的邮箱，请查看！
2022-06-29
123
上传者：管理员
