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经方吴茱萸汤对偏头痛模型大鼠的治疗作用研究

2020-11-21 246 上传者：管理员

摘要：目的:观察经方吴茱萸汤对偏头痛模型大鼠行为学、血浆降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)含量的影响，探讨吴茱萸汤对偏头痛预防性治疗作用的可能机制。方法:60只Wistar大鼠随机分成6组:正常组、模型组、西比灵组、吴茱萸汤高剂量组、吴茱萸汤中剂量组和吴茱萸汤低剂量组。连续灌胃药物7d，末次给药30min后除正常组外其它各组大鼠按10mg/kg皮下注射硝酸甘油制备偏头痛模型，正常组注射生理盐水。录像记录并观察大鼠行为学表现后，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆CGRP、SP含量。结果:与正常组比较，模型组、西比灵组、吴茱萸汤高剂量组、吴茱萸汤中剂量组、吴茱萸汤低剂量组大鼠均出现耳红、频繁挠头，血浆CGRP和SP含量升高(P<0.05)。与模型组比较，西比灵组、吴茱萸汤高剂量组、吴茱萸汤中剂量组、吴茱萸汤低剂量组大鼠耳红持续时间缩短，挠头次数减少(P<0.05)，血浆CGRP、SP含量明显降低(P<0.05)。结论:吴茱萸汤可能通过调节血浆CGRP、SP的含量改善大鼠偏头痛症状，对偏头痛具有预防性治疗作用。

关键词：
偏头痛
吴茱萸汤
大鼠
降钙素基因相关肽
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偏头痛(migraine)是一种临床常见的原发性头痛，一方面患者的生活质量及其工作效率往往都会受到严重影响，另一方面也间接造成了社会经济发展的巨大损失。西医治疗偏头痛的特异和非特异药物虽然效果明显，但副作用较多，且容易产生耐药性引发药物滥用，给患者带来严重危害。中药复方以其多成分、多途径、多靶点的特点，为偏头痛治疗提供了更多的选择，毒副作用也远远小于西药。

吴茱萸汤源自汉代张仲景的《伤寒论》，由吴茱萸(9g)、生姜(18g)、人参(9g)和大枣(4枚)4味中药组成，功用为温中补虚和降逆止呕，传统主治虚寒呕吐、食谷欲呕、厥阴头痛和胃脘痛等。近年来吴茱萸汤在临床治疗上的应用范围有所扩大，主要用于头痛、急慢性胃肠炎、美尼尔综合症和高血压等病症[1,2,3,4]，尤其对偏头痛具有较好的治疗作用[5]，但其作用机制尚不完全明确。本实验按照Tassorelli等[6]报道的方法复制实验性偏头痛模型，通过观察大鼠的行为学症状，测定大鼠血浆中血管活性肽(降钙素基因相关肽、P物质)的含量，探讨吴茱萸汤对偏头痛的预防性治疗作用及可能的作用机制，为临床上治疗偏头痛提供实验依据。

1、材料

1.1动物

SPF级Wistar大鼠60只，雌雄各半，体质量180～220g，购自西普尔-必凯实验动物有限公司，动物许可证号:SYXK(沪)2014-0008，予上海中医药大学实验动物中心喂养。

1.2药物与试剂

人参、吴茱萸、大枣:上海康桥中药饮片有限公司生产，批号:180904、180804、180726，符合2015版《中华人民共和国药典》标准;西比灵:西安杨森，批号:180607447。硝酸甘油:北京益民，批号:20180620;SP酶联免疫试剂盒:上海恒远生化试剂有限公司，批号:H201903E15;CGRP酶联免疫试剂盒:上海恒远生化试剂有限公司，批号:H201903C22。

1.3主要仪器

Synergy酶标仪:Biotech;低温高速离心机:Sigma;超低温冰箱:Sanyo。

2、方法

2.1药品制备

2.1.1吴茱萸汤制备

取吴茱萸9g、人参9g、大枣12g、生姜18g(按60kg成人每天用量计)，加蒸馏水400mL，浸泡30min，武火加热沸腾后，文火继续加热30min，倾出水煎液，滤纸过滤;药渣加蒸馏水300mL，文火继续加热20min，过滤后合并两次煎液，倒入蒸发皿中，80℃减压浓缩至浓度为0.2g/mL，即得吴茱萸汤中剂量组药液。相同方法制备吴茱萸汤高剂量组药液浓度为0.4g/mL，吴茱萸汤低剂量组药液浓度为0.1g/mL,4℃保存，备用。灌胃前预热30min至常温。

2.1.2西比灵溶液配制

取5mg西比灵颗粒，以少量去离子水溶解，混合均匀，转移并定容至100mL容量瓶，配成0.05g/L的西比灵溶液。将配制好的溶液置于4℃冰箱冷藏备用。

2.2实验分组及给药

60只Wistar大鼠随机分组，分成正常组、模型组、西比灵组、吴茱萸汤高剂量组(即高剂量组)、吴茱萸汤中剂量组(即中剂量组)和吴茱萸汤低剂量组(即低剂量组)，每组10只。在适应性喂养7d后，各组大鼠进行药物干预。正常组和模型组大鼠灌胃生理盐水，西比灵组大鼠灌胃0.05g/L西比灵溶液，高、中、低剂量组大鼠分别灌胃0.4、0.2、0.1g/mL吴茱萸汤溶液。灌胃容积10mL/kg，每天2次，连续灌胃7d。

2.3偏头痛模型制备

末次给药30min后，模型组、西比灵组、高中低剂量组大鼠颈部注射硝酸甘油注射液(10mg/kg)进行模型制备，当大鼠出现双耳发红、前肢频繁挠头、爬笼增多等行为，显示硝酸甘油造模成功[7]。正常组大鼠颈部注射等体积生理盐水。

2.4观察指标及测定

2.4.1行为学观察

1)大鼠耳红现象:造模后，录像并观察记录各组大鼠耳红现象出现的时间和消退的时间。2)大鼠挠头现象:造模后，以30min为1个时间段，录像并观察记录大鼠在每个时间段里挠头次数。连续观察6个时间段，共持续3h，记录各组大鼠的挠头总数。

2.4.2血浆CGRP、SP含量检测

造模4h后，腹腔注射20%乌拉坦(5mL/kg)麻醉大鼠。取5mL腹主动脉血注入采血管中混匀，冰上静置2h，将采血管置于已经预冷的4℃低温高速离心机中(3000r/min,15min)离心，吸取上清液分装于离心管，置于-80℃冰箱冻存中备用。解冻后用ELISA法检测降钙素基因相关肽(CGRP)和P物质(SP)含量，操作步骤严格按照ELISA试剂盒说明书进行。

2.5统计学方法

运用SPSS21.0统计软件分析，实验数据用均数±标准差表示。多组均数间比较采用单因素方差(One-wayANOVA)分析，组间多重比较采用LSD法。P<0.05表示差异具有统计学意义。

3、结果

3.1各组大鼠挠头次数的比较

见表1。

3.2各组大鼠耳红与挠头出现、消失时间的比较

见表2。

3.3各组大鼠血浆降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)含量比较

见表3。

表1各组大鼠各个时间段内挠头次数比较

表2各组大鼠耳红与挠头出现和消失时间比较

表3各组大鼠血浆CGRP、SP含量比较

4、讨论

世界卫生组织调查表明:偏头痛是排名第3位的人类常见疾病，同时也是排名第6位的致残性疾病[8]。偏头痛发病机制复杂，西医的观点尚不统一，大致可以概括为:血管源性学说、神经源性学说、三叉神经血管学说、遗传学说等。目前三叉神经血管学说是偏头痛发病机制的主流学说，认为血管活性肽(CGRP、SP等)释放引起的神经源性炎症是其发病的关键环节。

经方吴茱萸汤适用于治疗全头痛、偏头痛之肝胃虚寒、浊邪上逆证，在急性发作期和发作缓解期都可使用。方中君药吴茱萸，温中下气止痛;生姜为臣，用于散寒、止呕、开痰，发散浊邪;佐药人参，大补元气，温暖中焦，以助吴茱萸温阳化浊之力;使药大枣，调和诸药，补脾和胃。诸药共同使用，扶正祛邪，攻补兼施，温阳化浊，正安邪去而止头痛。

目前我国偏头痛的患病率已经达到9.3%[9]，然而对偏头痛的预防性治疗并不充分[10]。西比灵是目前广泛使用于偏头痛预防治疗的选择性钙拮抗剂[11]。因此，本实验选择西比灵作阳性对照药，探讨吴茱萸汤对偏头痛的预防性治疗作用。

本实验结果提示:预防性给予吴茱萸汤可以有效缩短偏头痛模型大鼠耳红消失所需时间，减少偏头痛模型大鼠的挠头次数，表明吴茱萸汤对偏头痛模型大鼠有预防性治疗作用，能有效缓解偏头痛模型大鼠的临床症状;与模型组比较显示:预防性灌胃给予西比灵溶液和吴茱萸汤各剂量溶液的大鼠CGRP、SP的含量有明显降低;高中低剂量吴茱萸汤与西比灵具有同等的药理作用，均可降低大鼠CGRP、SP含量;高剂量组效果最为显著。说明降低血浆CGRP、SP含量是吴茱萸汤预防性治疗偏头痛可能的机制。

综上所述，吴茱萸汤可能通过调控CGRP、SP含量，抑制神经源性血管扩张、血浆蛋白外渗，从而减轻神经源性炎症，对偏头痛的发生产生预防性治疗作用。

参考文献：

[1]张卫华.吴茱萸汤现代临床运用综述[J].新疆中医药,1989,5(2):14-16.

[2]李宏.吴茱萸汤的临床应用[J].吉林中医药,2005,25(1):45-46.

[3]邢燕,司维华.吴茱萸汤的临床运用体会[J].中华医学研究杂志,2006,6(3):317-318.

[4]李建杜,赵金荣.吴茱萸汤临证举隅[J].国医论坛,2003,18(3):8-9.

[5]郑勇前,蔡少娜,严柏文,等.经方吴茱萸汤合葛根汤治疗偏头痛的临床观察[J].深圳中西医结合杂志,2019,29(9):62-63.

唐莹,曹姣仙,王海颖,谭梦晖.经方吴茱萸汤对偏头痛模型大鼠的预防性治疗作用研究[J].中国中医药科技,2020(06):866-868.