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远志根腐病受4种杀菌剂影响分析

2020-06-16 974 上传者：管理员

摘要：远志是一种重要的根茎类药用植物。山西省新绛县是远志的主要产区，近年来，远志根腐病的发生一定程度上影响了当地中药材产业的发展。为探寻合理的化学防治措施，从山西新绛远志药材基地感染根腐病的远志分离获得112株菌株，对其进行培养和纯化，运用科赫法则进行病原菌回接感染试验，得到4株致病较强的镰刀菌菌株，并对该菌株进行室内药效防治。结果表明，20%苯醚甲环唑1000倍液对根腐病的抑制率最高，对4个菌株的抑菌制率均高于70%;20%甲基立枯磷250倍液次之；50%多菌灵和80%代森锰锌对菌株抑制效果较差。

关键词：
杀菌剂
根腐病
植物病虫害
草本植物
远志
防治效果
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远志属于远志科远志属多年生草本植物，以根入药，是我国重要的传统出口药材，国家重点保护的三级野生品种。山西省作为远志主产区[1]，所产远志占全国产量的80%以上，以运城、临汾为主向周边县市延伸[2]。运城市新绛县阳王镇地处山西省境西南，属丘陵旱垣地区，海拔400～450m，生态环境适宜远志生长，是远志的道地产区，全国栽培种源的90%以上远志由此地提供，是当地农民致富的主导产业。但是，近年来，新绛远志根腐病发生严重，降低了农民种植远志的积极性，使其种植面积开始萎缩，严重制约了山西远志产业的发展。目前，对远志根腐病的研究还很少。

本试验以远志为主要研究对象，分离鉴定远志根腐病的主要致病菌，并探究多菌灵、苯醚甲环唑、代森锰锌、甲基立枯磷4种杀菌剂对远志根腐病病原菌的防治效果，筛选出最佳防治浓度，采用合理有效的杀菌剂对远志的根腐病进行防治，为提高远志的产量和质量提供一定的栽培依据。

1、材料和方法

1.1病原菌的采集

采集自山西省新绛县阳王镇远志种植基地，选取根部腐烂严重的病株，进行取样。

1.2试验方法

1.2.1病原菌的分离纯化

将远志根部腐烂组织截成每段5mm长，用5%的次氯酸钠消毒3min，然后用无菌水多次冲洗干净，接种在PDA培养基平板上，25℃人工气候箱中进行培养、纯化，获分离菌的纯培养。

1.2.2致病性测定

采用离体根部刺伤接种法，选取健康无病的远志，截取长3cm的根段，用灭菌后的针浅刺根部，将纯化后的病原菌打成菌饼，接种到刺伤部位，每种病原菌3次重复。用无菌的脱脂棉包裹住根部的两端，然后在棉花上滴加无菌水，放到培养皿上在25℃的恒温培养箱中进行培养，5d后统计发病情况，计算根腐病的发病率。以发病率为依据，进行再次分离试验。

1.2.3病原菌的鉴定

参照STAMPS[3]和HAWKS-WORTH等[4]的方法以及《土壤微生物分析方法手册》[5]，通过观察病原菌的菌落大小、形态、颜色及菌丝的形状、颜色等进行初步鉴定。

1.2.4室内药剂抑菌效果的测定

药剂的种类及稀释：将50%多菌灵可湿性粉剂（苏州遍净植保科技有限公司）分别稀释450、600、750、900、1050倍，20%的苯醚甲环唑水乳剂（山东省青岛瀚生生物科技股份有限公司）分别稀释1000、1250、1500、1750、2000倍，80%代森锰锌可湿性粉剂（利民化工股份有限公司）分别稀释450、600、750、900、1050倍，20%甲基立枯磷乳油（江苏省连云港市东金化工有限公司）分别稀释250、500、750、1000、1250倍。

采用生长速率法[6]，将锥形瓶中定量灭菌后的PDA培养基温度降至50℃，加入以上稀释好的药剂，摇匀后倒入培养皿内，冷却制板，将活化好的带有致病性的4种菌株打取6mm菌饼，将菌饼分别接种到含药PDA上，置于25℃培养箱内培养，每个处理重复3次，以不加药剂的平板为对照，培养5d后测量病原菌菌落直径，计算抑菌率。

1.3数据处理

采用Excel软件统计数据并作图分析。

抑菌率=（（对照菌落直径-病菌菌落直径）/对照菌落直径）×100%[7](1)

2、结果与分析

2.1病原菌的初步鉴定

从采集的病株中，共分离出来112株病原菌，从致病性测定结果发现，4种主要的致病菌为镰刀菌属菌株，其由强到弱依次为Y6-3、Y2-1、Y8-2、M6-3。

2.2不同药剂对远志根腐病病原菌的抑制效果

以分离出的致病率在50%以上的4种菌株为药剂防治对象，进行室内药剂测定，结果表明，不同浓度的多菌灵对远志根腐病的病原菌整体抑制效果很差（图1），其中，对Y8-2菌株几乎无抑制效果；对Y2-1、Y6-3的抑制效果在最高浓度450倍稀释时抑菌率仅分别为21.35%、12.55%，低浓度时对其无法抑制；对M6-3菌株稀释450倍时抑制率最高为32.57%，且随着浓度逐渐降低抑制效果变差。

不同浓度的苯醚甲环唑对远志根腐病的病原菌整体抑制效果好（图2），最高浓度1000倍稀释时对4个菌株的抑制率均高于70%，对菌株Y8-2、Y6-3、M6-3和Y2-1的抑制率依次为88.07%、85.67%、85.59%、73.07%；不同稀释倍数对Y6-3和Y8-2菌株的抑制率影响较小，平均抑菌率分别为84.98%、84.19%，均高于84%;1500倍稀释时对菌株Y2-1、M6-3的抑制率下降明显，抑菌率分别为43.69%、61.26%。4个菌株中，对Y2-1的整体抑制效果最差。

不同浓度代森锰锌对远志根腐病整体抑制效果较差（图3），其中，最高浓度450倍稀释后对Y2-1的抑菌率最高，仅为44.88%；随着浓度降低，抑菌率逐渐降至1.37%；对其他3个菌株的抑制率均低于20%，其中，对M6-3和Y6-3的菌株几乎无抑制作用，最高浓度时，抑菌率仅分别为7.86%、6.25%。

不同浓度甲基立枯磷对远志根腐病整体抑制效果较好（图4），最高浓度对Y6-3、Y2-1、M6-3和Y8-2这4个菌株的抑制率均高于50%，分别依次为64.75%、65.77%、57.88%、52.47%，且对4个菌株的抑制趋势相同，随着浓度的下降，抑菌率逐渐下降，当稀释倍数为750倍时，对菌株Y2-1、Y6-3、Y8-2的抑制率下降显著，抑菌率分别为18.91%、22.53%、26.44%。

3、结论与讨论

供试的4种杀菌剂均对远志根腐病的4种病原菌菌丝的生长有一定的抑制作用，其中，苯醚甲环唑对根腐病的抑制率最高，1000倍稀释后抑制效果最好，对菌株Y8-2、Y6-3、M6-3和Y2-1的抑菌率分别达到了88.07%、85.67%、85.59%、73.07%；甲基立枯磷次之，稀释250倍后，对菌株Y6-3、Y2-1、M6-3和Y8-2的抑制率分别为65.77%、64.75%、57.88%、52.47%；多菌灵和代森锰锌对菌丝的抑制效果较差。根据菌株的致病性强弱，对Y6-3、Y2-1菌株，用苯醚甲环唑1000倍液、甲基立枯磷250倍液都可以很好抑制菌丝生长；对于Y8-2、M6-3菌株，苯醚甲环唑1000倍抑制效果好。

根腐病是根茎类药用植物栽培过程中高发的一类病害，它具有易传染、致死率高、防治难度大等特点[8]。近年来，对远志的进一步研究发现，其有保护神经、增强记忆、抗炎、抗抑郁等多种药理作用[9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20]，使其在发现新的药物方面发挥重要作用，因此，对远志的需求量逐年增长，而远志根腐病的暴发是制约远志产量的重要影响因素之一。远志根腐病的发病首先表现在根茎相连的地表位置，引起地下部分腐烂，地上部分叶片发黄、植株干枯、萎蔫。农民一味追求远志的产量，长期滥用农药，使病原菌的抗药性增加，防治效果降低，生态系统被破坏，致使药材减产、农药残留超标、品质下降。因此，寻找引起远志根腐病的主要致病菌，根据病原菌特性，筛选出合理安全防治远志根腐病的杀菌剂至关重要。

目前，对根茎类药用植物的防治大部分都以化学农药防治为主。单一的化学防治对远志根腐病病原菌在一定时间内可能会有较好的杀菌效果，但是长时间使用同一种化学杀菌剂，会使病原菌产生一定抗药性，后期无法达到预期的防治效果。从食用安全角度出发，应当交替使用不同种类、浓度的杀菌剂，避免产生抗药性。在种植过程中，遇到根腐病大暴发时，严重影响农民经济收入，可以合理适当使用杀菌剂。但由于远志的经济效益较高，农民在种植过程中，为了利益往往过量使用杀菌剂，造成农药残留，污染生态环境，而使用生物防治的方法可以很好地避免这些问题。目前，白术、黄芪、党参等已在生物防治上取得了一定研究成果，生物防治的这一优点，受到广泛重视并发挥着越来越重要的作用[21]。本研究下一步也将继续朝着生物防治的方向，对远志根腐病的生物防治进行研究。

参考文献：

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[6]方中达.植病研究方法[M].北京:中国农业出版社,2007.

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刘佳,郭淑红,裴帅帅,罗淑政,田洪岭.4种杀菌剂对远志根腐病的防治效果[J].山西农业科学,2020,48(06):964-966+985.