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抑癌基因DKK2抑制儿童肾母细胞瘤细胞增殖的机制研究

  • 作者:袁桂霞  李岩  冯婉琪  夏小娟  李旭
  • 单位:湖北医药学院附属东风医院儿科

摘要:

目的探讨WNT信号通路调控因子DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的表达,及对儿童肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法通过RT-PCR、qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验分析DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞系和组织中的相对表达;将DKK2过表达的SK-NEP-1细胞设定为实验组(DKK2组),空白对照质粒组设定为对照组(Vector组),分别转染pc DNA3. 1(+)-Flag-DKK2质粒(实验组)和pc DNA3. 1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至SK-NEP-1细胞系,RT-PCR和免疫蛋白印迹实验验证DKK2的过表达;通过CCK-8实验和细胞克隆实验分析DKK2对细胞增殖的影响;流式细胞周期和凋亡实验验证DKK2过表达对细胞增殖的作用机制;裸鼠成瘤实验验证DKK2体外对细胞增殖的影响;通过qRT-PCR、WB及免疫组化分析DKK2对细胞增殖抑制的作用机制。结果与正常肾上皮组织相比,DKK2 mRNA在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的中表达明显下调,差异具有统计学意义(P <0. 001);与对照组相比(100%),转染后24、48、72 h实验组细胞活性受到明显的抑制(P <0. 05),同时实验组细胞克隆形成明显受到抑制(31. 11±2. 14)%(P <0. 05);流式细胞实验发现,与对照组相比,实验组细胞明显阻滞于G1期(P <0. 001),实验组中细胞凋亡率明显升高(P <0. 001);与对照组相比,过表达DKK2后裸鼠肿瘤和体积大小明显降低(P <0. 001);过表达DKK2后,active-β-catenin及下游的基因受到了明显抑制。结论 DKK2在人皮肤肾母细胞瘤组织中表达下调,可能通过拮抗Wnt/β-catenin信号通路参与肾母细胞瘤的机制。

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实用肿瘤学杂志

期刊名称:实用肿瘤学杂志

期刊人气:2037

期刊详情

主管单位:哈尔滨医科大学

主办单位:黑龙江省肿瘤医院

出版地方:黑龙江

专业分类:医学

国际刊号:1002-3070

国内刊号:23-1212/R

邮发代号:14-159

创刊时间:1986年

发行周期:双月刊

期刊开本:大16开

见刊时间:10-12个月

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