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Seipin敲低大鼠PC12细胞株的构建和对细胞凋亡的影响

  • 作者:吕菊  胡玉梅  任真奎  谢鹏  张春林  焦玲  禹文峰
  • 单位:贵州医科大学分子生物学重点实验室  贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室  黔西南州人民医院检验科  贵州医科大学基础医学院  贵州医科大学附院神经内科

摘要:

目的:构建大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的先天性脂肪代谢障碍2型(BSCL2/Seipin)敲低细胞株,探讨Seipin敲低后对细胞凋亡的影响。方法:将PC12细胞分为空白感染组和助感染组(加助感染试剂Hitans G),采用不同慢病毒感染复数(MOI)感染细胞进行病毒预感染试验筛选助感染试剂和合适的MOI;依据上述感染条件,用阴性对照病毒和Seipin-shRNA目的病毒感染PC12细胞作为阴性对照组和Seipin敲低组,同时设置正常组(正常PC12细胞),采用蛋白质免疫印迹法检测Seipin蛋白的表达;将阴性对照组与Seipin敲低组细胞用脱氧核苷酸末端转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)细胞凋亡染色法和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡情况。结果:慢病毒MOI=100时感染效果最强,助感染试剂能增加感染效率;与正常组相比,Seipin敲低组Seipin蛋白表达水平降低(P <0. 05);与阴性对照组相比,TUNEL染色结果显示Seipin敲低组发红色荧光的凋亡细胞明显增加,Hoechst染色结果显示Seipin敲低组细胞的细胞核致密浓染或碎块状致密浓染程度明显增多。结论:成功构建大鼠PC12 Seipin敲低细胞,下调Seipin蛋白表达会增加细胞凋亡。

  • 【关键词】:
  • 细胞凋亡
  • 帕金森病
  • PC12细胞
  • 神经变性疾病
  • Seipin蛋白
  • 基因干扰

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期刊名称:贵州医科大学学报

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主管单位:贵州医科大学

主办单位:贵州医科大学

出版地方:贵州

专业分类:医学

国际刊号:1000-2707

国内刊号:52-1164/R

邮发代号:66-48

创刊时间:1958年

发行周期:月刊

期刊开本:大16开

见刊时间:7-9个月

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