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弓形虫SAG1-GRA1复合基因真核表达重组质粒的构建与表达

  • 作者:綦廷娜  石畅  汪政勇  宗永丽  李金福
  • 单位:贵州医科大学基础医学院微生物学教研室  中国人民解放军联勤保障部队第968医院神经内分泌科  贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室

摘要:

目的:构建弓形虫SAG1-GRA1复合基因真核表达重组质粒,并观察其在小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3细胞中的表达。方法:采用聚合酶链反应(PCR)法分别扩增弓形虫SAG1和GRA1基因片段,导入质粒载体pc DNA3. 1(+),构建真核表达重组质粒pc DNA3. 1(+)-SAG1和pc DNA3. 1(+)-GRA1,继而构建重组质粒pc DNA3. 1(+)-SAG1-GRA1;设pc DNA3. 1(+)-SAG1-GRA1为实验组、pc DNA3. 1(+)为对照组分别转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光染色法鉴定其在NIH3T3细胞中的表达。结果:限制性内切酶双酶切及DNA测序分析结果显示,插入pc DNA3. 1(+)的片段分别为1 008 bp、570 bp和1 578 bp,与预期的SAG1、GRA1和SAG1-GRA1复合基因分子大小相当、序列一致;免疫荧光染色法结果显示,转染重组质粒pc DNA3. 1(+)-SAG1-GRA1的NIH3T3细胞内观察到较强的绿色荧光,而转染pc DNA3. 1(+)的NIH3T3细胞内未见绿色荧光。结论:成功构建了弓形虫SAG1-GRA1复合基因真核表达重组质粒pc DNA3. 1(+)-SAG1-GRA1,且该重组质粒携带的SAG1-GRA1复合基因在NIH3T3细胞中获得表达。

  • 【关键词】:
  • 弓形虫属
  • SAG1基因
  • GRA1基因
  • 基因重组
  • 重组质粒
  • 体外表达

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期刊名称:贵州医科大学学报

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期刊详情

主管单位:贵州医科大学

主办单位:贵州医科大学

出版地方:贵州

专业分类:医学

国际刊号:1000-2707

国内刊号:52-1164/R

邮发代号:66-48

创刊时间:1958年

发行周期:月刊

期刊开本:大16开

见刊时间:7-9个月

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