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人黑素瘤相关抗原D4原核表达条件的优化

  • 作者：邓芸婷  顾永耀  蔡丹昭  罗育  高精洧  李霞琼  黄冠文  谢小薰  贺菽嘉
  • 单位：广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室  广西医科大学基础医学院病理学教研室  广西医科大学广西高校生物分子医学研究重点实验室  广西医科大学  广西医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

摘要：

目的:探索黑素瘤相关抗原D4（MAGE-D4）基因工程菌原核诱导表达的最佳条件,以提高目的蛋白产量。方法:设置不同宿主菌（DH5α、TB1、Rosetta）、诱导时机（重组菌分别培养0.5～3 h后进行诱导）、诱导剂IPTG浓度（0.1～0.9 mmol/L）和诱导时间（1～8 h）等条件,诱导MAGE-D4重组质粒表达,通过SDS-PAGE电泳和Image J软件扫描电泳图谱的方法,对目的蛋白的表达量和可溶性进行分析。通过间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法对35例肝癌患者血清MAGE-D4抗体进行检测,分析MAGE-D4融合蛋白的免疫活性。结果:将重组质粒转化至Rosetta（DE3）大肠杆菌,菌液OD600达到0.8时加入IPTG至终浓度0.9 mmol/L,37℃诱导培养7 h,可有效提高目的蛋白的表达量。可溶性MAGE-D4融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的25.5%。肝癌患者血清中MAGE-D4抗体的阳性率为28.57%（10/35）,其MAGE-D4抗体平均效价明显高于正常人（P<0.05）。结论:本研究优化了MAGE-D4融合蛋白的原核表达条件,获得了可溶性、具有免疫活性的重组蛋白。

  • 【基   金】：
  • 国家自然科学地区基金资助项目(No.81660464)
  • 广西高校科学技术研究课题资助项目(No.KY2015YB058)
  • 广西医科大学青年科学基金资助项目(No.GXMUYSF2014012)
  • 广西高校生物分子医学研究重点实验室开放课题资助项目(No.GXBMR201601)
  • 【关键词】：
  • 黑素瘤相关抗原D4;原核表达;优化;

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期刊名称：广西医科大学学报

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主管单位：广西医科大学

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出版地方：广西

专业分类：医学

国际刊号：1005-930X

国内刊号：45-1211/R

邮发代号：48-178

创刊时间：1971年

发行周期：月刊

期刊开本：大16开

见刊时间：4-6个月

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