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育龄妇女MTHFR C677T基因多态性与复发性流产的分析

2023-11-28 139 上传者：管理员

摘要：目的探讨厦门地区育龄妇女亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetrahydrofolate reductase, MTHFR) C677T基因多态性分布特征，并分析该基因多态性与复发性流产(RSA)的相关性，为该地区育龄妇女的生殖保健工作提供科学依据。方法对2020年1月—2021年12月在厦门大学附属第一医院就诊的1 326例育龄妇女的MTHFR基因C677T位点的基因型检测结果进行回顾统计，分析该基因型分布特征，并与已报道的其他中国南方城市进行比较；选取该时期无合并症的276例孕妇(对照组)和RSA就诊的317例妇女(观察组),比较两组间MTHFR C677T位点的基因型分布差异。结果厦门地区育龄妇女MTHFR C677T基因CC型、CT型和TT型分布频率分别为51.0%、39.0%和10.0%;677C和677T等位基因分布频率为70.5%和29.5%。该地区MTHFR C677T基因型和等位基因分布频率与广东地区相近，差异无统计学意义(P>0.05),与江苏苏州、安徽地区、上海浦东、浙江台州、浙江湖州、江西地区、湖北武汉等地区差异均有统计学意义(均P<0.05)。在厦门地区育龄妇女中，统计分析暂未发现RSA与MTHFR C677T基因多态性存在直接关联。结论厦门地区育龄妇女的MTHFR C677T基因呈现多态性分布，具有东南沿海地区的分布特征；未发现该地区RSA与MTHFR C677T基因多态性具有关联性。

关键词：
MTHFR C677T
厦门
叶酸
基因多态性
复发性流产
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叶酸是一种水溶性B 族维生素(又称为维生素B9),参与细胞能量代谢及蛋白质、核酸合成，在基因表达方面发挥重要作用，是机体细胞生长和增殖不可或缺的物质。亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetrahydrofolate reductase, MTHFR)全称为 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶，是人体吸收利用叶酸代谢的关键酶，可将5,10-亚甲基四氢叶酸还原为组织和血清的主要活性形式——5-甲基四氢叶酸。MTHFR C677T(rs1801133)是MTHFR 基因第4 号外显子上的第677个核苷酸上发生了CT突变，研究表明，该突变会导致MTHFR 活性及热稳定性降低，从而导致叶酸代谢障碍——5-甲基四氢叶酸生成受阻，引起血液同型半胱氨酸(Hcy)升高，甲硫氨酸含量下降，这会致使蛋白质和核酸甲基化异常，升高的 Hcy会进一步通过影响血管内皮、血小板、机体抗凝和纤溶系统等功能而诱发血栓形成，从而导致心血管疾病、新生儿出生缺陷、流产、胎盘早剥、先兆子痫等多种疾病发病风险上升[1]。习惯性流产即女性孕28周以前自然流产次数≥ 2 次 ( 或 3 次 ) 者，其中80%左右发生在孕12 周以内，国际上常称之为复发性流产(recurrent spontaneous abortion, RSA),发生率为 2%～4% [2]。该病的致病因素较多且复杂，常见的主要有解剖因素、遗传因素、内分泌因素、血栓前状态、免疫功能异常、感染、男方因素以及其他不良因素等。尚有50%左右无法查到确切致病因素的RSA被称为原因不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)或同种免疫性 RSA[3]。相关研究表明，孕妇体内叶酸水平与妊娠结局密切相关，MTHFR基因突变会导致其酶活性降低，影响叶酸合成，可引起育龄妇女机体出现高凝状态和胎盘栓塞并诱发RSA [4]。MTHFR作为叶酸代谢过程中的一种关键酶，其基因型在不同地区和国家呈多态性分布[5]。本研究通过回顾分析厦门地区育龄妇女的 MTHFR C677T 基因突变情况，与已报道的其他中国南方地区的该基因多态性特征进行比较，并从宏观角度分析探讨RSA与 MTHFR C677T 基因多态性的相关性，以期为该地区育龄妇女的生殖保健工作提供科学参考依据。

1、资料与方法

1.1 资料来源

选择2020年1月—2021年12 月在厦门大学附属第一医院进行MTHFR C677T基因型检查的1 326例汉族育龄妇女为研究对象，剔除复检病例，年龄21～49岁，平均年龄(31.74±4.77)岁，对其MTHFR C677T基因多态性特征进行回顾性分析。并选取该时期无合并症的276例孕妇(对照组) 和RSA就诊的317例妇女(观察组),比较两组间MTHFR C677T位点的基因型分布差异。

1.2 方法

所有研究对象均采集静脉血2 ml(含EDTA抗凝剂采血管),并按试剂说明书提取血样的全基因DNA。预先配制并分装好扩增液，然后加入提取好的样品DNA 模板溶液(每个实验批次均设置阴阳性对照),最后放入罗氏480 PCR荧光定量分析仪中进行扩增。PCR仪器扩增程序设置：检测项目选择双水解探针；反应系20 μl(包括PCR混合液10 μl、引物和探针混合液0.25 μl、双蒸水 5.75 μl、DNA 模板 4 μl);反应条件 50 ℃ 2 min(1个循环),95 ℃ 2 min (1个循环),95 ℃ 15 s 、60 ℃ 1 min(45个循环);荧光信号收集设为FAM和VIC通道，数据采集温度设在60 ℃。PCR反应完成后，在荧光定量PCR仪上读取各个样品孔的终点荧光，然后应用分析软件判读各样本的基因分型。整个实验过程均严格按照试剂说明书及实验室操作规程进行。试剂：深圳泰乐德医疗有限公司MTHFR C677T基因检测试剂盒。仪器：罗氏LightCycler 480全自动荧光PCR仪。

1.3 统计学分析

数据处理均采用Microsoft Excel 2018版和SPSS 26.0版统计学软件进行统计分析。计数资料采用[例(%)]的表达形式，组间数据分析采用χ2检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 Hardy-Weinberg遗传平衡检验

对纳入研究的1 326例样本的MTHFR C677T基因分型结果进行Hardy-Weinberg 遗传平衡检验 ,结果符合Hardy-Weinberg 遗传平衡，证明本研究样本人群的MTHFR C677T基因分布频率符合遗传平衡法则，结果具有本地区群体代表性，可用于下一步研究。见表1。

表1 Hardy-Weinberg遗传平衡检验(例)

2.2 中国南方地区 MTHFR C677T基因多态性比较

查阅近年来其他中国南方地区对该基因多态性特征的相关研究文献，去除未执行Hardy-Weinberg 遗传平衡检验的文献数据，筛选出具有代表性的文献材料。通过对中国南方地区汉族女性基因多态性分布频率与本地区研究结果进行比较分析后发现，厦门地区的汉族育龄妇女MTHFR C677T基因的多态性与苏州、安徽、浦东、台州、湖州、江西、武汉、松滋、长沙、湘潭、遂宁、成都、潼南、昆明、贵州、南宁、海南的结果差异有统计学意义 ( P<0.05) ;而与同为东南沿海的广东地区的结果比较，差异无统计学意义 ( P>0.05) 。纵观纳入本研究的中国南方地区各地汉族女性人群的 T 等位基因频率，T 等位基因频率最低的广西南宁地区为 24.2%,最高的安徽地区为 50.2%,总体呈由南到北上升的趋势。中国南方各地区汉族女性 MTHFR C677T 基因多态性分布特征见表2和图1。

表2 厦门地区汉族育龄妇女与其他中国南方地区MTHFR C677T基因分型及等位基因频率分布比较[例(%) ]

图1 中国南方地区育龄妇女MTHFR C677T 基因多态性分布特征

2.3 厦门地区育龄妇女MTHFR C677T基因多态性与RSA的关系分析

两组间MTHFR C677T基因分型频率与等位基因频率接近，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 对照组与观察组MTHFR C677T基因型频率和等位基因频率分布比较[例 ( %) ]

3、讨论

叶酸是机体必需的微量元素之一，但无法自身合成，需要经过相关代谢酶转化才能被机体利用，参与叶酸代谢的酶较多，其中MTHFR在叶酸——甲硫氨酸代谢途径中起着关键作用。MTHFR主要作用是促进生成5-甲基四氢叶酸，为血液中的 Hcy 再甲基化生成蛋氨酸提供甲基供体，同时维持体内正常的同型半胱氨酸水平，是叶酸代谢的关键限速酶，其编码基因位于染色体 1p36.3,编码区长 1 970 bp, 拥有13个外显子。MTHFR基因有20多种基因多态性位点，早在1995年，学者Frosst发现其第 677位点具有单核苷酸多态性，且易发生突变，存在三种基因型(CC型、CT型、TT型)。MTHFR 677位点突变不仅会使其酶的活性及热稳定性下降，还会导致其编码的蛋白质由丙氨酸变成缬氨酸[24]。相关大样本数据研究显示 MTHFR C677T 发生突变的概率为39.55% ,且不同的国家和地区的T 等位基因频率不等(2.0%～54.55%) [25]。本研究数据显示，厦门地区 T 等位基因频率( 29.5% ) 与大样本数据研究所得结果基本相符。近年来，MTHFR基因多态性分布与RSA相关性的研究越来越受到关注，但研究结果不尽相同，尚存争议。朱长玲等的研究数据显示RSA 患者MTHFR 677 T 等位基因频率高于正常孕妇组，且差异具有统计学意义(P<0.05),说明 T 等位基因可能是导致 RSA 的高危因素之一[26] 。而另一项在泸州育龄妇女的研究数据显示，RSA与当地MTHFR C677T 基因多态性尚未发现存在直接关联(P>0.05)[27]。究其原因可能与不同文献的研究设计、研究方法、纳入研究的样本量不同以及MTHFR C677T基因多态性具有地理和种族分布差异有关。

本文通过对1326例厦门地区汉族育龄妇女的MTHFR C677T基因分型检测结果进行回顾性分析，研究该地区基因多态性分布特征，并探讨该基因多态性与RSA的关系。研究结果显示MTHFR C677T基因野生型(CC)、杂合突变型(CT) 和纯合突变型(TT)分别占 51%、39%和 10%,T 等位基因频率为 29.5%,T 等位基因频率除了略高于广东地区(29.2%)、广西南宁(24.2%)和海南地区(26.2%),均低于其他大部分中国南方城市；研究还发现本地区MTHFR C677T基因的多态性与广东地区的大样本筛查结果相比差异无统计学意义(P>0.05),说明厦门地区MTHFR C677T 基因多态性具有东南沿海区域的分布特征。另外通过对厦门地区RSA与MTHFR C677T 基因多态性的相关性分析显示，本地区的RSA 组MTHFR C677T基因突变频率与对照组相比差异并无统计学意义(P>0.05)。

综上所述，本地区汉族育龄妇女MTHFR 基因C677T 位点的突变率较低，暂未发现RSA与 MTHFR C677T基因多态性存在直接关联，表明MTHFR C677T基因突变可能不是本地区RSA的主要致病因素。基于本研究是回顾性研究，具有一定局限性，且MTHFR C677T基因多态性具有明显的区域性特征，同时RSA 病因纷繁复杂，不仅受遗传因素的影响，还受到子宫的解剖因素、机体免疫因素、内分泌因素、感染因素、配偶特有因素、精神心理及环境等诸多因素的影响[28]。后续可通过大样本量、多中心、系统全面的深入研究进一步探讨两者之间的关系。

参考文献:

[2]张建平.复发性流产诊治的专家共识[J].中华妇产科杂志,2016,51(1):3-9.

[4]张仪,有风芝,秦奇,等.MTHFR基因多态性及叶酸摄入量与不良孕产史关系的研究[J].医药论坛杂志,2017,38(1):66-69.

[5]何天文,黄演林,丁红珂,等.广东地区汉族育龄妇女MTHFR基因遗传多态性[J].临床检验杂志,2020,38(3):226-229.

[6]宋妙丽,朱耿超,魏佳玲,等.苏州地区育龄妇女MTHFR C677T基因多态性分布[J].贵州医科大学学报,2017,42(7):808-811.

[7]汪波,范利平,史德宝,等.安徽地区汉族孕妇人群MTHFR基因多态性研究[J].临床输血与检验,2017,19(6):581-584.

[8]胡晓英,姜伶俐,柳洲,等.上海市浦东地区汉族女性MTHFR和MTRR基因多态性分布研究[J].中国妇幼保健,2019,34(14):3265-3267.

[9]杨英梅,池宏波,陈文举.台州市育龄女性亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性分析[J].中国卫生检验杂志,2021,31(4):508-510.

[10]丁忠英,费建英,李茂宇,等.湖州地区女性人群亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与不良妊娠结局相关性研究[J].中国卫生检验杂志,2020,30(19):2355-2358.

[11]徐永华,刘艳秋,张兆振,等.江西地区育龄女性HCY水平及其亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性分析[J].江西医药,2020,55(2):163-165.

[12]李卉,江雨霏,高唐鑫子,等.武汉地区育龄期汉族女性叶酸代谢相关酶基因多态性研究[J].国际检验医学杂志,2020,41(20):2473-2476.

[13]罗秀莉,鲁衍强,郭文竹,等.湖北松滋市汉族女性MTHFR与MTRR基因多态性分布[J].公共卫生与预防医学,2014,25(2):29-32.