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MicroRNA-148a在妊娠期肝内胆汁淤积症中的表达及临床预测价值

2024-01-17 15 上传者：管理员

摘要：目的探讨microRNA-148a在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）中的表达及临床预测价值。方法选取2020年2月—2022年1月天水市中西医结合医院收治的113例ICP患者作为ICP组，另选取同期在该院产检的80例健康孕妇作为对照组。对比两组肝功能及microRNA-148a相对表达量。随访统计ICP患者妊娠结局，并依据妊娠结局分为不良组和良好组。对比不同妊娠结局ICP患者临床资料及microRNA-148a相对表达量。多因素逐步Logistic回归模型分析影响ICP患者妊娠结局的相关因素。绘制受试者工作特征（ROC）曲线，以曲线下面积（AUC）分析microRNA-148a对ICP患者妊娠结局的预测效能。结果 ICP组总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、门冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）及microRNA-148a相对表达量高于对照组（P <0.05）。不良组与良好组年龄、体质量指数、孕周、产次构成、DBIL、AST、ALT、白细胞计数、血小板计数、平均血小板体积、血红蛋白、尿蛋白、血肌酐比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。不良组重度ICP病情占比高于良好组，TBA、TBIL、microRNA-148a相对表达量高于良好组（P <0.05）。多因素逐步Logistic回归分析结果显示：重度ICP病情[■=2.875(95%CI:1.093,7.559)]、microRNA-148a高表达[■=3.343(95%CI:1.272,8.791)]均为影响ICP孕妇预后的危险因素（P <0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清microRNA-148a预测ICP孕妇妊娠结局的最佳截断值为1.12，敏感性、特异性及曲线下面积分别为72.73%(95%CI:0.496,0.884)、81.32%(95%CI:0.715,0.884)、0.798(95%CI:0.712,0.868)。结论 microRNA-148a在ICP患者中高表达，且血清microRNA-148a对ICP患者妊娠结局的预测效能较高。

关键词：
microRNA-148a
妊娠期肝内胆汁淤积症
妊娠结局
肝功能异常
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妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP）是一种妊娠期特发性疾病，多发于妊娠中晚期，以转氨酶和血清总胆汁酸（total bile acid,TBA）水平升高、局限性皮肤瘙痒为特征[1]。ICP早期无明显症状，随着疾病的进展，可对胎儿产生不利影响，故早期对ICP孕妇不良妊娠结局进行预测，并给予积极有效的治疗，有利于改善妊娠结局[2,3]。目前临床中多通过TBA、炎症因子等生化指标来预测ICP孕妇的妊娠结局，但以上指标受年龄、贫血等因素的影响较大，临床应用有一定局限性，故亟须寻求更为有效的指标对ICP孕妇妊娠结局进行预测[4,5]。

目前有研究表明，micro RNA参与ICP疾病的发生、发展[6]。Micro RNA-148a是参与免疫应答的重要micro RNA之一，在机体免疫应答及炎症疾病中发挥着重要作用[7]，但目前国内外有关micro RNA-148a在ICP发病中的表达情况尚鲜见报道。鉴于此，本研究拟探讨micro RNA-148a在ICP中的表达及临床预测价值，为该类孕妇的临床治疗和妊娠结局改善提供一定的参考价值。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年2月—2022年1月天水市中西医结合医院收治的113例ICP孕妇作为ICP组，另选取同期在本院产检的80例健康孕妇作为对照组。纳入标准：(1)ICP组符合《妇产科学》[8]中ICP的诊断标准，即TBA≥10μmol/L，皮肤瘙痒；(2)年龄23～36岁；(3)孕周21～36周；(4)单胎妊娠。排除标准：(1)有肝炎、肝硬化病史；(2)合并恶性肿瘤；(3)合并代谢性疾病或血液系统疾病；(4)智力障碍或有精神疾病；(5)合并妊娠期其他并发症。两组年龄、体质量指数、孕周、产次比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性（见表1）。本研究经医院医学伦理委员会批准同意，研究对象签署知情同意书。

1.2 聚合酶链反应检测micro RNA-148a

研究对象入院时采集外周静脉血5 m L，以3 800 r/min离心5 min，分离血清，于-20℃保存待测。利用mi RNA提取试剂盒（杭州诺扬生物技术有限公司）提取血清mi RNA，并检测mi RNA的质量和浓度，将mi RNAs逆转录为c DNA。micro RNA-148a正向引物：5'-TACTGTCTGCGTA AGCATGATCA-3'，反向引物：5'-TAGTAGTGATT GATGACCATACT-3'，长度均23 bp;U6正向引物：5'-ACGACTAGTCAGAGTAGTGTA-3'，反向引物：5'-CAGTAGTCGATGTGAGTATCG-3'，长度均23 bp，反应体系：10μL 2×SYBR Mix,10×c DNA模板1μL，正反向引物各1μL,H2O 8μL，每个样品重复3次。反应条件：93℃预变性2 min,93℃变性12 s、67℃退火32 s,76℃延伸3 min，共39个循环，72℃再延伸10 min。在PCR仪（型号：M200 PRO，厦门安普利生物工程有限公司）上反应，以U6作为内参，按照2-ΔΔCt法计算micro RNA-148a m RNA相对表达量。

表1 两组一般资料比较

1.3 随访

随访ICP孕妇妊娠结局，将终止妊娠、早产、新生儿窒息、胎儿窘迫、羊水污染、围产期胎儿死亡均计为妊娠结局不良，并依据妊娠结局分为不良组和良好组。

1.4 临床资料收集

收集影响ICP孕妇妊娠结局的临床资料，包括年龄、体质量指数、孕周、TBA、产次、ICP病情严重程度[8]、肝功能指标[总胆红素（total bilirubin,TBIL）、直接胆红素（direct bilirubin,DBIL）、门冬氨酸转氨酶（aspartate transaminase,AST）、丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）]、白细胞计数、血小板计数、平均血小板体积、血红蛋白、尿蛋白、血肌酐、micro RNA-148a相对表达量。

1.5 统计学方法

数据分析采用SPSS 21.0统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验；计数资料以构成比或率（%）表示，比较用χ2检验；影响因素的分析采用多因素逐步Logistic回归模型；绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 两组肝功能及micro RNA-148a m RNA相对表达量比较

两组TBIL、DBIL、AST、ALT及micro RNA-148a m RNA相对表达量比较，差异均有统计学意义（P<0.05),ICP组高于对照组。见表2。

表2 两组肝功能及micro RNA-148a m RNA相对表达量比较（±s)

2.2 不同妊娠结局ICP孕妇临床资料和micro RNA-148a相对表达量比较

截至随访结束，113例ICP孕妇妊娠结局不良共22例（早产8例、新生儿窒息4例、羊水污染6例、胎儿窘迫4例），妊娠结局不良发生率为19.47%。

不良组与良好组年龄、体质量指数、孕周、产次构成、DBIL、AST、ALT、白细胞计数、血小板计数、平均血小板体积、血红蛋白、尿蛋白、血肌酐比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。不良组与良好组TBA、ICP病情程度、TBIL、micro RNA-148a比较，差异均有统计学意义（P<0.05），不良组重度ICP病情占比、TBA、TBIL、micro RNA-148a水平高于良好组。见表3。

表3 不同妊娠结局ICP孕妇临床资料和micro RNA-148a表达水平比较

2.3 影响ICP孕妇妊娠结局的多因素逐步Logistic回归分析

以ICP孕妇妊娠结局（妊娠结局良好=0，妊娠结局不良=1）为因变量，以ICP病情（轻度=0，重度=1）、TBA（实测值）、TBIL（实测值）、micro RNA-148a相对表达量（实测值）为自变量，进行多因素逐步Logistic回归分析（α入=0.05,α出=0.10），结果显示：重度ICP病情[O^R=2.875(95%CI:1.093,7.559）]、micro RNA-148a高表达[O^R=3.343(95%CI:1.272,8.791）]均为影响ICP孕妇预后的危险因素（P<0.05）。见表4。

表4 影响ICP孕妇妊娠结局的多因素Logistic逐步回归分析参数

2.4 micro RNA-148a对ICP孕妇妊娠结局的预测效能

ROC曲线分析结果显示，血清micro RNA-148a预测ICP孕妇妊娠结局的最佳截断值为1.12，敏感性、特异性及曲线下面积分别为72.73%(95%CI:0.496,0.884）、81.32%(95%CI:0.715,0.884）、0.798(95%CI:0.712,0.868）。见图1。

图1 血清micro RNA-148a预测ICP孕妇妊娠结局的ROC曲线

3、讨论

ICP是一种多发于妊娠中晚期的可逆性疾病，常引起肝功能受损、黄疸、皮肤瘙痒等症状，更甚者诱发不良妊娠结局，严重影响母子健康[9,10,11]。ICP发病机制目前尚不明确，可能与遗传、激素及环境等因素有关，可导致围产儿患病率、死亡率升高，并可能导致早产、胎儿宫内窘迫等不良妊娠结局，故准确评估ICP孕妇病情，并进行早期防治对改善ICP妊娠结局意义重大[12,13]。Micro RNA是一类重要的表观遗传学调控分子，长度为19～25个核苷酸。有研究表明，micro RNA-425、micro RNA-221等表达水平与ICP的发生、发展有关[14,15]。Micro RNA-148a的潜在靶基因主要参与蛋白的去磷酸化、细胞氮化合物反应等生物过程，主要分子功能为转移酶、酶结合等，在ICP中的表达目前尚不清楚。探讨micro RNA-148a在ICP中的表达及临床预测价值，有利于改善ICP孕妇的妊娠结局。

本研究结果显示，ICP组TBIL、DBIL、AST、ALT及micro RNA-148a m RNA相对表达量均高于对照组，提示与健康孕妇相比，ICP孕妇肝功能和micro RNA-148a表达水平异常升高。分析其原因可能为，ICP孕妇胆汁淤积，无法顺利完成肝肠循环，进而可影响肝功能。ICP的发病可能与免疫功能失调有关，机体免疫平衡失调在ICP的发生、发展中具有重要作用；人类基因组中约30%有编码蛋白功能的基因受micro RNA的调控，此外micro RNA-148a表达与肝功能异常有关[16],ICP孕妇肝功能异常可能在一定程度上导致micro RNA-148a表达升高。本研究结果中，ICP孕妇妊娠结局不良发生率为19.47%，与钟萍娇等[17]研究结果19.44%相接近，进一步证实ICP孕妇妊娠结局不良发生率较高。不良组孕妇重度病情占比、TBA、TBIL、micro RNA-148a相对表达量均高于良好组，并经多因素逐步Logistic回归分析结果显示，ICP病情为重度、micro RNA-148a高表达均为影响ICP孕妇预后的独立因素；分析其原因可能为ICP病情为重度孕妇由于病情相对较为严重，可直接影响妊娠结局，且病情越严重，妊娠结局不良的发生风险越高。Micro RNA参与细胞分化、增殖及发育等活动，其表达水平变化与多种疾病的发生有关。Micro RNA在妊娠不同时期具有不同的影响，与妊娠并发症的发生、发展存在一定联系；micro RNA-148a可通过促进肝特异性表型在肝脏中发挥重要作用，其表达水平与不同类型的肝脏疾病病密切相关[18]，而ICP孕妇往往存在肝功能异常，故推测micro RNA-148a可能与ICP的发生、发展有关。ROC曲线分析结果显示，血清micro RNA-148a对ICP孕妇妊娠结局预测的敏感性、特异性及曲线下面积分别为72.73%、81.32%、0.798，提示血清micro RNA-148a对ICP孕妇妊娠结局预测的效能较高。血清micro RNA-148a可对ICP孕妇妊娠结局进行预测的机制可能为，micro RNA-148a可通过与micro RNA的3'-UTR配对结合，抑制micro RNA的翻译或促使其降解，进而在基因转录水平上对靶基因进行负调控[19,20,21];RAO等[22]研究表明，micro RNA-148a可能通过孕烷X受体/多耐药蛋白3信号通路参与ICP对雌激素的诱导；故血清micro RNA-148a可对ICP孕妇妊娠结局进行预测。

综上所述，micro RNA-148a在ICP孕妇中高表达，且血清micro RNA-148a对ICP孕妇妊娠结局预测效能较高，建议在临床中可通过检测micro RNA-148a表达水平对ICP孕妇妊娠结局进行预测，并尽早采取有效防治措施，以降低妊娠结局不良发生率。本研究的不足之处在于纳入的研究样本量较少，在后续的研究中还需扩充样本量，以对micro RNA-148a在ICP孕妇发展中的具体作用机制进行深入研究。

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