首页 > 论文范文 > 工程工业论文 > 工业综合论文 > 化工工业论文 > 探讨盐酸苯海索中潜在基因毒性杂质氯代环己烷的测定

探讨盐酸苯海索中潜在基因毒性杂质氯代环己烷的测定

2020-09-19 314 上传者：管理员

摘要：目的建立气相色谱法测定盐酸苯海索中潜在基因毒性杂质氯代环己烷。方法：以DB-624(30m×0.32mm,1.8μm)为色谱柱，程序升温；氮气为载气，流速为2.0mL/min；采用FID检测器，检测器温度为250℃；进样口温度为160℃，进样量为1.0μL，分流比为5∶1。结果：氯代环己烷在1.5167～15.1668μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999)，检测限为0.4550μg/mL，定量限为1.5167μg/mL，加标回收率平均值为101.0%(RSD=1.14%,n=9)。结论：该方法准确、简便，适合于盐酸苯海索中潜在基因毒性杂质氯代环己烷的测定。

关键词：
化工工业
有机化工
气相色谱法
氯代环己烷
潜在基因毒性杂质
盐酸苯海索
加入收藏

盐酸苯海索主要用于治疗帕金森病和帕金森综合症，也可以用于药物引起的锥体外系疾病，为中枢抗胆碱抗帕金森病药[1-3]。

盐酸苯海索以盐酸哌啶苯丙酮与氯代环己烷、镁屑进行格氏加成，再经水解得到(图1)[4]。

图1盐酸苯海索合成路线图

基因毒性杂质或者潜在基因毒性杂质，严重威胁健康，需要严格控制此类杂质的限度，以保障用药安全[5,6]。根据欧盟委员会发布的关于警示结构基因毒性杂质的指南[7]，起始原料氯代环己烷具有脂肪族卤代烃的警示结构，为潜在基因毒性杂质。对于没有足够证据证明基因毒性阈值的杂质，可根据TTC(毒理学关注阈值)法来设定限度[8]，则氯代环己烷的TTC值为1.5μg·d-1，即每人每天可接受摄入量为1.5μg(大于10年治疗期)。盐酸苯海索每日最大剂量为20mg，盐酸苯海索中氯代环己烷的控制限度为75ppm(1.5μg·d-1/20mg·d-1*106)

1、仪器与试药

Agilent7890A气相色谱仪，岛津QP2010SE气相色谱仪；氯代环己烷(阿拉丁，99%)，无水乙醇(Scharlau,HPLC)；盐酸苯海索原料药(山东健康药业有限公司，批号：01,02,03)。

2、方法与结果

2.1方法

2.1.1色谱条件

照气相色谱法(中国药典2015年版四部通则0521)试验，色谱柱为DB-624(30m×0.32mm,1.8μm)；升温程序：起始温度70℃，保持2分钟，以每分钟2℃升至120℃，保持10分钟；载气为氮气；流速为每分钟2.0mL;FID检测器，温度为250℃；进样口温度为160℃；进样量为1.0μL；分流比为5∶1。

2.1.2溶液配制

对照品贮备液：精密称取氯代环己烷约75mg，置100mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL，置10mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

对照品溶液：精密量取对照品贮备液1mL，置10mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液：取本品约1.0g，精密称定，置15mL离心管中，精密加入无水乙醇10mL，涡旋5分钟，静置15分钟，取上清液，用0.45μm有机滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.1.3测定法

精密量取供试品溶液与对照品溶液各1.0μL，注入气相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与对照品溶液色谱图中氯代环己烷峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，不得过75ppm。

2.2方法学验证

2.2.1专属性试验

供试品加标溶液：取本品约1.0g，精密称定，置15mL离心管中，精密加入对照品贮备液1mL、无水乙醇9mL，涡旋5分钟，静置15分钟，取上清液，用0.45μm有机滤膜滤过，取续滤液，作为供试品加标溶液。

取空白溶剂(无水乙醇)、对照品溶液、供试品溶液及供试品加标溶液分别进样，记录色谱图(图2～5)。

图2空白溶液色谱图

图3对照品溶液色谱图(A：氯代环己烷峰)

图4供试品溶液色谱图

图5供试品加标溶液色谱图

结果表明，空白溶剂、供试品溶液对氯代环己烷的测定无干扰，各杂质峰与氯代环己烷峰均能有效分离，该方法专属性良好。

2.2.2重复性试验

配制1份供试品溶液及6份供试品加标溶液，分别进样，计算6份供试品加标溶液回收率平均值及RSD。氯代环己烷的回收率平均值为97.8%,RSD为0.56%，结果表明，本方法重复性良好。

2.2.3中间精密度试验

于不同时间，由不同人员，配制1份供试品溶液及6份供试品加标溶液，在不同仪器上，分别进样，计算12份供试品加标溶液回收率平均值及RSD(含重复性试验下的6份供试品加标溶液)。氯代环己烷回收率平均值为98.7%,RSD为2.04%，结果表明，本方法中间精密度良好。

2.2.4检测限与定量限

取对照品溶液，用无水乙醇逐级稀释成不同浓度的溶液，分别进样。在信噪比约为3时，测得氯代环己烷的检测限为0.4050μg/mL；在信噪比为约为10时，测得氯代环己烷的定量限为1.4584μg/mL。

2.2.5线性与范围

分别精密量取对照品贮备液0.2mL、0.5mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.5mL、2.0mL，置10mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为线性1～线性7溶液，分别进样，记录色谱图。以线性溶液浓度(X，μg/mL)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y=2158.8X-293.06(r=0.9999)。结果表明，氯代环己烷在1.5167～15.1668μg/mL内线性关系良好。

2.2.6准确度试验

配制一份供试品溶液，作为本底溶液。分别取本品约1.0g，精密称定，置15mL离心管中，分别精密加入对照品贮备液0.8mL、1.0mL、1.2mL及无水乙醇9.2mL、9.0mL、8.8mL，置离心管中，涡旋5分钟，静置15分钟后，取上清液，用0.45μm有机滤膜滤过，取续滤液，分别作为80%、100%、120%回收率溶液，分别进样，记录色谱图。氯代环己烷回收率平均值为101.0%(RSD=1.14%,n=9)，结果表明，本方法准确度良好。

2.2.7溶液稳定性试验

配制一份供试品加标溶液，于0h、1h、2h、4h、6h、8h、12h进样，氯代环己烷峰面积的RSD为1.40%，结果表明，供试品加标溶液12h内稳定性良好。

2.3样品测定

取3批盐酸苯海索原料药，按“2.1”项下方法测定氯代环己烷的含量。结果表明，3批盐酸苯海索原料药中氯代环己烷均为未检出。。

3、结论

本文建立气相色谱法，专属性强、准确、方便，适合于盐酸苯海索中潜在基因毒性杂质氯代环己烷的检测。

参考文献：

[1]杨颖琳,史美甫.帕金森病的药物治疗[J].中国药业,2005,12:19-22.

[2]闫珉,靳陆平,江德芹.苯海索在精神科的使用[J].临床精神医学杂志,2006(01):55-56.

[3]曹开谊.盐酸苯海索治疗帕金森病与帕金森综合征探究[J].中国处方药,2015,13(05):84-85.

[4]朱占元,黄东.盐酸苯海索的合成工艺改进[J].中国医药科学,2016,6(09):53-55.

[5]阮晓玲,郑项元,徐洁,等.药物中基因毒性杂质分析方法的研究进展[J].中国药科大学学报,2016,47(03):267-274.