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禽白血病的研究进展探究

2021-03-04 758 上传者：管理员

摘要：禽白血病是最先被人们关注并研究的鸡肿瘤性疾病之一。禽白血病病毒是目前已知的唯一拥有外源性和内源性重复活性的逆转录病毒。文章对禽白血病的相关研究情况进行总结概括，系统阐述了禽白血病的病原特征，包括目前发现的基因组、亚群及同源性的差异，以及常见临床症状、传播途径、流行情况、常用实验室诊断方法、疫苗情况、防制措施，为该病的深入研究和防控提供参考。

关键词：
传播途径
发病特征
疫苗情况
病毒基因组
禽白血病
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禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)引起禽的白血病和肿瘤性疾病，是最先被人们关注并研究的禽的三大肿瘤性疾病之一[1,2]。ALV是鸡肿瘤性疾病最主要的病原体[3]，也是目前已知的唯一拥有外源性和内源性重复活性的逆转录病毒[4]。该病主要表现为免疫抑制、生长迟缓、多器官组织肿瘤等特征[5]，是危害养鸡业的重要疫病之一。

1、病毒特征

ALV属于反转录病毒科，α反转录病毒属。病毒粒子直径80～100nm，有囊膜，整体类似球形，其中直径45nm的病毒核心位于中心，直径约8nm的囊膜表面有放射状的突起[1]。ALV为单股正链RNA病毒，全长7.2～7.8kb，通常以二聚体的形式存在，是典型的慢转化型反转录序列(5’-R-U5-gag-pol-env-U3-R-3’)，其中包含的结构基因分别编码群特异(gs)抗原、依赖RNA的DNA聚合酶和囊膜糖蛋白[6]。不同亚群的gag基因组高度一致，可编码6种蛋白(p19、p10、p27、p2、p15、p12)。其中p27为衣壳蛋白，是不同亚群ALV中的一段保持高度一致的序列，占总蛋白量的30%。因此，可以此作为抗原检测鸡群是否感染ALV。而pol基因是病毒基因组与宿主细胞基因组整合的关键，编码2种蛋白，为反转录酶(RT)和整合酶(IN)，主要负责产生前病毒DNA并将其整合于宿主细胞染色体中[6]。ALV结构见图1。

不同亚型的病毒在某些基因序列上存在不同，如:ALV-J的囊膜糖蛋白基因env-gp85比其他ALV少93～126个碱基，只有40%的同源性，而其他亚群之间可以高达80%～85%。ALV-J的pol基因与其他亚群同源性较高，但ALV-J的env基因与E亚群中一些病毒的同源性存在较大差异，只有75%和97%[2]。ALV基因组结构见图2。该病毒抵抗能力弱，各种脂溶性、去污剂、蛋白酶等都可以抑制其活性[1]。对紫外线有很强的抵抗力，耐低温，不耐酸碱和高温，在50℃可保持活性8min,60℃能保持30s[7]。

图1ALV结构示意图

图2ALV基因组结构示意图

2、ALV的分类及临床症状

2.1根据包膜蛋白抗原性分类

根据包膜蛋白的抗原性将ALV分为7个亚群，分别为A、B、C、D、E、J、K，其中A、B、C、D、J、K亚型为外源性AIV,E亚型为内源性AIV[9]。各亚群之间的感染病例在临床症状和病理变化上都存在差异[10]。ALV-A、ALV-B感染一般导致典型的淋巴细胞白血病，形成的肿瘤非常大，而ALV-J感染主要导致髓系白血病和血管肿瘤[11],ALV-C和ALV-D在临床病例中较为罕见，而ALV-K是最近在亚洲本土鸡群中发现的1种新型ALV亚型。在早期，垂直传播的ALV致病力非常强，通常情况下可以引起肿瘤，较多发生在性成熟的鸡群当中[10];也可以水平感染，但有1个种特异性范围[4]。E亚群在家养鸡及其野生祖先红色原鸡(RJF)中最先被发现，作为最近的进化整合，ALV-E通常在基因组中低拷贝数被发现，但通常保持高度的结构完整性[3]。具有复制能力和表达gag蛋白的ALV-E对鸡的肌肉生长速率、产卵数(包括大小和外壳厚度)的降低以及感染鸡向外排毒量的增加等性状都有影响[3]。外源性ALV通常是缓慢转化的病毒，通过插入诱变，在数周或数月内诱导淋巴样(A-D亚群)或髓样(J亚群)肿瘤形成，多发生在脏器中，呈不规则形状[10]，并可通过携带有病毒的脱落组织在群中传播[3]。在临床上鸡发病后表现为日渐消瘦，行走呈企鹅状;鸡冠和肉髯苍白，后期萎缩;皮肤多处有出血点且止血困难，个别出现血泡，破溃后血流不止，导致鸡失血过多而死，个别鸡也会形成血痂，但会反复脱落，最终也因失血过多致死;有的表现为腹水症;有的病鸡突然死亡。随着病情发展，可在许多内脏器官(常见于肝脏、脾脏)产生大小和数量各异、灰白色或淡灰黄色的肿瘤，最后因极度消耗衰竭而亡[7]。

2.2根据病毒血症、抗体分类

根据病毒血症、抗体或二者的存在，可分为V+A-、V+A+、V-A+3种。V+A-为无中和抗体的病毒血症，V+A+为有中和抗体的病毒血症，V-A+为无病毒血症有中和抗体。其中，V+A-和V+A+被认为是持续性病毒血症，与其他ALV亚群相比，大多数感染ALV-J的鸡在孵化日倾向于持续病毒血症[12]。

2.3根据白血病类型分类

根据常见的白血病类型可分为淋巴细胞白血病、成红细胞白血病、成髓细胞白血病、骨髓细胞白血病4种。

2.3.1淋巴细胞白血病

是临床上最为常见的类型，病鸡表现消瘦，无精神和食欲，鸡冠发白无血色(后期萎缩)，腹部膨大，用手触摸能感到肝脏肿大，最终多因机体衰竭而死亡[13]。

2.3.2成红细胞白血病

可分为增生型和贫血型2种。增生型表现为鸡冠发白或发紫，常独卧一角，体表毛囊部位出血，血液中红细胞显著增多;贫血型病程很短，预后大多不良，以死亡告终，表现为鸡冠淡黄色或白色，贫血，无力，对外界刺激不敏感[13]。

2.3.3成髓细胞白血病

临床症状表现和成红细胞白血病相似，只是病程更长，呈慢性经过[13]。

2.3.4骨髓细胞白血病

特征性病变为骨髓细胞内生长肿瘤，头部、胸骨和肋骨异常突起，病程较长[13]。

2.4根据致瘤性分类

2.4.1慢转化型

肿瘤形成需要数周或数月，时间较长，其主要机制是病毒基因组整合到宿主细胞内，扰乱细胞的表达或功能，诱导肿瘤发生[2]。

2.4.2急性型

肿瘤形成只需要在数天或数周，时间较短，其主要机制是利用1个或2个位置不定的病毒性癌基因感染病鸡后诱导胸腺、法氏囊的淋巴细胞凋亡，在感染中后期病毒会导致免疫器官的萎缩[2]。

3、流行病学特征

3.1ALV在自然条件下主要感染鸡，也可以感染野鸡、鸭、鹌鹑、鸽、鹧鸪、火鸡等。不同品系的鸡对病毒的抵抗力不同，白羽肉鸡的种鸡群发病率最高，罗斯308、京白、新布罗鸡则不易感[13]。发病鸡、带毒鸡和受感染的种蛋都是本病的传染源[6]。病毒主要存在于病鸡的粪便、血液、胚胎、泄殖腔以及羽毛囊中[7]。ALV存在3种传播方式:(1)水平传播。雏鸡在孵化箱中刚出生的几个小时，由于空间狭窄，气流不畅通，此时的胎粪是水平传播最主要的途径。(2)垂直传播或先天性传播。通过蛋清或产道从母鸡传给后代，此为最主要的传播途径[6]。(3)遗传传播。从父母代的基因传给后代[2]。大多数情况下，由水平传播所导致的ALV感染并不会引起肿瘤等临床症状，但是这些潜伏感染的鸡再产生后代时则会发病。消除垂直传播非常重要，因为病毒耐受鸡不产生中和抗体，病毒以很高的速率传播给后代，极易产生肿瘤[6]。

3.2本病一年四季都可发生，但潜伏期较长，随着鸡群日龄的增长其发病率越来越高，通常鸡群在光照刺激后开始发病，且症状越来越明显[14]。在自然条件下主要传染源是发病鸡或带毒鸡，有的母鸡虽然自身没有临床症状但因其自身带毒，产下的种蛋和孵化出的后代雏鸡就会带毒，在出雏时由于紧密接触，可以快速传染整个雏鸡群体，部分耐受过的雏鸡也不会产生病毒免疫抗体[5]。如果带毒鸡传染给雏鸡，雏鸡的发病率和死亡率会很高，1周内死亡淘汰率可高达10%以上，随着日龄增加4周龄时死亡率才慢慢下降[15]。母鸡和幼龄鸡的发病率较高，4～10月龄鸡发病率最高，感染的蛋鸡会停止产蛋，死亡率达20%以上[7]。

3.3在中国，由于从2008年开始实施ALV全国根除计划(NEP)，有代表性的大型养殖场外源性ALV感染显著减少[9]。然而ALV-J仍对中国家禽业构成巨大威胁[12]。各种ALV田间毒株仍在许多小规模本地鸡品种中传播，这些鸡品种尚未采用严格有效的根除方案[9]。2018年2月，中国有6个省份几乎同时暴发了1场ALV疫情，15～20周龄的繁殖肉鸡表现出抑郁、瘫痪和体重下降，有的病鸡死亡率达到15%[16,17]。2016年1月至2018年2月期间，吉林省对吉林、通化、白城、辽源、长白山等地的养殖场进行抽样检查，结果显示ALV总阳性率为57.74%[18]。河南、山东、广东、广西、江苏、安徽、海南和贵州也有相关报道，其中贵州省内ALV存在地方流行性[8,11,19～22]。

4、诊断方法

根据典型临床症状可以初步判定，确诊要再结合流行病学以及剖解病理变化，加上实验室病原检测[15]。实验室诊断主要包括血清学检测、酶联免疫吸附试验(ELISA)、细胞培养分离鉴定病毒、核酸检测等[5,15]。

4.1病毒的分离鉴定

ALV分离鉴定是国际公认的金标准，被认为是最可靠的方法。从感染家禽的肛拭子、羽髓、血液、精液及组织器等中均可检测到ALV的存在。通常使用鸡胚成纤维细胞的连续细胞系(DF1)，因为此细胞仅对外源性ALV敏感[12]。这种方法虽然较为灵敏有效，可排除内源性ALV的干扰，但由于整个过程耗时长，需花费近10天时间才能完成，不适合做大规模的快速检测[6]。

4.2酶联免疫吸附试验

用ELISA检测ALV是企业实际生产实践中最常用的方法，相比于其他方法其设备简单、经济且操作方便，比较适合大规模使用，主要有检测抗原和抗体2种方法。其中抗原的检测主要检测p27蛋白，通常采集胎粪和蛋清检测，而病毒抗体检测通常采集血清进行检测[15]。相比之下，检测特异性抗原p27更为常见，但是由于内源性病毒的少量表达，检测结果会受到一定的干扰，可能导致较高的假阳性率[6]。如果鸡群数量较大，需要淘汰所有阳性鸡，适合通过泄殖腔棉拭子采集材料;如果数量少，不能淘汰过多，适合使用蛋清作为检测材料;如果鸡场资金充足、种鸡价值较高，建议采用2种方法一起检测[20]。

4.3免疫荧光技术

间接免疫荧光相对于其他方法具有高灵敏度、高特异性的特点。因其可以具体到对单个细胞进行分析，可以检测到一些低滴度和早期感染细胞的病毒，主要有针对p27蛋白和env囊膜蛋白2种方法。针对p27蛋白的单抗可以检测到所有ALV。然而对于间接免疫荧光的结果判定存在一定的主观性，如一些非特异性或者微量荧光的判定结果常常因人而异[15]。

4.4聚合酶链式反应(PCR)

用PCR检测组织样品中病毒的核酸是实验室诊断常用的方法。该方法操作简单，灵敏度高，适合临床上大规模检测。PCR和RT-PCR的方法均能发挥作用，但因为病毒极易发生突变和重组，往往对于引物的要求比较高[15]。

目前对于ALV的检测仍然以RT-PCR、ELISA、核酸探针、单克隆抗体为主，ELISA更适用于大面积检测，在检测中被大量使用[6]。

5、防制措施

ALV遗传信息极易改变，导致其宿主范围和毒性有较大的差异，在研制相关疫苗上存在一定难度[2]，也因为其主要通过种蛋垂直传播，疫苗免疫意义不大[7]。因此，到目前为止还无有效的疫苗和药物用于该病的防治[5]。最有效的防制措施是建立无ALV感染的种鸡群，降低感染率[7]。

5.1净化

检测鸡群，淘汰ALV阳性鸡[20]，经过几代的淘汰，感染鸡数量会降低直到消灭[14]。因黄体生成素、卵泡刺激素、孕酮等生殖激素的波动可能会影响ALV感染鸡间断性病毒血症的消失，但这些生殖激素的波动对ALV感染鸡持续性病毒血症没有影响，需定期检查[12]。

5.2控制传染源

制定严格的卫生防疫制度并认真执行，每周定期对环境和鸡舍进行消毒[15]。实行全进全出制度，发生感染时应立即将鸡群隔离，不准随意转群，经过进一步检测核实后采取相应措施，并按相关规定处理病鸡[14]。

5.3加强日常管理

各种应激条件对本病有促发作用[13]。因此，要给鸡群提供适宜的温度、光照、湿度、通风和养殖密度，切断病原传播途径，控制病原繁殖，避免鸡受到应激刺激或感染，提高环境控制水平和鸡体抗病能力。饲喂全价饲料提高鸡的营养水平，从而增强抵抗力[13]。相关研究表明，黄芪可显著下调ALVgp37基因的表达，郁金、益母草、土茯苓在降低gp37基因的表达上效果也较好[8]。因此可以定期投喂此类抗病毒中草药，增强抵抗力。

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