首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 药学论文 > 药剂学论文 > 参芍益气活血方水提液不同纯化工艺的比较

参芍益气活血方水提液不同纯化工艺的比较

2023-10-09 34 上传者：管理员

摘要：考察乙醇沉淀法与ZTC1+1澄清剂沉淀法对参芍益气活血方水提取液的纯化效果，为制剂规模化生产提供参考。方法:采取煎煮2次，每次加入药材总量6倍体积的水，每次煎1小时提取参芍益气活血方，提取液浓缩后平均分成20份，取9份采用乙醇沉淀法纯化，另取9份采用ZTC1+1澄清剂沉淀法纯化，以HPLC法测定纯化后溶液中芍药苷含量，据此计算得芍药苷保留率，并测定除杂率，根据实验结果比较两种纯化工艺的优劣。结果:两种纯化工艺中，ZTC1+1澄清剂沉淀法溶液中芍药苷保留率和除杂率分别为91.44%和21.07%;而乙醇沉淀法溶液中这项指标分别为72.75%和14.85%。结论:在参芍益气活血方两种不同纯化工艺的比较实验中，ZTC1+1澄清剂沉淀法优于乙醇沉淀法，适合规模化生产应用。

关键词：
ZTC1+1澄清剂沉淀法
乙醇沉淀法
参芍益气活血方
水提液
益气养阴
加入收藏

参芍益气活血方是我院(遵义市中医院)内分泌科临床经验方，处方由红参、白芍、黄芪、鸡血藤等药味组成，具有益气养阴，活血祛瘀的功效，用于气虚血瘀所致的肢端麻木或疼痛，四末冰凉，肢体胀痛，身软乏力等症。该方临床应用已有10余年，其疗效显著、安全性高，得到医患双方的广泛认同，因此，我院拟将该方开发成医疗机构制剂，造福更多患者。然而，该方水提液极不稳定，静置后会缓慢产生沉淀，导致制剂成型后稳定性较差，经化验，沉淀的主要成分为淀粉和鞣质，为处方中无效成分，因此有必要对其进行纯化处理。

传统的中药提取液除杂方法多以乙醇沉淀法为主，但由于乙醇为易燃易爆品，安全性差，且在保留有效成分方面存在短板，因此其使用有一定的局限性[1]。随着科技的不断发展，澄清剂沉淀法已在现代药物制剂领域得到普遍应用，其中ZTC1+1天然澄清剂在中药水提液纯化工艺中应用较多，该澄清剂由两组高分子化合物组成[2],一组分发挥主架桥作用，另一组分则发挥辅助架桥作用，共同起到絮凝效果，使得澄清过程成倍加快[3]。本研究以参芍益气活血方水提液为研究对象，以纯化后芍药苷保留率和除杂率为指标，通过正交试验筛选出最佳乙醇沉淀参数和最佳ZTC1+1沉淀参数，并进行比较，为参芍益气活血方制剂规模化生产提供技术支持。

1、仪器与试药

1.1仪器

数控超声波清洗器(KQ-500DE,江苏省昆山市超声波仪器有限公司);恒温水浴锅(HH-4,嘉耀电器有限公司);恒温干燥箱(101-1型，贵州电弘干燥设备厂);电子天平(Libror AEL 40SM,岛津);电子天平(AUW-220D型，岛津);旋转蒸发仪(RE-52AA,上海亚荣生化仪器厂);高效液相色谱仪(LC-2010AHT,岛津)。

1.2试药

红参、白芍、黄芪、鸡血藤(购于贵州同济堂饮片有限公司),芍药苷对照品(购于中国食品药品检定研究院，批号为110736-202145), ZTC1+1澄清剂(购于北京市正天成澄清技术有限责任公司),色谱乙腈(Fisher),蒸馏水(自制),其余试剂试药均为分析纯。

2、方法与结果

2.1水提液制备

按处方比例红参、白芍、黄芪、鸡血藤，加水煎煮2次，每次加入药材总量6倍体积的水，每次煎1小时，滤液平均分成20份，备用。

2.2除杂率测定

2.2.1纯化前干膏量测定

取“2.1”项下水提液1份，用水定容，精密吸取定容后的药液适量，置于干燥至恒定重量的蒸发皿中，蒸干，再在105°C下干燥至恒重，计算干膏量后折算得每份提取液纯化前干膏量。

2.2.2纯化后干膏量测定

将纯化处理后的药液过滤，定容，精密吸取定容后的药液适量，按“2.2.1”项下方法测定干膏，折算得每份提取液纯化后干膏量。

2.2.3除杂率计算

除杂率=(纯化前干膏量-纯化后干膏量)/纯化前干膏量×100%

2.3芍药苷含量测定

2.3.1色谱条件

色谱柱为Hypersil ODS C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(14:86);流速为1.0 mL·min-1;柱温为28°C;检测波长为230 nm。

2.3.2对照品溶液制备

精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成浓度为60μg·mL-1的对照品溶液。

2.3.3供试品溶液制备

精密吸取参芍益气活血方纯化前后的药液适量，经稀释定容后滤过，即得。

2.3.4专属性试验

按“2.3.1”项下色谱条件操作，精密吸取对照品、供试品(纯化前后共3种)、阴性对照溶液各10μL分别进样检测，结果表明，在与对照品出峰时间相同的位置处，供试品也有色谱峰，且分离度>1.5,阴性对照在相同保留时间处无色谱峰，说明阴性对照无干扰，芍药苷峰理论塔板数高于3 000,色谱分离达到要求。见图1

2.3.5线性关系考察

将不同浓度的芍药苷对照品溶液按“2.3.1”项下色谱条件进样检测，并将峰面积和进样量进行线性拟合，结果芍药苷峰面积与进样量(范围0.122 54μg～1.347 94μg)线性关系良好。

2.3.6精密度试验

取同一芍药苷对照品溶液按“2.3.1”项下色谱条件重复进样检测6次，计算芍药苷峰面积相对标准偏差(即RSD)为0.16%。

2.3.7重复性试验

取同一样品6份，按“2.3.3”项下供试品溶液的制备方法处理，按“2.3.1”项下色谱条件检测。结果6份样品芍药苷含量相对标准偏差为1.81%。

2.3.8稳定性试验

精密吸取供试品溶液(纯化前)适量，分别于0、2、4、6、8、12 h,按“2.3.1”项下色谱条件检测，结果芍药苷峰面积相对标准偏差为0.21%,表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.3.9加样回收率试验

取同一样品6份，分别精密加入一定量的芍药苷对照品溶液，按“2.3.3”项下方法制备成供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件检测，结果芍药苷回收率为99.76%,相对标准偏差为1.38%。

2.4纯化效果评价方法

采用综合评分法对不同纯化方法正交试验进行评价，以样品中芍药苷保留率和除杂率为指标，根据各评价指标对纯化效果影响程度的不同，权衡分值分配为：芍药苷含量权衡分为70分，除杂率权衡分为30分。

芍药苷保留率=纯化后样品中芍药苷含量/纯化前样品中芍药苷含量×100%

综合评分=芍药苷保留率/最大芍药苷保留率×70+除杂率/最大除杂率×30

2.5乙醇沉淀法纯化实验

2.5.1正交试验设计

影响水提醇沉效果的因素主要有浸膏比重、醇沉浓度和静置时间。本实验拟对这3个主要因素分别进行3个水平的正交考察，以优选最佳醇沉工艺参数。各因素水平设置见表1。

表1乙醇沉淀法除杂工艺正交试验因素水平表

表2乙醇沉淀法除杂工艺正交试验结果

2.5.2实验方法

取9份“2.1”项下的水提液，分别按醇沉正交试验表(见表2)浓缩到相应比重，加入乙醇达到规定含醇量，并静置相应时间。

2.6 ZTC1+1澄清剂沉淀法纯化实验

2.6.1正交试验设计

影响ZTC1+1澄清剂纯化效果的因素主要有浸膏比重、ZTC1+1澄清剂用量和保温温度。本实验拟对这3个主要因素分别进行3个水平的正交考察，以优选最佳澄清剂除杂工艺参数。各因素水平设置见表3。

表3 ZTC1+1澄清剂除杂工艺正交试验因素水平表

2.6.2实验方法

取9份“2.1”项下的水提液，分别按澄清剂正交试验表(见表4)浓缩到相应比重，加入ZTC1+1澄清剂，并在相应温度保温。

表4 ZTC1+1澄清剂除杂工艺正交试验结果

2.7结果

将“2.5.2”和“2.6.2”项下的样品分别过滤，滤液按“2.2”和“2.3”项下方法测定芍药苷含量和除杂率，结果见表2、表4,不同纯化方法的方差分析表见表5、表6。

表5乙醇沉淀法除杂工艺方差分析表

表6 ZTC1+1澄清剂除杂工艺方差分析表

从表2试验结果和表5方差分析结果可知，在乙醇沉淀法纯化工艺中各因素作用主次为B>A>C。A、B因素有显著性差异，C因素无显著差异，A因素中A1>A2>A3,B因素中B1>B2>B3,C因素中C1>C3>C2,因此方差分析结果最佳工艺参数为A1B1C1。即将提取液浓缩到相对密度1.05,加入乙醇使含醇量40%,静置12 h。

从表4试验结果和表6方差分析结果可知，在ZTC1+1澄清剂沉淀法纯化工艺中各因素作用主次为B>A>C。B因素有显著性差异，A、C因素无显著差异，A因素中A2>A3>A1,B因素中B2>B1>B3,C因素中C3>C2>C1,因此方差分析结果最佳工艺参数为A2B2C3。由于A、C因素无显著差异，为了降低能耗，可选择A1、C1为工艺参数，最终确定最佳工艺参数为A1B2C1,即将提取液浓缩到相对密度1.05,边搅拌边加入ZTC澄清剂B溶液(加入量为3%),于40°C保温30 min后，再按上述方法ZTC澄清剂A溶液(加入量为1.5%),再于40°C保温30 min。

2.8两种除杂工艺最佳参数对比验证试验

按“2.1”方法制备参芍益气活血方水提液，平均分成6份，其中3份按最佳醇沉除杂工艺参数试验，另外3份按最佳ZTC1+1澄清剂最佳除杂工艺参数试验。验证结果，见表7。

表7两种除杂工艺验证结果

验证试验结果表明，乙醇沉淀除杂工艺和ZTC1+1澄清剂沉淀除杂工艺重复性都很稳定，两种除杂方法相比，ZTC1+1澄清剂除杂效果更加理想，无论是有效成分保留率还是除杂率，澄清剂都明显优于乙醇沉淀法，适合规模化生产应用。

3、讨论

参芍益气活血方由红参、白芍、黄芪、鸡血藤等药味组成，对各药材的有效成分分析可以得出[4,5,6,7,8,9,10],处方发挥疗效的物质基础为黄酮、生物碱、皂苷类、多糖等成分。全方经水煎煮后，提取液中除含有上述成分外，还含有大量有机和无机成分，包括蛋白质、淀粉、鞣质等物质，共同形成动力学及热力学不稳定胶体分散体系[11],放置一段时间后会有沉淀析出。由于参芍益气活血方出膏量较大，剂型选择优先考虑口服液体制剂和颗粒剂，而有沉淀析出显然对制剂的稳定性影响较大。

经化验，参芍益气活血方水提液沉淀的主要成分为鞣质和淀粉，结合处方中药味的化学成分分析，沉淀可能来自于白芍和红参。由于参芍益气活血方的功效定位为益气养阴，活血祛瘀，根据鞣质和淀粉的药理活性可知，鞣质和淀粉在本方中属于无效成分，因此可以视为杂质去除。

ZTC1+1天然澄清剂作为一种新型的食品添加剂，由A、B两个组分组成，其使用方法通常是先加入B组分，使蛋白质、鞣质等杂质发生分子间架桥，再加带有相反的电荷A组分，使得沉淀加速，保留有效成分[12,13,14]。

两种不同纯化工艺实验结果对比表明，参芍益气活血方水提液采用ZTC1+1澄清剂沉淀法除杂效果明显优于乙醇沉淀法。ZTC1+1澄清剂沉淀法的操作过程简单，安全性也高，有效成分保留率比醇沉法高出近20%,除杂率比醇沉法高出6%,是理想的参芍益气活血方水提液纯化方法。

参考文献:

[1]王燕伟,昌圭源.醇处理影响中药制剂的成分与作用IJ1浙江中医学院学报,1995.19(2):30-31

[2]颜红.天然澄清剂在中药水提液澄清工艺中的应用[J].中国药导报,2005,11(1):80-82.

[3]张三平.吸附澄清剂在中药制剂中的应用研究[J].中国药房,2008,19(6):461-464.

[4]曹智,张燕娣.人参有效成分及其药理作用研究新进展[J].人参研究,2012,24(2):39-43

[5]张翼轮,张文狗.人参化学成分的药理活性及其含量积累的研究进展J1安徽农业科学,2011,39(20):12158-12160+12163

[6]杨晓帆.白芍有效成分的研究进展[J].广州化工,2015,43(20):50-51+78.

[7]陈琪,何祥玉.白芍的化学成分､药理作用和临床应用研究进展].临床医学研究与实践,2021,6(11):187-189.

[8]禹建芳,赵江源.英膜黄芮化学成分研究[J].中药材,202245(2):341-345.