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罗氏E601电化学发光免疫分析仪剩余试剂的再利用评估

2024-12-20 90 上传者：管理员

摘要：目的分析罗氏E601电化学发光免疫分析仪检测梅毒螺旋体（TP）抗体、人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体和抗原（P24）、丙肝病毒（HCV）抗体使用混合试剂再利用的可行性，为降低检测成本提供参考。方法用混合剩余试剂检测血清中TP、HIV、HCV的临界值（COI值），分析精密度、准确度；同时用原装试剂与混合试剂分别检测同一标本，比较其均值并作相关性分析。结果混合后的TP试剂的批内精密度分别为1.80%、3.35%，批间精密度分别为8.20%、3.60%；混合后的HIV试剂批内精密度分别为3.70%、2.17%；批间精密度分别为9.60%、3.14%；混合后的HCV试剂批内精密度分别为0.00%、5.60%；批间精密度分别为0.00%、6.50%。TP、HIV、HCV混合试剂准确度检测结果与室间质评回报结果一致；3个项目的阳性符合率、阴性符合率均为100%。3个项目的相关系数依次为0.999 6、0.998 6、0.998 4,r≥0.975，提示两种试剂相关性良好。结论罗氏E601电化学发光仪使用的HCV、HIV、TP的剩余试剂，相同批号的试剂可混合使用。

关键词：
再利用
灵敏度
电化学发光装置
精密度
试剂
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罗氏E601全自动电化学发光免疫分析仪（以下简称“罗氏E601分析仪”）精密度好、准确度和灵敏度高、线性范围广、检测速度快，广泛应用于临床各个领域[1]。本单位目前应用该设备检测梅毒螺旋体（TP）抗体、人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体和抗原（P24）、丙肝病毒（HCV）抗体（以下分别简称为TP、HIV、HCV），已逐步取代传统的酶联免疫法，但罗氏E601分析仪的配套试剂为进口原装试剂盒，价格高昂，没有替代的国产试剂，导致检测成本居高不下。一些项目的试剂剩余量较大，为了节约成本，本研究采用相同批号试剂混合使用的方式，对混合试剂的实际性能进行验证与评价。

1、材料与方法

1.1标本来源

TP、HIV、HCV各20份标本，来源于2022年常州市德安医院住院及门诊患者血清，无溶血、脂血及黄疸；5份室间质控品来源于2022年江苏省临检中心室间质控品，批号为TP222106～222110、HIV222106～222110、HCV222106～222110。20份阴性血清（L1）为健康体检者血清混合后离心，150μl分装，-18℃保存；20份弱阳性血清（L2）来源于历年室间质控品，用健康人血清稀释至cut-off值的2～4倍，150μl分装，-18℃保存。自制质控品使用前置室温融化，混合均匀后上机检测[2]。

1.2仪器与试剂

罗氏E601分析仪。将仪器显示个数为0的相同批号剩余试剂混匀后合并。通常情况下，检测TP、HIV需要3瓶剩余试剂合并，HCV抗体需要2瓶。TP试剂批号59201601,HIV试剂批号59642301,HCV试剂批号63467501，均为罗氏E601分析仪配套试剂，使用配套校准品及自制质控品。

1.3方法

1.3.1精密度验证

根据临床和实验室标准协会（CLSI）的方案EP15-A2[3]，使用混合试剂连续测定阴性血清（L1）、弱阳性血清（L2)20次，得到20个数据，计算批内精密度（CV），要求批内精密度≤1/4允许总误差（TEa）。用混合试剂每日检测阴性血清（L1）、弱阳性血清（L2)4次，连续检测5 d，得到20个数据。计算批间精密度（CV），要求批间精密度≤1/3允许误差（TEa）。

1.3.2准确度验证

用混合试剂检测5份室间质控品，判断测定结果与回报结果的一致性[4]，判断混合试剂的准确度。

1.3.3比对试验

1.3.3. 1符合率

每个项目的20份标本中，TP阳性10份，阴性10份；HIV阳性6份，阴性14份；HCV阳性5份，阴性15份。分别用混合试剂和原装试剂检测，比较检测结果，判断符合率。

1.3.3. 2相关性分析

根据EP15-A2要求，将20份患者样品[5]使用混合试剂和原装试剂分别检测TP、HIV、HCV。将原装试剂盒测定结果与混合试剂盒结果作比较。根据原装试剂盒测定结果均值（y）和混合试剂测定结果均值（x），计算y=ax+b，验证线性范围，利用相关系数（r）评估相关性。相关系数r≥0.975[6]或R2>0.95则两种试剂相关性良好。P>0.05表示差异无统计学意义。

2、结果

2.1精密度验证

用混合试剂检测TP、HIV、HCV的批内精密度（CV）均低于1/4 TEa(7.5%），批间精密度（CV）均低于1/3 TEa(10%）。符合EP15-A2文件要求。见表1。

表1精密度验证结果

2.2准确度验证

TP、HIV、HCV的检测结果与室间质评结果一致。见表2。

表2准确度验证结果

2.3符合率

TP、HIV、HCV检测结果的阳性符合率、阴性符合率均为100%，符合率可接受。见表3。

表3符合率验证结果

2.4相关性分析

原装试剂与混合试剂的检测结果相比，r值和P值见表4。

表4 TP、HIV、HCV原装试剂与混合试剂比较

相关性分析线性回归方程：TP试剂y=1.0064x-0.0514,R2=0.999 3（图1),HIV试剂y=0.9619x+0.225,R2=0.997 2（图2),HCV试剂y=1.2041x-0.1199,R2=0.996 7（图3）。3个项目用两种试剂的检测结果均呈良好线性相关（R2>0.95）。

图1 TP两种试剂相关性分析

图2 HIV两种试剂相关性分析

图3 HCV两试剂相关性分析

3、讨论

罗氏E601发光仪检测HCV、HIV、TP速度快、灵敏度高、干扰因素少，具有较高的稳定性及重现性。但仪器显示试剂用完后，试剂瓶内仍剩余近50%试剂，造成浪费。为确保混合试剂检测结果的准确性，评估再利用剩余试剂的可行性，对检测结果进行精密度、准确度的验证[7-10]。

TP、HIV、HCV混合试剂检测的批内CV与批间CV均符合EP15-A2文件要求，精密度在可接受范围。准确度验证结果与省临检中心回报结果一致，准确度结果满意。阴性、阳性符合率均为100%，符合率可接受。原装试剂和混合试剂相关性分析显示，TP、HIV、HCV相关系数r≥0.975，表明两种试剂相关性良好。各项目检测值的差异P>0.05，表明两组数据差异无统计学意义，混合试剂可以正常使用。

试剂瓶盖打开之后的稳定期为8周，工作人员及时合并剩余试剂，并立即上机使用，试剂成分的性质和效力不改变。如有失控现象，应查找原因及时处理，或重新定标，或更换试剂盒，在确保检测质量的同时又降低成本。结合相应的校对产品说明书，相同批号的试剂定标后稳定期为28 d，因此，混合试剂可以不用校准直接使用[11]。本实验室经过对混合试剂检测结果进行长期观察，数据较稳定，值得推广。

参考文献:

[1]于佳.罗氏Cobas601全自动电化学发光分析仪检测CA153的性能研究[J].中国医疗器械信息,2023,29(2):51-53.

[2]张洪艳,王红英.罗氏Cobas 8000 e602检测性激素6项的性能验证[J].检验医学与临床,2021,18(13):1937-1939.

[3]梅红杰,王士贤.研究电化学发光免疫分析技术在乙型肝炎病毒临床检验中的应用效果[J].数理医药学杂志,2022,35(10):1472-1474.

[4]郑德想,李有强,陈富,等.罗氏Cobas e602检测梅毒螺旋体抗体的临床应用与实验评价[J].中国热带医学,2019,19(4):389-391.

[5]刘雅,陈红.乙型肝炎两对半定量检测的价值分析[J].中国当代医药,2021,28(2):149-151.

[6]于淼琛,潘立阳,朱鸿.化学发光检测乙肝表面抗原剩余试剂再利用评价[J].实验与检验医学,2017,35(1):71-72.

[8]王治国.临床检验方法确认与性能验证[M].北京:人民卫生出版社,2014:10-12.

[9]罗岚,李冬冬,王婷婷,等.三种化学发光免疫分析法人类免疫缺陷病毒抗原抗体筛查试剂的临床评价[J].华西医学,2022,37(8):1176-1180.

[10]姚丽,王珊,李佳琪,等.某电化学发光仪冷冻试剂再利用的可行性研究[J].检验医学与临床,2018,15(22):3455-3457.

[11]蔡敏,孙建伟.罗氏电化学发光免疫分析仪残余试剂质量控制和回收价值研究[J].深圳中西医结合杂志,2023,33(11):63-65.

基金资助:江苏省自然科学基金项目(BK20201084);