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金银花提取物对小鼠的抗炎作用研究

2023-08-15 72 上传者：管理员

摘要：中药金银花具有抗菌消炎作用，而且临床应用广泛，药用历史悠久，资源丰富。为了探索口服不同剂量的金银花水煎液和腹腔注射不同剂量水煎醇沉液对小鼠的抗炎作用，本文采用小鼠耳廓化学致炎和棉球肉芽肿方法，比较不同组的肿胀率、肿胀抑制率、组织增生总量和肉芽肿重量，研究其对小鼠的抗炎效果。结果表明：给小鼠口服金银花水煎液和腹腔注射金银花水煎醇沉液对小鼠均有一定的抗炎作用，且随着剂量的增加抗炎作用有所加强，且大剂量组的效果最佳。

关键词：
小鼠
抗炎作用
棉球肉芽肿
耳廓肿胀
金银花提取物
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金银花（Lonicera japonica）是多年生常绿缠绕木质藤本植物，为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物的干燥花蕾或带初开的花，于夏初花开放前采收、干燥。金银花又名银花、双花、二宝花，在中国各省均有分布，其适应性很强，喜阳、耐阴、耐寒，以湿润肥沃的沙壤土生长最佳。

经过研究证明，金银花的主要药理活性成分有绿原酸、木犀草素苷等，对多种致病菌（如金黄葡萄球菌、溶血性链球菌等）及上呼吸道感染致病病毒等有较强的抑制作用。金银花药用历史悠久，具有凉散风热、清热解毒、抗多种病原微生物、抗肿瘤、抗炎镇痛、保肝利胆、免疫调节、降血压、清除自由基等功效。其临床用途十分广泛，可与其他药物配伍，用于治疗急性泌尿系统感染、呼吸道感染、高血压、菌痢等40余种病症，可用于咽喉肿痛、发斑、发疹、热毒疮痈、身热等各种热性病证[1,2]。本试验通过不同给药途径以及不同剂量的金银花提取物建立小鼠耳廓化学致炎和棉球肉芽肿两个模型观察其抗炎作用，旨在研究其抗炎效果，为临床用药提供试验依据。

1、材料与方法

1.1试验动物

小白鼠80只，体重（24±4)g，雌雄各半，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供（普通级）。

1.2试验仪器

试验仪器包括TDL-80-2B低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；HC-TP11-5型架盘药物天平（上海精科天平厂）；微量移液器（上海新汉计量器具技术研究所）；HH·B11·420电热恒温培养箱（上海市跃进医疗器械一厂）；电子天平、灌胃器、直径为8 mm的不锈钢冲子、小动物手术器械等。

1.3试剂与药品

1.3.1试剂

试剂包括金银花（购于亳州市中药饮片厂）；地塞米松磷酸钠注射液（江苏涟水制药有限公司）；无水乙醇（安徽蚌埠化学试剂厂）；生理盐水（江苏华源长富药业有限公司）；二甲苯（江苏徐州试剂二厂）等。

1.3.2金银花水煎液的制备

称取金银花100 g，加入适量蒸馏水浸泡30 min，煎煮3次（时间分别为40、30、20 min），合并3次滤液，浓缩至小于200 m L,3 600 r/min离心10 min，取上清液定容至200 m L，即为含生药0.5 g/m L的水煎液，装瓶，水煮消毒30 min备用。

1.3.2金银花水煎醇沉液的制备

取金银花水煎液100 m L，加无水乙醇150 m L，产生沉淀后取上清液离心（3 600 r/min,10 min），再向离心后的水煎液中加入无水乙醇250 m L，放入冰箱中保存。24 h后取出冰箱中的水煎液，去除底部沉淀，通过旋转蒸发器提取出乙醇，装瓶制成注射液，水煮消毒30 min。

1.4试验方法

1.4.1试验动物分组

将80只小白鼠随机分成10组：1～5组为金银花水煎液口服给药，分别为生理盐水对照组、大剂量组（20 g/kg）、中剂量组（10 g/kg）、小剂量组（5 g/kg）、阳性对照组（地塞米松磷酸钠注射液，0.001 g/kg);6～10组为金银花水煎醇沉液注射给药，分别为生理盐水对照组、大剂量组（5 g/kg）、中剂量组（2.5 g/kg）、小剂量组（1.25 g/kg）、阳性对照组（地塞米松磷酸钠注射液，0.001 g/kg）。

1.4.2试验动物饲养

小鼠饲养环境温度24～28℃，湿度50%～65%，每日光照12～13 h，让其自由取食、饮水，试验前进行适应性饲养5 d。

适应性饲养结束，在试验开始的第1天给药后，经过常规消毒处理，在小鼠两侧肷窝植入消毒后的脱脂棉球（10 mg）。以后每天定时按照试验设计分别口服或腹腔注射给药1次，在试验过程中认真观察并记录小鼠的采食、饮水、活动、精神、死亡的情况，各试验组连续给药7 d。

1.5测定指标及方法

以肿胀率、肿胀抑制率、肉芽肿干重、肉芽肿湿重表示抗炎程度。最后1次给药30 min后，用微量移液器在小鼠右耳内外两侧均匀涂布二甲苯50μL（右耳内、外两侧各25μL）致耳廓肿胀。致炎1 h后，将小鼠处死并剪下两耳廓，用不锈钢冲子冲下左、右耳片，称重，计算小鼠耳廓的肿胀率和肿胀抑制率[3]。同时，取出小鼠两侧肷窝的棉球并称重，记为组织增生总重。然后，将称重后的湿棉球置于100℃烘箱中，于24 h后取出并称重，记为肉芽肿重量。计算公式如下：

1.6数据处理与分析

试验数据用平均数加减标准差表示，应用SPSS 19.0软件分析，组间采用t检验进行差异显著性分析。

2、结果与分析

2.1口服液对小鼠耳廓肿胀的影响

由表1可知，与生理盐水对照组相比，大剂量组小鼠给药后的耳廓肿胀率极显著降低（P<0.01），中剂量组给药后小鼠的耳廓肿胀率显著降低（P<0.05），小剂量组小鼠给药后的耳廓肿胀率降低不显著（P>0.05）；与地塞米松组（阳性对照）相比，小剂量组的耳廓肿胀率极显著降低（P<0.01），而大剂量组和中剂量组的耳廓肿胀率降低均不显著（P>0.05）。由此可知，各剂量组小鼠的耳廓肿胀率均有所降低，且大剂量组的效果最明显。肿胀抑制率随着剂量的递减而不断减小。

表1口服不同剂量金银花水煎液对小鼠耳廓肿胀的影响

2.2注射液对小鼠耳廓肿胀的影响

由表2可知，与生理盐水对照组相比，大剂量组小鼠给药后的耳廓肿胀率极显著降低（P<0.01），中剂量组小鼠给药后的耳廓肿胀率显著降低（P<0.05），小剂量组的变化不显著（P>0.05）；与地塞米松组（阳性对照）相比，大剂量组、中剂量组和小剂量组耳廓肿胀率降低均不显著（P>0.05）。由此可知，各剂量组小鼠的耳廓肿胀率均有所降低，且大剂量组的效果最明显。耳廓肿胀抑制率随着剂量的减少而递减，大剂量组的抑制效果最明显。

表2腹腔注射不同剂量金银花水煎醇沉液对小鼠耳廓肿胀的影响

2.3口服液对小鼠棉球肉芽肿的影响

由表3可知，与生理盐水对照组相比，大剂量组组织增生总重和肉芽肿重量显著减少（P<0.05），中剂量组和小剂量组的变化不显著（P>0.05）。3种剂量组的组织增生总重和肉芽肿重量与地塞米松组差异均不显著（P>0.05）。

2.4注射液对小鼠棉球肉芽肿的影响

由表4可知，与生理盐水对照组相比，大剂量组组织增生总重极显著减少（P<0.01），中剂量组显著减少（P<0.05），小剂量组的变化不显著（P>0.05）；大剂量组和中剂量组的肉芽肿重量显著减少（P<0.05），小剂量组的变化不显著（P>0.05）。3种剂量的组织增生总重和肉芽肿重量与地塞米松组（阳性对照）相比，差异都不显著（P>0.05）。

表3口服不同剂量金银花水煎液对小鼠棉球肉芽肿的影响

表4腹腔注射不同剂量金银花水煎醇沉液对小鼠棉球肉芽肿的影响

3、讨论与结论

炎症是具有血管系统的活体组织对局部损伤所产生的防御反应，是调动功能不同的细胞参与的动态过程，会引起血液和组织中的白细胞升高。炎症的主要症状表现有红、肿、热、痛和功能障碍。它可分为3期：一是血管反应期，表现为局部血管扩张及通透性增高，血浆渗出；二是细胞反应期，表现为中性粒细胞向血管外浸润、游走；三是组织反应期，表现为细胞增殖，肉芽组织生成和血管新生等再生修复。因此，组织肿胀和炎症渗出是炎症早期的重要指标，而防御反应的本质是清除、消灭引起损伤的各种致炎因子和促进损伤的修复，主要由细胞和血管的应答所构成。二甲苯是化学致炎剂，对于皮肤黏膜有刺激作用，涂布于小鼠耳廓两面，可以迅速引起小鼠耳廓毛细血管的扩张和通透性的增高，随即血管内的液体向组织间隙渗出，从而导致耳廓肿胀产生急性炎症，试验可以很好地复制出急性炎症的表现[4]。地塞米松磷酸钠属于糖皮质激素，能抑制炎症局部的血管扩张，降低血管通透性，减少血浆渗出和细胞浸润，可以明显减弱或者消除炎症部位的红、肿、热、痛等症状，其抗炎效果较好[5]。

金银花在临床上是使用频率较高的一味中药，具有疏风解表、清热解毒的功效[6,7,8,9]。药理学研究证实，金银花具有明显的抗炎作用[10,11,12,13]。本试验采用了急性炎症模型（二甲苯致炎法）和慢性炎症模型（棉球肉芽组织增生法），观察了金银花水煎液及水煎醇沉液对小鼠耳廓化学性致炎和棉球肉芽肿的影响。金银花能使细胞避免炎性物质如膜磷壁酸、M蛋白、肽聚糖的侵害，金银花提取物能够提高白细胞对异物的吞噬能力，促进天然免疫反应，并且对体外多种引起炎症的病原菌具有抑制作用。金银花提取物能抑制炎症过程中5-羟色胺、组胺的合成或释放，从而发挥其抗炎功效。有研究发现，金银花提取物对炎症早期的肿胀有显著抑制作用，对炎症中期白细胞的趋化、游出有显著的抑制作用，对炎症晚期的纤维结缔组织增生有较强的抑制作用[14]。

从地塞米松磷酸钠和金银花的抗炎机理可知，抗炎作用实际上就是在很大程度上抑制白细胞的功能。在炎症发生发展过程中，大多有淋巴因子和其他可溶性致炎介质的参与。抗炎药就是通过抑制这些介质而发挥抗炎作用的。

本试验结果表明，金银花提取物具有明显的抗炎作用，且与给药剂量有关，并有明显的量效关系。

参考文献:

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[4]李玉林.病理学[M].7版北京:人民卫生出版社,2008.

[5]陈杖榴.兽医药理学[M].3版.北京:中国农业出版社,2009.

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