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宠物猫单侧隐睾的组织形态学观察与测量

2023-12-13 34 上传者：管理员

摘要：隐睾是动物最常见的睾丸发育不良症状之一，严重影响着生理健康及繁育能力。该试验以猫单侧隐睾为研究对象，通过HE染色形态学观察、组织学数据测量。结果显示，隐睾与正常睾丸HE染色相比，单侧隐睾间质细胞较多且聚集，曲精小管内生精细胞较少、分布散乱，部分聚集在曲精小管中央呈岛屿样结构。测量数据证实隐睾曲精小管数量平均为7.45个/mm2，显著多于正常睾丸的5.38个/mm2(P<0.01)；但隐睾曲精小管直径平均为27.79μm，明显小于正常睾丸33.57μm，曲精小管数量和直径均成极显著性差异(P<0.01)。单侧隐睾与正常睾丸在组织形态学结构存在明显的差异，曲精小管数量较多而直径较小，可能是导致隐睾症公猫繁殖能力弱的重要因素。

关键词：
发育不良
测量分析
猫
组织学
隐睾
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隐睾是动物最常见睾丸发育不良的症状之一，不仅威胁着动物的生理机能健康，还对优良品种繁育及繁殖能力产生重要的影响。已有研究报道证实，隐睾症的发病率人类为2.5%～4%、犬为0.8%～9.7%[1]、猫为3%～6.3%[2]。临床主要表现为阴囊内检查不到睾丸，触诊时睾丸一般在左右侧腹股沟内，随着猫年龄的增长，会出现腹部异常和不适等症状[3]。诱导隐睾发生既有外部因素，如辐射、环境刺激、中毒等；也有内部激素的调节，如雄激素、乙醇、黄体生成素等[4,5]。然而，由于隐睾容易发生睾丸扭转、睾丸肿瘤和其他疾病，手术切除与复位的临床最常见的治疗方法[6]。目前，有关猫隐睾组织学观察报道较少，本试验将为临床检测和治疗猫隐睾提供重要的参考价值。

1、材料与方法

1.1 试验动物和材料

试验样品猫共10只（5只隐睾，5只正常睾丸），均收集于扬州大学动物医院，将手术切除的猫隐睾组织样品，及其对照组健康的睾丸组织样品，修剪为1 cm3大小的方块，浸放于4%的多聚甲醛溶液，进行一定时间的组织固定，制作石蜡块并保存。

1.2 睾丸组织蜡块制作和HE染色

HE染色，二甲苯对组织切片样品进行脱蜡，下行梯度酒精完成脱水，苏木精染色细胞核，1%盐酸乙醇作用分化，上行梯度酒精完成脱水及二甲苯进行组织透明，中性树胶封片，正置光学显微镜组织学观察并拍照。

1.3 曲精小管数量和直径测量

选取猫睾丸HE染色图片，随机选取大小相同的区域作为测量点，每个测量区域叠加一个矩形测量框，依据科学计数原则，将测量框内分为A和B 2个区域，只计数右侧或顶部相交的曲精小管，具体如图1-Ⅰ（A）所示；而不计算与测量框架的左侧、底部相交的曲精小管，如图1-Ⅰ（B）所示。曲精小管直径测量，选定测量区域方法如上，测量时每个曲精小管测量2次，且测量轨迹相互垂直，如图1-Ⅱ（C/D）所示[7]。

1.4 数据统计与分析

测量数据采用SPSS 21.0软件进行统计并分析，结果呈现用“平均数±标准差”表示，样本之间的差异性采用统计学独立样本t检验；不同样本组间的相互差异分析用，采用单因素方差分析法（one-way ANOVA,LSD）。备注：差异极显著标记P<0.01；差异显著标记P<0.05；差异不显著标记P>0.05。

图1 曲精小管数量和直径测量方法

2、结果

2.1 HE染色观察

HE染色观察，猫单侧隐睾组织间质细胞多而聚集（图2A），曲精小管内生精细胞少，例如精原细胞、次级精母细胞和精子非常稀少，且呈散乱分布（图2A1）；初级精母细胞相对较多；少量的精子细胞聚集于曲精小管中央呈岛屿状分布（图2A2）。正常睾丸组织学结构完整，间质细胞少而均匀分布（图2B）；曲精小管内侧生精细胞分布规律，精原细胞较少贴管壁分布，初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞较少，成规律性分布（图2B1）；曲精小管中央未见精子细胞聚集的岛屿状结构（图2B2）。

图2 猫隐睾与正常睾丸组织形态学特点

2.2 曲精小管数量和直径测量

睾丸组织曲精小管和直径测量按照图1-Ⅰ所示，根据引用文献计算方式进行科学统计。单侧隐睾曲精小管数量明显多于正常睾丸，见表1。数量平均为7.45个/mm2，正常睾丸数量平均为5.38个/mm2，两者之间呈极显著差异（P<0.01），见图3A。

表1 睾丸组织中曲精小管数量

睾丸组织曲精小管直径测量按照图1-Ⅱ所示，根据引用文献计算方式进行科学统计。单侧隐睾曲精小管直径明显少于正常睾丸，见表2。平均长度为27.79μm，正常睾丸直径平均为33.57μm，两者之间呈极显著性差异（P<0.01），见图3B。

表2 睾丸曲精小管直径

图3 猫隐睾组织曲精小管数量（A）和直径测量（B)

3、讨论与结论

3.1 隐睾HE染色形态学比较

动物睾丸的发育不良是导致睾丸功能减退或消失的重要因素。张金宽等[8]临床检查猫发现，阴囊内只检查到一个睾丸时，走路时会出现身体摇晃，步态不稳的现象；用手触诊腰腹部反应敏感，腹股沟部位未发现另一个睾丸，说明患猫是腹腔内隐睾。而山羊发生隐睾时，隐睾组织中血管发育出现停滞，测量曲精小管直径比正常睾丸小，支持细胞发育也呈现出异常现象[9]。本研究发现，猫单侧隐睾组织间质细胞多而聚集；曲精小管内生精细胞少，例如精原细胞、次级精母细胞和精子非常稀少，且呈散乱分布；初级精母细胞相对较多；少量的精子细胞聚集于曲精小管中央呈岛屿状分布。袁莉刚等[10]报道，双峰骆驼隐睾与正常睾丸形态学结构分析，光镜下隐睾组织曲精小管发育不完全、网状纤维明显且分布均匀、血管的固有膜PAS和AB染色反应较弱；电镜下，隐睾曲精小管基膜显著增生，外围I型胶原纤维观察较少，毛细血管及睾丸间质中纤维较多。进一步说明不管是单侧隐睾还是双侧隐睾，都会导致动物生理机能发生改变，睾丸形态组织异常，生育能力下降。

3.2 隐睾曲精小管及直径测量分析

研究发现，伴侣动物比格犬的隐睾间质中胶原纤维呈现增生，曲精小管只有少量精原细胞及支持细胞，附睾的间质明显增宽、大量胶原纤维增生、管腔内精子缺失[11]。此外，研究发现大鼠发生隐睾时，腹腔隐睾曲精小管中发育不同阶段的生精细胞均出现退行性变化，且曲精小管数量也异常变少[12]。该试验测量发现，猫单侧隐睾曲精小管数量明显多于正常睾丸，数量平均为7.45个/mm2，正常睾丸数量平均为5.38个/mm2，两者之间呈极显著性差异；而曲精小管直径明显少于正常睾丸，平均长度为27.79μm，正常睾丸直径平均为33.57μm，两者之间呈极显著性差异。本团队前期已经研究发现，猪隐睾组织睾丸小叶之间界限不清、间质细胞聚集且散乱分布、曲精小管的直径显著减小，管腔内观察到大量的精原细胞及支持细胞，未见次级精母细胞、精子细胞及精子[13]。此外，临床资料显示不同部位隐睾症（腹内、腹股沟、阴囊颈）的猫，睾丸的大小、重量、精子的活力不同，最终影响生理机能[14]。因此，睾丸是判定雄性动物繁殖能力的核心器官，隐睾能够明显降低生育能力。

参考文献:

[3]李宝兰.宠物犬猫隐睾的临床诊断与治疗[J].福建畜牧兽医,2020,42(5):64-66.

[8]张金宽,王欣睿,赵东伟,等.猫隐睾手术及并发症的探讨[J].畜牧与饲料科学,2012,33(10):109-110.

[9]宋笑.高原牧区藏绵羊睾丸及山羊隐睾免疫相关调节因子的表达及分布初步研究[D].兰州:甘肃农业大学,2018.

[10]袁莉刚,鲁玉荣,陶金忠,等.双峰驼睾丸和隐睾细胞外基质相关蛋白的组织化学特征及超微结构比较[J].兽类学报,2017,37(2):189-199.

[11]胡建廷,邱波,王韶艳,等.一例比格犬先天性隐睾的组织病理学观察[J].动物医学进展,2016,37(11):133-135.

[13]刘鹏刚,刘彩虹,包文斌,等.二花脸猪隐睾和正常睾丸组织学观察及PCNA/CD31蛋白差异表达分析[J].中国兽医科学,2023,53(3):388-395.

基金资助:江苏省高校家畜种质资源与遗传改良国际合作联合实验室开放课题(IJRLD-KF202211);

文章来源:刘鹏刚,俞可馨,蒋宁等.宠物猫单侧隐睾的组织形态学观察与测量[J].现代畜牧科技,2023(12):52-54.