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血清微小核糖核酸-599与肝细胞肝癌TACE治疗预后的相关性

2021-12-30 83 上传者：管理员

摘要：目的探究血清微小核糖核酸-599(miR-599)与肝细胞肝癌(HCC)经导管动脉化疗栓塞术(TACE)治疗预后的关系。方法选取2016年6月至2018年2月江西省萍乡市人民医院确诊并接受治疗的166例HCC患者作为研究对象,根据3年生存结局将其分为生存组113例和死亡组53例。用实时荧光定量PCR法检测miR-599表达量,用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-599诊断HCC预后的价值,用Cox回归分析miR-599与TACE治疗HCC预后的关系。结果生存组术前、术后的miR-599相对表达量均高于死亡组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。生存组和死亡组的术后miR-599相对表达量均较术前升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。术前miR-599诊断HCC预后的ROC曲线下面积高于术后miR-599,差异有统计学意义(P<0.05)。按1∶1倾向性评分匹配(最邻近原则)后,术前miR-599诊断HCC预后的ROC曲线下面积高于术后miR-599,但差异无统计学意义(P>0.05)。Cox回归分析结果显示肿瘤直径>5cm和肿瘤分期高是HCC预后的独立危险因素(P<0.05),接受索拉非尼治疗和术前miR-599表达量高是HCC预后的独立保护因素(P<0.05)。按1∶1倾向性评分匹配(最邻近原则)后,Cox回归分析结果显示术前miR-599表达量高是HCC预后的独立保护因素(P<0.05)。结论术前miR-599与HCC患者TACE治疗预后有关,其表达量低提示预后不良。

关键词：
医疗资源
微小核糖核酸-599
细胞增殖
经导管动脉化疗栓塞术
肝细胞肝癌
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肝细胞肝癌（HCC）是全球第二大恶性肿瘤，严重危害着人们健康。中国是HCC的高发国家，发病人数约占全球HCC患者总数的55%[1]。目前，尽管针对HCC的诊断及治疗取得了一定进展，但HCC患者的5年总生存率仍不足10%[2]。有研究指出，对于相同肿瘤分期的HCC，经肝动脉化疗栓塞（TACE）的治疗效果存在一定差异[3]。因此，早期评价HCC治疗效果，不仅可节约医疗资源，还可达到精准治疗的目的[3]。文献报道，微小核糖核酸-599(miR-599）参与了甲状腺乳头状癌[4]、神经胶质瘤[5]和膀胱尿路上皮癌[6]等发病和进展过程，并与预后有关。此外，miR-599还可调节HCC细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等过程[7,8]。本研究选取TACE治疗的HCC患者作为研究对象，分析miR-599与预后的关系，以期为改善HCC预后提供帮助。

1、材料与方法

1.1 一般资料

纳入2016年6月至2018年2月在江西省萍乡市人民医院确诊并接受治疗的166例HCC患者，男108例，女58例；年龄为（62.2±4.7）岁，范围为48～70岁。Child-PughA级124例，B级42例；HBsAg阳性137例，阴性29例；甲胎蛋白≤400μg/L69例，>400μg/L97例；肿瘤单发63例，多发103例；肿瘤直径≤5cm87例，>5cm79例；肿瘤分期：Ⅰb期16例，Ⅱ期70例，Ⅲa期80例；TACE次数：1次111例，2次26例，3次29例；索拉非尼：接受19例，未接受147例；血管侵犯：有80例，无86例。HCC诊断参照《原发性肝癌诊疗规范（2019年版）》[9]，有典型的肝癌影像学表现，病灶>2cm或肝占位性病灶经病理组织学或细胞学检查证实。纳入标准：(1)年龄<80岁；(2)接受TACE治疗；(3)签署了知情同意书。排除标准：(1)Child-PughC级；(2)临床信息不完整；(3)合并其他恶性肿瘤；(4)合并血液系统疾病；(5)获取血液样本前接受了放化疗、靶向治疗或免疫治疗等。

所有研究对象对研究内容知情同意，签署知情同意书。本研究经江西省萍乡市人民医院医学伦理委员会批准（2016R-239KS）。

1.2 TACE治疗方案

术前检查所有受试者血常规、尿常规、凝血功能等。手术步骤：消毒、铺巾，行局部麻醉，采用Seldinger法由股动脉入路插入导管至腹腔动脉或肝总动脉，行血管造影检查，明确癌组织的供血情况；将化疗药奥沙利铂（江苏奥赛康药业股份有限公司，国药准字：H20064296,100mg/m2）和5-氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司，国药准字：H31020593,500mg/m2）稀释，缓慢灌注至癌组织的供血动脉，用乳化充分的超液化碘油（烟台鲁银药业有限公司，国药准字：H37022398）和阿霉素（瀚晖制药有限公司，国药准字：H33021980,40mg/m2）的混悬液栓塞，注入明胶海绵颗粒[杭州艾力康医药科技有限公司，国食药监械（准）字2014第3771056号]栓塞，直至癌组织供血动脉呈“干树枝”状；拔出导管和导管鞘，局部加压止血。术后给予保肝、止吐等药物治疗，医嘱术后4周复诊，行CT检查，根据癌组织坏死情况制定后续治疗方案，TACE后肿瘤复发的患者，再次给予TACE治疗；TACE治疗无效的患者，联合消融（本研究中不包含接受消融治疗的患者）或靶向药物。

1.3 miR-599表达量检测

实时荧光定量PCR检测血清miR-599表达量[10]。抽取受试者TACE术前1d和术后28d肘部静脉血10mL，离心后吸取上清液，置于EP管中，-80℃冰箱中保存。实验步骤：取冻存的血清，解冻后用TRIzol试剂（日本Takara公司）提取总RNA，用752型紫外分光光度计（上海光学仪器五厂有限公司）检测RNA纯度；用反转录试剂盒（日本TaKaRa公司）将RNA反转录为cDNA；用Q1600型PCR仪（杭州柏恒科技有限公司）扩增产物，条件为95℃10min,95℃60s,35个循环，60℃60s,72℃60s。miR-599上游序列：5'-TAAGCTGACATGGGACAGGGAT-3'，下游序列：5'-CTCCATATCGCACTTTAATCTCTAACT-3'；内参U6上游序列：5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游序列：5'-ACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。选取同期参加体检的20名年龄、性别与HCC患者匹配的健康人的样本作为对照，用2-DDct法计算HCC患者血清中miR-599的相对表达量。

1.4 随访

采用复诊和电话随访方式获取受试者3年生存结局，于受试者出院后1个月复诊，此后每3～6个月随访1次，末次随访时间为2021年2月23日，中位随访时间为36(6～36）个月。

1.5 统计学方法

应用SPSS23.0软件包进行统计分析。正态分布的计量资料以表示，2组间比较采用独立样本t检验，TACE前、后miR-599的相对表达量比较用重复测量方差分析；非正态分布的计量资料以M(Q1,Q3）表示，2组间比较采用Mann-WhitneyU检验。计数资料以例数表示，组间比较采用χ2检验。用受试者工作特征（receiveroperatingcharacteristics,ROC）曲线下面积评价miR-599诊断HCC预后的价值。用Cox回归分析miR-599与TACE治疗HCC预后的关系。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 生存组和死亡组患者临床特征比较

根据HCC患者的3年生存结局将其分为生存组113例和死亡组53例。生存组和死亡组的年龄、性别构成、HBsAg、肿瘤数目和接受TACE治疗次数构成比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）；生存组的Child-PughA级、AFP≤400μg/L、肿瘤直径≤5cm、肿瘤分期Ⅰb期和接受索拉非尼治疗的例数均高于死亡组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。见表1。

按1∶1倾向性评分匹配（最邻近原则）后，生存组和死亡组的年龄、性别构成、Child-Pugh分级、HBsAg、AFP、肿瘤数目、肿瘤直径、肿瘤分期和接受TACE治疗次数比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）。见表1。

2.2 生存组和死亡组患者miR-599相对表达量比较

生存组和死亡组患者miR-599相对表达量差异有统计学意义（F=66.799,P<0.01），生存组术前、术后的miR-599相对表达量均高于死亡组，差异均有统计学意义（P<0.05）；术前、术后的miR-599相对表达量差异有统计学意义（F=232.151,P<0.01），生存组和死亡组的术后miR-599相对表达量均较术前升高，差异均有统计学意义（P<0.05）；生存结局和时间之间无交互作用（F=3.843,P=0.052）。见表2。

按1∶1倾向性评分匹配（最邻近原则）后，生存组和死亡组的miR-599相对表达量差异有统计学意义（F=12.267,P=0.001），生存组术前、术后的miR-599相对表达量均高于死亡组，差异均有统计学意义（P<0.05）；术前、术后的miR-599相对表达量差异有统计学意义（F=37.369,P<0.01），生存组和死亡组的术后miR-599相对表达量均较术前升高，差异均有统计学意义（P<0.05）；生存结局和时间之间无交互作用（F=1.258,P=0.269）。见表2。

2.3 miR-599诊断HCC预后的价值分析

术前miR-599诊断HCC预后的ROC曲线下面积高于术后miR-599，差异有统计学意义（Z=2.603,P=0.009），见表3。

按1∶1倾向性评分匹配（最邻近原则）后，术前miR-599诊断HCC预后的ROC曲线下面积高于术后miR-599，但差异无统计学意义（Z=0.961,P=0.337），见表3。

2.4 HCC生存预后的Cox回归分析

将HCC预后作为因变量，将年龄、性别、ChildPugh分级、HBsAg、AFP、肿瘤数目、肿瘤直径、肿瘤分期、TACE次数、接受索拉非尼治疗和术前miR-599作为自变量，分别纳入Cox回归分析，结果显示Child-Pugh分级、AFP、肿瘤直径、肿瘤分期和术前miR-599与HCC预后有关（P<0.05）。将HCC预后作为因变量，将Child-Pugh分级、AFP、肿瘤直径、肿瘤分期、术前miR-599和接受索拉非尼治疗作为自变量（纳入标准为单因素Cox回归分析的P<0.10或已知与HCC生存预后有关），一并纳入Cox回归分析，结果显示肿瘤直径>5cm和肿瘤分期高是HCC预后的独立危险因素（P<0.05），接受索拉非尼治疗和术前miR-599表达量高是HCC预后的独立保护因素（P<0.05）。见表4。

按1∶1倾向性评分匹配（最邻近原则）后，将HCC预后作为因变量，将年龄、性别、Child-Pugh分级、HBsAg、AFP、肿瘤数目、肿瘤直径、肿瘤分期、TACE次数和术前miR-599作为自变量（1∶1倾向性评分匹配后不包含接受索拉非尼治疗的患者），分别纳入Cox回归分析，结果显示术前miR-599与HCC预后有关（P<0.05）。将HCC预后作为因变量，将肿瘤数目、肿瘤分期和术前miR-599作为自变量一并纳入Cox回归分析，结果显示术前miR-599表达量高是HCC预后的独立保护因素（P<0.05）。见表5。

3、讨论

目前，已有多数miRNA被报道与HCC预后有关，如miR-542-3p、miR-139和miR-100-5p等[11,12,13]。本研究主要分析血清miR-599与TACE治疗HCC预后的关系。既往文献报道，接受TACE治疗的HCC患者3年生存率为72.12%[14]，本研究中接受TACE治疗的HCC患者3年生存率为68.07%，存在一定差异，其原因可能与样本量大小、肿瘤分期构成等有关。

为避免混杂因素影响统计分析结果的准确性，本研究采用最邻近原则进行了1∶1倾向性评分匹配，从生存组和死亡组中抽选临床特征匹配的42例患者进行比较。结果显示，生存组和死亡组患者术后miR-599相对表达量均较术前升高，提示miR-599相对表达量与TACE治疗有关；且生存组术前、术后的miR-599相对表达量均高于死亡组，提示术前、术后的miR-599相对表达量与TACE治疗HCC预后有关，是HCC预后评估的潜在生物标志物。本研究构建了术前、术后的miR-599诊断HCC预后的ROC曲线，结果显示术前miR-599诊断HCC预后的ROC曲线下面积高于术后miR-599，提示术前miR-599诊断HCC预后的价值较术后miR-599高；按1∶1倾向性评分匹配（最邻近原则）后，虽术前和术后的miR-599诊断HCC预后的ROC曲线下面积差异无统计学意义，但术前miR-599诊断HCC预后的ROC曲线下面积高于术后miR-599，因此认为术前miR-599对HCC预后评估有一定价值。

本研究用Cox回归分析了HCC预后的风险因素，结果显示术前miR-599是HCC生存预后的独立保护因素；按1∶1倾向性评分匹配（最邻近原则）后，结果亦显示术前miR-599表达量高仍是HCC预后的独立保护因素。推测其原因有以下两点：一是过表达miR-599可靶向MYC抑制HCC细胞增殖、迁移和侵袭[7]；二是过表达miR-599可靶向富含丝氨酸/精氨酸剪接因子2抑制HCC细胞活力、迁移和侵袭，促进细胞周期停滞和凋亡[8],miR-599表达量与HCC细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移等有关，进而可反映HCC患者TACE治疗获益。

既往研究结果显示，肿瘤直径和肿瘤分期与HCC生存预后独立相关[15,16]。本研究结果也显示，肿瘤直径>5cm和肿瘤分期高是HCC生存预后的独立危险因素，接受索拉非尼治疗是HCC生存预后的独立保护因素，与上述报道结果一致。按1∶1倾向性评分匹配（最邻近原则）后，结果显示肿瘤直径>5cm和肿瘤分期高并非HCC生存预后的独立危险因素，推测该差异可能与倾向性评分匹配后样本量小有关，后续还需增大样本量，进一步进行分析。

综上所述，术前miR-599与HCC患者TACE治疗预后有关，其表达量低提示预后不良风险高。本研究尚存在一定不足，如仅分析了血清miR-599与TACE治疗的HCC患者预后的关系，未分析其与接受其他治疗方案的HCC患者预后的关系，后续将开展大样本、多中心研究进行分析，以充实本研究结论。

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文章来源：王奕,韩涛,张志强,崔刚,廖搴,蔡恒烈.血清微小核糖核酸-599与肝细胞肝癌TACE治疗预后的相关性[J].介入放射学杂志,2021,30(12):1265-1270.