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探讨荧光法应用于海洋生物体中石油烃的测定
摘要：使用氢氧化钠将三文鱼冻干样及鳕鱼冻干样皂化,经萃取后,制得样品消化液｡并对用石油醚将残留物溶解,用荧光分光光度计测定｡并对本实验方法的结果进行分析｡结果表明,本实验方法相对标准偏差分别为10.0%和11.4%,加标回收率分别为72.0%和74.0%,表明本实验准确度良好｡
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石油类污染物可通过生物链的传递,影响水产品质量,进而危害人体健康[1]｡近年来,石油污染造成污染物生物体内的富集和积累,使得海洋生物体内石油烃的监测具有十分重要的意义[2]｡荧光分光光度法是测定海洋生物体中石油烃的经典方法,也是海洋监测规范中规定的仲裁方法｡
1､材料与方法
1.1 仪器与试剂
石油醚､氯化钠饱和溶液､无水乙醇､氢氧化钠溶液(6mol/L)､二氯甲烷;油标准使用溶液(1000μg/mL);油标准使用溶液(100μg/mL)｡荧光分光光度计､容量瓶(10mL､50mL､1000mL)､移液管(容量10mL､20mL)､旋转蒸发器､皂化瓶(容量100mL碘量瓶)､锥形分液漏斗(容量500mL)､实验室常备仪器和设备｡
1.2 试验方法
1.2.1 样品的制备
分别选用鳕鱼和三文鱼的冻干样作为实验样品｡准确称取2~5g样品于100mL皂化瓶中,加入20mL氢氧化钠溶液,在室内下避光皂化8~12h,期间每隔1h摇动皂化瓶数次,加入20mL无水乙醇溶液,充分摇匀,4h后进行萃取,制得样品消化液｡
1.2.2 工作曲线的绘制
分别量取0.0mL､0.1mL､0.3mL､0.5mL､0.7mL和0.9mL油标准使用液于6个100mL皂化瓶中,加入20mL氢氧化钠溶液,在室温下避光皂化8~12h｡加入20mL无水乙醇溶液,充分摇匀,4h后,将皂化液全部转入500mL分液漏斗中,用10mL二氯甲烷洗涤皂化瓶,洗涤液转入分液漏斗中,加30mL氯化钠溶液和100mL水振荡3min,静置分层,将有机相收集于旋转蒸发瓶中,用10mL二氯甲烷再萃取一次,将有机相合并收集于旋转蒸发瓶中｡将旋转蒸发瓶与旋转蒸发器连接,在50°C水浴中将二氯甲烷萃取液蒸发至近干,取下旋转蒸发瓶,用氮气将残留二氯甲烷萃取液吹干,准确加入10.0mL石油醚溶解残留物,将石油醚溶液移入1cm石英比色池内,于激发波长310nm,发射波长360nm处进行荧光分光光度测定,以减空白后的相对荧光强度(Ii-Ib)为纵坐标,相应的石油烃含量为横坐标,绘制工作曲线｡
2､结果与分析
2.1 工作曲线绘制
工作曲线绘制结果见表1,由表1可知,标准溶液浓度在0.0~9.0μg/mL范围内,曲线方程为y=-4.65x+65.1,相关系数r=0.9995,表明线性关系良好｡
2.2 检出限
根据《环境监测分析方法标准制修订技术导则》(HJ168-2010)附录A中有关方法检出限的规定,按照样品分析的全部步骤,重复7次空白试验,将测定结果换算为样品中的含量(当称样量为2.0000g时),计算7次平行测定的空白样品含量的标准偏差,按公式(1)计算方法检出限｡MDL=t(n-1,0.99)×S(1)其中,t(n-1,0.99)为置信度为99%､自由度为n-1时的t值;n为重复分析的样品数,连续分析7个样品,在99%的置信区间,t(6,0.99)=3.143;S为7次平行测定的标准偏差,测定结果见表2｡由表2结果可知,荧光分光光度法测定海洋生物体石油烃的检出限为0.19(质量分数,10-6),测定下限为0.76(质量分数,10-6)｡
表1工作曲线绘制结;表2海洋生物体中石油烃的空白测定结果和检
2.3 精密度选取
1.2.1 中两种海洋生物体实际样品,分别平行测定6次,检验精密度,测定结果见表3｡由表3结果可知,本次实验选择的两种实际样品,平行测定结果的相对标准偏差分别为10.0%和11.4%,重复性较好,能够满足海洋监测规范生物体分析要求｡
2.4 准确度
按照测定步骤,对两种实际样品进行加标回收实验,结果见表4｡由表4可见,对两种实际样品进行的加标回收实验,加标回收率分别为72.0%和74.0%,表明本实验准确度良好｡实验过程中皂化是生物体样品前处理的关键步骤,对测定结果存在较大影响｡称好的生物样品应用药匙送入皂化瓶底,避免沾到瓶口,影响皂化效果｡氢氧化钠溶液加入后,应充分摇匀｡由于NaOH不能溶解于石油烃中,而可以溶解于乙醇,且乙醇在烃或油脂中有一定的溶解度,因此,在皂化液中加入适量乙醇以促进生物体样品中脂肪的水解｡由于生物样品的特殊性,因此在萃取过程中极易出现乳化现象,在加入氯化钠无法达到破乳效果时,可将萃取液放入离心机,2000r/min离心3min乳化层即可明显分离｡
3､结论
综上,本文根据荧光分光光度法测定海洋生物体中石油烃测定步骤,以鳕鱼和三文鱼为样品,对方法的工作曲线､精密度和准确度分别进行了验证分析工作,实验结果证实该方法检出限低,具有较好的精密度和准确度,能够满足实验室的分析质量要求,对我国常见海洋生物体中石油烃的监测工作具有重要意义｡
参考文献:
[1]王召会,胡超魁,吴金浩,等.辽东湾海域生物体内石油烃污染状况[J].环境科学学报,2016,36(1):324-331.
[2]王倩,邵秘华,陶平.荧光法测定海洋生物体中石油烃总量[J].大连海事大学学报,2006,32(1):51-53.
李静.荧光法测定海洋生物体中石油烃[J].生物化工,2019,5(5):107-109.
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2021-09-28
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2020-07-07
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2020-07-03
真菌次级代谢产物主要有聚酮类、生物碱类、萜类、肽类和其他类化合物[1]，在不同的发酵策略下可能会发酵不同的次级代谢产物。本研究首次报道通过白光光照一株篮状菌，可以稳定发酵出一种聚酮化合物Rugulosin，为进一步研究其次级代谢产物生物学活性以及合成通路提供化合物基础。
2020-07-03
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2020-05-28我要评论
期刊名称：海洋学研究
期刊人气：858
主管单位：国家海洋局
主办单位：中国海洋学会,国家海洋局第二海洋研究所,浙江省海洋学会
出版地方：浙江
专业分类：科学
国际刊号：1001-909X
国内刊号：33-1330/P
创刊时间：1983年
发行周期：季刊
期刊开本：16开
见刊时间：一年半以上
影响因子：1.280
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2020-02-14
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上传者：管理员
