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3～5岁儿童龋活性及部分唾液致龋菌的相关性研究

2024-05-15 117 上传者：管理员

摘要：目的分析3～5岁儿童的龋活性及患龋状况的相关影响因素，探讨不同龋活性及患龋状况儿童口腔唾液中变形链球菌、双歧杆菌、韦荣球菌及奈瑟菌的分布及与龋活性的相关性，为低龄儿童龋(ECC)的病因研究和阻断治疗提供科学依据。方法 2022年3—6月从石家庄市3所幼儿园中招募128名3～5岁儿童，进行口腔检查，采用Cariostat法检测龋活性，对家长进行问卷调查，使用实时荧光定量PCR检测唾液中变形链球菌、双歧杆菌、韦荣球菌及奈瑟菌的分布。结果重度低龄儿童龋(SECC)组中高龋活性儿童比例最高(64.3%)。儿童的龋活性试验(CAT)值与龋失补牙数(dmft)呈正相关(r=0.708,P<0.05)。logistic回归分析结果显示：dmft、年龄、父母帮助/监督儿童刷牙频率是龋活性的影响因素(均P<0.05);dmft是患龋状况的影响因素(P<0.05)。不同龋活性组和患龋状况组变形链球菌、双歧杆菌、奈瑟菌表达量比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高龋活性与高dmft的儿童唾液中变形链球菌、双歧杆菌数量多，奈瑟菌数量少。

关键词：
低龄儿童龋
双歧杆菌
变形链球菌
奈瑟菌
韦荣球菌
龋活性
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低龄儿童龋(ECC)作为儿童常见的慢性疾病之一，已对全世界儿童的身心健康造成严重危害[1]。2021年Uribe等[2]研究表明ECC影响了全球将近一半的学龄前儿童。ECC病因复杂多样，其发生、发展与细菌、宿主、食物、父母文化水平等因素密切相关[3,4]。在细菌因素中，双歧杆菌、韦荣球菌及奈瑟菌与ECC关系密切，但其与龋活性之间的关系报道较少。本研究通过对石家庄市3～5岁儿童行口腔检查、Cariostat龋活性检测及问卷调查，探讨儿童龋活性与患龋情况的关系及相关易感因素，同时运用实时荧光定量PCR技术对不同龋活性及不同患龋状况儿童口腔唾液中的变形链球菌、双歧杆菌、韦荣球菌、奈瑟菌进行定量检测，分析其分布特点，为探讨ECC病因并筛选龋易感儿童实施个性化阻断提供科学依据。

1、对象与方法

1.1 研究对象

2022年3—6月从石家庄市3所幼儿园中招募128名3～5岁儿童。纳入标准：①年龄3～5岁，全口牙列为乳牙列；②无全身系统性疾病、传染病及明显先天性异常；③近3个月内未使用抗生素、益生菌，未局部应用氟化物；④无视觉可检测到的牙釉质或牙本质发育不全；⑤家长自愿签署知情同意书及问卷调查表。排除标准：①有严重精神或全身系统性疾病的儿童；②近3个月内服用过抗生素；③有口腔局部用药史(如漱口水、氟化铵银);④佩戴牙齿矫正器及无法配合者。本研究已通过河北医科大学口腔医院医学伦理委员会审查，伦理号：[2018]028。所有参与本研究的儿童父母或监护人均签署了知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 口腔患龋状况检查和Cariostat龋活性检测

根据WHO推荐的口腔检查方法和标准[5],由两名经验丰富的口腔医生在现场采用视诊结合探诊的方式检查儿童口腔患龋状况，记录龋失补牙数(dmft)。根据dmft结果，将受试者分为3组：无龋组(CF组，28例)、ECC组(30例)、重度低龄儿童龋(SECC)组(70例)。研究开始前，检查人员接受统一的专业培训，以确保检查和龋齿诊断的一致性，Kappa值均>0.8。

检查者采用Cariostat龋态试剂盒所配专用棉棒在受检儿童的上颌磨牙颊侧和下颌前牙唇侧近牙颈处轻轻来回擦拭3～5次，采集牙面软垢和菌斑的混合样本后，立即将棉棒放入试剂瓶中。在37 ℃恒温箱中培养4 h后取出，读取并记录龋活性试验(CAT)值。CAT值共有7个等级，分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0,并将其分为3组，其中0～1.0为低龋活性儿童(40例),1.5为中龋活性儿童(42例),2.0～3.0为高龋活性儿童(46例)。

1.2.2 问卷调查

依据ECC及龋活性相关影响因素并结合《第四次全国口腔健康流行病学调查》设计调查问卷。该调查问卷主要涉及以下方面内容：①儿童和父母/监护人的人口社会学信息：姓名、性别、年龄、城乡居住情况、母亲分娩方式、父母受教育水平、经济收入等信息；②日常生活饮食习惯：零食、饮料、水果蔬菜、奶制品等进食频率，夜间喂养儿童的频率等；③口腔保健行为：儿童看口腔医生的频率，儿童刷牙的年龄、频率等。调查问卷均由儿童的父母或监护人填写并由专人收回。

1.2.3 唾液样本收集、DNA提取及实时荧光定量PCR检测

儿童唾液收集于上午9∶00～11∶00进行。嘱所有受试者在前晚不刷牙及漱口，禁食、禁水2 h。收集唾液时，儿童在两名口腔医生指导下将唾液吐到无菌容器中，需收集每名儿童2 ml自发的、未受刺激的全唾液样本。采集的样品标记后在干冰上快速冷冻，2 h内运送到实验室，然后-80 ℃保存直到提取DNA。使用QIAamp DNA Mini Kit试剂盒提取DNA,DNA浓度和纯度用NanoDrop 2000分光光度计检测，A260/A280范围1.8～2.0为合格，将检测合格的DNA样本储存于-20 ℃,采用实时荧光定量PCR检测双歧杆菌、韦荣球菌、奈瑟菌、变形链球菌。

1.3 统计学分析

使用SPSS 26.0软件进行数据分析。对数据进行正态性检验及方差齐性检验，使用方差分析和卡方检验对年龄和性别进行分析，通过卡方检验和秩和检验对问卷调查结果进行单因素分析，使用Bonferroni校正的多重比较及Kruskal-Wallis单因素ANOVA(k样本)检验法进一步研究3组间的差异。采用logistic回归模型对单因素分析中P<0.05的影响因素进行多因素分析。通过Spearman检验分析龋活性和dmft的相关性。不符合正态分布的数据采用M(P25,P75)描述，进行非参数秩和检验。

2、结果

2.1 一般情况

共纳入3～5岁儿童128名，其中男性66名(51.6%),女性62名(48.4%),男女比例为1∶0.94,平均年龄(4.30±0.63)岁。低、中、高龋活性的儿童分别为40名(31.3%)、42名(32.8%)、46名(35.9%)。CF、ECC、SECC儿童分别为28名(21.9%)、30名(23.4%)、70名(54.7%)。CF组中低龋活性儿童比例最高(75.0%),SECC组中高龋活性儿童比例最高(64.3%)。不同龋活性儿童的患龋状况比较差异有统计学意义(χ2=78.223,P<0.05)。见表1。儿童的CAT值与dmft呈正相关(r=0.708,P<0.05)。

2.2 单因素分析

单因素分析结果显示：夜间喂养频率、戒断夜奶喂养年龄、父母帮助/监督儿童刷牙频率、看口腔医生频率、家长是否知道氟化物保护牙齿是患龋状况的影响因素(均P<0.05);父亲的学历、夜间喂养频率、戒断夜奶喂养年龄、父母帮助/监督儿童刷牙频率、看口腔医生频率是龋活性的影响因素(均P<0.05)。见表2、表3。

表1 儿童龋活性与患龋状况的关系[例(%)]

表2 儿童患龋状况的影响因素分析[例(%)]

表3 儿童龋活性的影响因素分析[例(%)]

2.3 多因素分析

logistic回归分析结果显示：dmft、年龄、父母帮助/监督儿童刷牙频率是龋活性的影响因素(均P<0.05);dmft是患龋状况的影响因素(P<0.05)。见表4、表5。

表4 龋活性影响因素的logistic回归分析

表5 患龋状况影响因素的logistic回归分析

2.4 不同龋活性组致龋菌表达量比较

不同龋活性组变形链球菌、双歧杆菌、韦荣球菌、奈瑟菌表达量比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。高龋活性的儿童唾液中变形链球菌、双歧杆菌、韦荣球菌数量多，奈瑟菌数量少。见表6。

2.5 不同患龋状况组致龋菌表达量比较

不同患龋状况组变形链球菌、双歧杆菌、奈瑟菌表达量比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。高dmft的儿童唾液中变形链球菌、双歧杆菌数量多，奈瑟菌数量少。见表7。

表6 不同龋活性组致龋菌表达量比较[M(P25,P75)]

表7 不同患龋状况组致龋菌表达量比较[M(P25,P75)]

3、讨论

本研究定量检测不同龋活性及患龋状况儿童口腔唾液中双歧杆菌、韦荣球菌、奈瑟菌的分布及特点，同时检测了与韦荣球菌和双歧杆菌关系密切的致龋菌——变形链球菌在不同龋活性及患龋状况儿童口腔唾液中的分布规律，结果发现该4种细菌与儿童的龋活性及患龋状况之间存在密切的相关性；其次，本研究分析了不同龋活性及患龋状况儿童的相关影响因素，这对ECC患儿病因的探索具有重要意义。本研究结果再次证实了低龄儿童CAT值与其dmft存在正相关关系，Cariostat龋活性实验对诊断ECC儿童具有一定的价值。

对于dmft和龋活性的关系方面，与大多数研究结果[6,7]一致，两者之间呈正相关关系，且CF组儿童的龋活性比ECC组和SECC组儿童的龋活性低，可能是由于ECC或SECC儿童口腔中致龋菌的产酸能力更强，故其CAT值较高。

本研究logistic回归分析显示：dmft、儿童的年龄、父母帮助/监督儿童刷牙频率是龋活性的影响因素。Yadav等[8]和Mitrakul等[9]研究结果表明：夜奶喂养会增加ECC的风险，可能是由于儿童在夜间含乳头或奶瓶入睡或者母亲持续夜奶喂养，将导致儿童口腔中含糖奶液与牙面接触时间过长，致龋菌产酸量增加，而家长没有进行有效牙齿清洁，同时口腔中的唾液在夜间睡眠状态下分泌减少，缓冲能力下降，pH值降低，往往导致龋活性升高，患龋情况严重。本研究发现：在牙疼或者发现龋洞后选择看口腔医生的儿童比每6个月或每12个月定期去看口腔医生的龋活性高以及患龋状况严重，可能与定期带儿童进行口腔健康检查的意识淡薄有关[10]。与Aljafari等[11]观点不同，本研究发现父母每天监督或帮助儿童刷牙，其CAT值仍较高，结合儿童口腔患龋状况普遍严重的情况，可能原因为父母在监督儿童刷牙时，未能有效去除致龋的牙菌斑，其刷牙效果不达标，而膳食、卫生习惯等因素在高龋活性中发挥的作用也不容忽视。

以往有研究[12]表明父母的文化程度低是导致ECC发生、发展的重要因素之一。曾慧芳[13]发现父母的受教育程度在不同患龋状况及不同龋活性儿童之间不存在明显的相关性。本研究发现：母亲的受教育程度与儿童龋活性及患龋状况之间无统计学差异，与Manohar等[12]研究结果不同。本研究结果显示：父亲的文化程度越高，儿童龋活性越高，这可能是由于父亲的文化程度高并不代表其具有较高的口腔保健意识，而另一方面较高的文化水平在某种程度上即意味着其收入水平可能较高，家庭用于购买甜品等零食的可支配收入较充足，儿童可能间接摄入大量甜食导致其口腔环境产酸，龋活性升高。本研究发现与不知道氟化物能保护牙齿相比，家长知道氟化物能保护牙齿的儿童患龋状况更严重，其原因可能是随着社会、学校对氟化物在口腔科应用的普及，越来越多家长具有“氟能护齿”这个常识，但真正采用含氟牙膏等氟化物保护措施的家长可能较少。

口腔中存在的致龋微生物在ECC发病中发挥了重要的作用。以往研究[13]显示：儿童口腔唾液中变形链球菌、远缘链球菌与儿童龋活性和ECC罹患状况密切相关。本研究结果表明：变形链球菌、双歧杆菌、奈瑟菌在CF组、SECC组及ECC组间差异均有统计学意义，而韦荣球菌未发现存在显著差异，而该4种细菌在不同龋活性组中分布差异有统计学意义。Mitrakul等[9]对从2～5岁儿童SECC组和无龋组收集的初始和成熟菌斑中的变形链球菌、乳酸杆菌和双歧杆菌进行定量检测，结果发现SECC组初始和成熟菌斑中变形链球菌、乳酸杆菌和双歧杆菌的含量及占细菌总数的比例均显著高于无龋组，与本研究结果一致。本研究发现3～5岁儿童口腔唾液中双歧杆菌与龋活性之间密切相关，与低龋活性组和中龋活性组相比，在高龋活性组中的数量分布更多。以往对双歧杆菌致龋性的研究[12]表明：双歧杆菌可能具有独特的代谢途径，可通过增加产酸性而赋予致龋潜力，提示口腔唾液中双歧杆菌数量的增加可降低pH值，增加低龄儿童口腔的CAT值；因CAT值的高水平持续状态及其波动状态与ECC发生、发展密切相关，而双歧杆菌究竟在不同龋活性儿童口腔中发挥了何种作用，其具体机制还需进一步研究。奈瑟菌在口腔中发挥的作用具有双向性。有研究[14]发现杆状奈瑟菌ATCC BAA-1200菌株与葡萄糖相关代谢途径呈正相关且具有发酵产酸的能力，与ECC的致龋性密切相关。但本研究发现：与CF组相比，口腔唾液中奈瑟菌的数量在ECC组和SECC组均减少，与Belstr⌀m等[15]研究结果相似，其结果表明奈瑟菌可降解菌斑中产酸菌所产生的乳酸并将其转变为弱酸和挥发性酸，且还具有利用乳酸的能力，是口腔中的有益菌。同时，本研究还发现奈瑟菌在低龋活性组中的数量高于中龋活性组和高龋活性组，提示其可能也是低龋活性儿童口腔中的有益菌，但奈瑟菌在低龋活性组儿童口腔中如何发挥抑龋作用以及是否与致龋菌存在拮抗作用，目前相关研究甚少。Zhang等[16]研究结果表明：韦荣球菌是ECC致龋菌之一，而本研究却发现韦荣球菌在CF组、ECC组及SECC组间未存在统计学差异，可能是由于每个个体口腔中的微环境不同，细菌的分布也不一样。在本研究中，韦荣球菌的数量在不同龋活性和dmft状况的儿童中分布不一致，提示龋活性除与产酸致龋菌有关外，还可能与宿主、膳食、社会行为等其他因素密切相关。

综上所述，ECC的致龋性及儿童口腔较高的龋活性可能与儿童的年龄，dmft, 夜间喂养频率，戒断夜奶喂养年龄，看口腔医生频率，口腔部分致龋菌如变形链球菌、双歧杆菌、韦荣球菌的数量及分布密切相关，而奈瑟菌可能为儿童口腔中的有益菌。未来可加强监控口腔中的这些致龋菌的分布特点，观察其在牙面定植及与ECC和龋活性改变的关系，为保持学龄前儿童口腔低龋活性状态以预防和阻断ECC的发生、发展提供指导和新途径。同时，本研究也存在一定的局限性，本研究为横断面调查且所纳入的样本量较少，因此未来还需要进行更大样本量的动态研究，以全面探索口腔唾液及其牙菌斑生物膜的微生物群落与龋活性及ECC的相关性。

参考文献:

[6]游弋,黄培城,彭程纬等.长沙市雨花区3~5岁儿童龋齿流行病学调查及龋活性检测[J].中国医师杂志,2021,23(8):1169-1171,1175.

[13]曾慧芳.低龄儿童龋活性及其唾液致龋菌的相关性分析[D].河北医科大学,2020.

基金资助:河北省政府资助专科能力建设和专科带头人培养项目(0300000054);河北省政府资助临床医学优秀人才培养项目(361029);

文章来源:林秀燕,王惠敏,赵增波,等.3~5岁儿童龋活性及部分唾液致龋菌的相关性研究[J].中国妇幼保健,2024,39(10):1783-1787.