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超声造影联合血清miR-29a、miR-126检测在肾癌诊断中价值

2024-03-01 11 上传者：管理员

摘要：目的观察超声造影联合血清微小RNA(miR)-29a、miR-126检测在肾癌诊断中的效能。方法选取陕西省延安市洛川县医院2019年2月至2022年2月86例肾癌患者作为肾癌组，另选取同期24例肾错构瘤患者作为良性组，所有患者均接受超声造影检查，采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测血清miR-29a、miR-126相对表达量，比较两组超声造影参数及血清miR-29a、miR-126相对表达量，采用受试者工作特征(ROC)曲线分析超声造影联合血清miR-29a、miR-126检测对肾癌的诊断价值；采用Pearson相关分析超声造影参数与血清miR-29a、miR-126的相关性。结果肾癌组PI高于良性组，TTP、ET均低于良性组，差异有统计学意义(P<0.05);肾癌组血清miR-29a相对表达量高于良性组，miR-126相对表达量低于良性组，差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示，PI、TTP、ET、血清miR-29a及miR-126联合检测诊断肾癌的曲线下面积(AUC)为0.931,高于5项指标单独检测的AUC(0.795、0.785、0.751、0.777、0.795,P<0.05)。肾癌患者超声造影参数PI与血清miR-29a相对表达量呈正相关(r=0.701,P<0.05),与miR-126相对表达量呈负相关(r=-0.735,P<0.05);TTP、ET均与miR-29a相对表达量呈负相关(r=-0.662、-0.635,P<0.05),与miR-126相对表达量呈正相关(r=0.682、0.647,P<0.05)。结论肾癌患者血清miR-29a水平升高、miR-126水平降低，超声造影联合血清miR-29a、miR-126检测对肾癌具有较高的诊断效能，可为肾癌的临床诊疗提供参考。

关键词：
miR-126
miR-29a
实时荧光定量聚合酶链反应
肾癌
超声造影
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肾癌属于泌尿系统恶性肿瘤，早期症状隐匿，患者出现典型症状时，病情往往已进展，错失最佳治疗时机[1,2]。及早诊断肾癌对制订治疗方案、改善患者生存情况具有重要的临床价值。超声造影将造影剂经静脉团注，从而提高靶区域血流信号，有利于观察病灶动态增强特征，准确地定性诊断，是临床诊断肾癌常用的影像学手段[3]。近年来有研究认为，超声造影在恶性肿瘤早期的诊断效能未能达到预期[4]。微小RNA(miR)能特异性结合mRNA,影响mRNA翻译过程，发挥生物学作用，与恶性肿瘤发生、发展及患者预后有关[5]。现阶段临床关于肾癌诊断的研究较多[6,7],但关于超声造影联合血清miR对肾癌诊断效能的研究较少。基于此，本研究分析了超声造影联合血清miR-29a、miR-126检测在肾癌诊断中的效能，以期为肾癌诊断提供新思路，现报道如下。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取陕西省延安市洛川县医院(以下简称本院)2019年2月至2022年2月86例肾癌患者作为肾癌组。(1)纳入标准：①符合《肾癌临床诊断与治疗：从指南到临床》[8]中的诊断标准，经病理学检查确诊；②首次确诊；③近期未接受相关治疗；④均接受超声造影检查。(2)排除标准：①不符合超声造影检查条件；②合并其他类型恶性肿瘤；③存在传染性疾病、甲状腺功能异常；④合并感染性疾病、免疫系统疾病或其他慢性疾病；⑤存在肝脏、心脏等重要脏器严重损伤；⑥存在精神疾病、凝血及认知功能严重损伤；⑦临床及超声造影检查资料不全。另选取同期24例肾错构瘤患者作为良性组。(1)纳入标准：①均接受超声造影检查，并经病理学检查确诊；②近期未接受相关治疗。(2)排除标准：①不符合超声造影检查条件；②合并恶性肿瘤；③存在传染性疾病、甲状腺功能异常；④合并感染性疾病、免疫系统疾病或其他慢性疾病；⑤存在肝脏、心脏等重要脏器严重损伤；⑥存在精神疾病、凝血及认知功能严重损伤；⑦临床及超声造影检查资料不全。肾癌组中男51例，女35例；年龄35～73岁，平均(55.82±8.06)岁；体质量指数18.62～26.84 kg/m2,平均(23.01±1.37)kg/m2。良性组中男15例，女9例；年龄33～70岁，平均(54.63±7.65)岁；体质量指数18.37～26.09 kg/m2,平均(22.75±1.53)kg/m2。两组一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。所有研究对象均签署知情同意书，本研究经过本院医学伦理委员会审核批准(伦理批号：20180321)。

1.2方法

1.2.1超声造影检查

仪器选择LOGIC E9型超声诊断仪(美国GE公司),探头频率5 MHz,时间分辨率每秒13帧，动态范围65～70 dB,机械指数为0.1,造影剂为SonoVue。嘱患者取仰卧位，保持平稳、缓慢呼吸，减少剧烈呼吸运动对超声检查的不良影响。常规超声，观察肿块的大小、边界、内部回声、有无彩色血流信号、血管位置等，任何环绕肿块或肿块内出现的彩色血流信号均判断为肿块血管，选择病灶最佳切面，使肿块处于图像中部，将探头固定后采用造影模式，1.2 mL造影剂经肘静脉团注后，注射5 mL 0.9%氯化钠溶液，观察超声造影模式下造影剂连续灌注的过程。采用配套软件对超声造影结果进行定量分析，选择病灶感兴趣区(注意避开大血管和坏死区域),通过软件获取造影时间-强度曲线，得到峰值强度(PI)、达峰时间(TTP)和增强时间(ET)等超声造影参数。

1.2.2病理检测

手术切除肿块后进行病理学检查，4%中性甲醛溶液浸泡固定后进行常规脱水，并以石蜡包埋，随后固定于切面机上进行连续横断面切片，每张切片厚5μm,每张切片上采用2个组织面进行HE染色。切片经二甲苯脱蜡，采用100%、95%、80%乙醇梯度水洗，随后采用苏木素染色液浸染10 min,水洗后再采用1%盐酸乙醇水洗，经饱和碳酸锂浸泡1～2 min后水洗，伊红染色3～4 min后以80%、95%、100%乙醇梯度脱水，二甲苯透明2次后中性树胶封片，光镜下采集图像。病理分类参照2004年世界卫生组织(WHO)肾脏肿瘤组织学分类方法。

1.2.3 miR-29a、miR-126检测

所有患者均于入院当日采集空腹静脉血3 mL,离心处理(转速3 000 r/min、半径10 cm、时间10 min)后，取上清液待测。血清总RNA通过RNA抽提试剂盒提取，甲醛变性电泳检测其完整性，互补DNA经反转录试剂盒合成。血清miR-29a、miR-126通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测：反应体系为DNA模板2.0μL、引物1.0μL、SYBR GreenⅠMaster 10.0μL和RNase-Free H2O 8.5μL;反应条件为95℃15 s、94℃15 s、55℃30 s、75℃30 s,共45个循环。miR-29a上游引物序列：5′-GCGGCGGTAGCACCATCTGAAATC-3′,下游引物序列：5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′;miR-126上游引物序列：5′-GTCTCGTQACCGTGAGTAAT-3′,下游引物序列：5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。内参选择U6,miR-29a、miR-126水平通过2—ΔΔCt计算。

1.3统计学处理

采用SPSS20.0统计软件进行数据处理及统计分析。呈正态分布的计量资料以

表示，两独立样本组间比较采用独立样本t检验；计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验；采用受试者工作特征(ROC)曲线分析超声造影联合血清miR-29a、miR-126对肾癌的诊断价值；采用Pearson相关分析超声造影参数与血清miR-29a、miR-126的相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1两组超声造影参数比较

肾癌组PI高于良性组，TTP、ET均短于良性组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1两组超声造影参数比较

2.2两组血清miR-29a、miR-126比较

肾癌组血清miR-29a相对表达量高于良性组，miR-126相对表达量低于良性组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3超声造影联合血清miR-29a、miR-126对肾癌的诊断价值

ROC曲线分析结果显示，PI、TTP、ET、血清miR-29a及miR-126联合检测诊断肾癌的曲线下面积(AUC)为0.931,大于5项指标单独检测的AUC(P<0.05)。见图1、表3。

表2两组血清miR-29a、miR-126相对表达量比较

图1超声造影联合血清miR-29a、miR-126诊断肾癌的ROC曲线

2.4超声造影参数与血清miR-29a、miR-126的相关性

肾癌患者超声造影参数PI与血清miR-29a相对表达量呈正相关(r=0.701,P<0.05),与miR-126相对表达量呈负相关(r=—0.735,P<0.05);TTP、ET均与miR-29a相对表达量呈负相关(r=—0.662、—0.635,P<0.05),与miR-126相对表达量呈正相关(r=0.682、0.647,P<0.05)。

表3超声造影联合血清miR-29a、miR-126对肾癌的诊断价值

3、讨论

肾癌是多见于中老年群体的肾实质恶性肿瘤，在环境污染、饮食结构变化等因素影响下，患病人数不断增加且年龄趋于年轻化[9]。肾癌患者若救治不及时会对生命安全造成严重威胁。因此，探寻安全、有效的方法及早诊断肾癌对控制病情进展、延长生存周期尤为重要。近年来研究发现，影像学联合血清学检查能有效提高肾癌诊断效能[10]。

超声造影可清楚显示肿瘤内部及附近血液供应情况，反映肿瘤不同区域灌注及消退情况，对微小血管也有良好的显示效果，能弥补常规超声的不足。造影剂可以强化血流多普勒信号，避免血管直径对血流显示的影响，有利于判断肿瘤血管状况，从而提高诊断准确度[11]。临床研究发现，不同于良性病变，恶性肿瘤患者病灶内血供丰富，TTP、ET等超声造影参数更低，而PI更高[12]。本研究中肾癌组PI高于良性组，TTP、ET均低于良性组，与上述研究结果相符，表明肾癌患者超声造影参数存在变化，可为临床诊断肾癌提供参考。分析原因为PI可以反映血管生成密度，ET可以反映病灶内出现造影剂的时间，TTP可以反映病灶内造影剂达到最大量的时间[4]。肿瘤的形成与血管增生存在密切联系，相比于良性肿瘤，恶性肿瘤血管增生较快，血管密度相对较高，血管直径更大，病灶内新生血管形成较多且排列紊乱，故注射造影剂后PI较高。此外，恶性肿瘤发生及发展对血氧供应的需求较高，易引起新生血管形成，导致血流灌注明显增加，且新生血管扭曲有利于血管袢及血管网形成，使造影剂到达肿瘤时间缩短，病灶局部血管内的微泡流速加快，进一步造成TTP缩短，影像学以造影剂富集、“快进快出”为主要表现。

miR是一类具有组织特异性的非编码RNA,能影响细胞分化、生长及凋亡等生命活动过程，在肿瘤发生中发挥着重要作用，可作为早期诊断及预后预测的参考指标。近年来研究发现，miR-29a、miR-126均与恶性肿瘤发生、发展有关[13,14]。既往研究显示，miR-29a在不同肿瘤细胞中存在异常表达，具有抑癌或促癌基因双重作用[15]。miR-29a在肝癌中呈高表达，过表达miR-29a能促进HepG2细胞迁移，从而加重肝癌患者病情进展[16]。miR-29a在胃癌中呈低表达，能使透明质酸合成酶3表达下调，进而对胃癌细胞转移发挥抑制作用[17]。国内研究发现，miR-29a在肾癌发病中起着促癌基因作用，过表达miR-29a能促进肾癌细胞增殖及侵袭[18]。miR-126能通过调控靶基因，调控细胞分化及增殖，从而影响肿瘤发生及转移。有研究结果显示，miR-126在肿瘤细胞中起着抑癌基因作用，miR-126低表达可缩短恶性肿瘤患者复发的中位时间[19]。miR-126对PI3K、sprouty相关蛋白等血管内皮生长因子通路有抑制作用，能负调控新生血管形成[20]。本研究结果显示，肾癌组血清miR-29a相对表达量高于良性组，miR-126相对表达量低于良性组，提示miR-29a在肾癌中起着促癌基因作用，而miR-126起着抑癌基因作用，与上述研究结果相符。ROC曲线分析结果显示，PI、TTP、ET、血清miR-29a及miR-126联合检测诊断肾癌的AUC高于5项指标单独检测，表明超声造影联合血清miR-29a、miR-126检测能明显提高肾癌的诊断效能。分析原因为超声造影、血清miR-29a及miR-126诊断肾癌的途径不同，联合检测可实现优势互补，为诊断提供有效信息，提高准确度。

综上所述，肾癌患者血清miR-29a水平升高、miR-126水平降低，超声造影联合血清miR-29a、miR-126对肾癌具有较高的诊断效能，可为肾癌的临床诊疗提供参考。

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