肺癌是全球常见的恶性肿瘤之一,严重危害人 类健康,每年有超过 1 800 万新病例和 960 万人死 亡〔1,2〕 ｡ 由于肺癌早期的临床表现不明显,多数患 者诊断时已属晚期, 而且诊断时年龄普遍大于 60 岁,5 年生存率较低｡ 因此,提高肺癌的早期诊断 率是提高 5 年生存率的关键｡

乳脂肪球表皮生长因子( MFG-E8) 是一种位 于细胞膜上的亲脂性糖蛋白｡ 随着研究不断深 入,发现该物质由活化的巨噬细胞和未成熟的树 突细胞 分 泌,几 乎 表 达 于 所 有 器 官､组 织､ 细 胞 中〔2〕 ,在体内发挥重要作用｡ 越来越多的证据表 明,MFG-E8 在脾脏､肺､肝､肾､肠中广泛表达〔3〕 ｡ 而在各种炎症性疾病中,其含量显著下降,导致过 度的炎症和组织稳态异常〔4,5〕 ｡ 其在包括前列腺 癌､胶质母细胞瘤､乳腺癌､黑色素瘤､膀胱肿瘤等 多种肿瘤细胞中有较高表达,其与肿瘤生长､侵 袭､凋亡､血管生成及上皮间质转化有关｡ 然而, MFG-E8 在肺癌组织中的表达相关报道较少,本研 究检测血清及支气管肺泡灌洗(BALF)中 MFG-E8 水平,以探讨其在肺癌早期诊断中的临床价值｡ 同时对目前应用于临床检测肺癌的 4 种血清肿瘤标志物〔 癌胚抗原( CEA) ;鳞状细胞癌相关抗原 ( SCC) ;神经元特异性烯醇化酶(NSE) ;细胞角蛋 白 19 片段( CYFRA21-1) 〕 进行检测,并探讨 5 种 肿瘤标志物在肺癌中的诊断价值｡

1、资料与方法

1. 1 一般资料

选取2018 年 1 月至 2021 年 5 月 在武汉市第一医院经过临床及病理学确诊的肺癌 患者｡ 分 别 收 集 肺 癌 组 和 良 性 病 变 组 各 60 例 BALF 标 本｡ 肺 癌 组 中 男 41 例, 女 19 例; 年 龄 46 ~ 82 岁｡ 入选患者均经支气管镜组织活检或经 皮肺穿刺活检或手术病理学确诊;根据国际肺癌 研究 学 会 ( IASLC) TNM 分 期 标 准 ( 2009 年, 第 7 版)进行分期｡ 并收录患者基本信息､样本采集 保存情况､确诊资料､相关疾病信息及其他伴随疾 病及疾病史等;良性病变组男 29 例,女 31 例,均 经细菌学､影像学､病理学等方法确诊,排除肿瘤｡ 每个样本收录患者年龄､性别等基本信息,血常 规､尿常规､肝功､肾功等实验室常规检查结果､曾 有病史记录等信息｡ 两组一般资料仅性别有显著 差异(P 0. 05) ｡ 见表 1｡

表1 两组一般资料比较

1. 2 仪器与试剂

仪器:自动平衡离心机;透景 Luminex200 多功能流式点阵仪(上海透景生命科技 有限公司);Roche e801 电化学发光全自动免疫分 析仪｡ 试剂:MFG-E8 定量检测试剂盒购于上海透 景生命科技股份有限公司｡ CEA､ SCC､NSE､ CYFRA21-1 试剂均为 Roche 电化学发光仪配套原装试剂｡

1. 3 实验方法及步骤

标本采集:两组均行纤维 支气管镜常规检查,雾化吸入 2%利多卡因 8 ml, 吸氧下常规支气管镜检查下行肺活检或黏膜活 检､刷检､肺泡灌洗｡ 患者均按标准给予生理盐水 每次 30 ml,共 120 ml 灌洗病灶部位,回吸收负压 以支气管腔不塌陷为宜,收集肺 泡 灌 洗 液 50 ~ 80 ml,支气管肺泡灌洗液经双层无菌纱布过滤后 以 1 500 r/ min 离 心 10 min 取 上 清 液 5 ml 在 -20 ℃ 环境中保存待测｡ 样本检测步骤:采用 Luminex-200 多功能流式点阵仪检测样本中的 MFGE8 水平｡ 把 MFG-E8 的抗体分子以共价交联的方 式结合到特定的编码微球上,将其充分混匀,加入 待测样本,所形成的复合物再与链霉亲和素标记 的 PE 发生结合反应｡ 微球在流动鞘液的带动下 单列依次通过红绿激光,红激光用来判定微球针 对的抗体,绿激光用来测定微球上报告分子的荧 光强度,从而完成定量检测｡

1. 4 统计学分析

采用SPSS20. 0 软件进行 ManWhitney U 检验､χ 2 检验;单项目检测的敏感性及特 异性使用受试工作者特征(ROC)曲线进行评价,联 合检测的敏感性及特异性先使用二元 Logistic 回归 分析,并将回归参数再进行 ROC 评价｡

2、结果

2. 1 两组 BALF 中 5 种肿瘤标志物水平比较

肺癌组BALF 中 CEA､SCC､CYFRA21-1 及 MFG-E8 水 平明显高于良性病变组(P0. 05)｡ 见表 2｡ 2. 2 肺泡灌洗液中 CEA､NSE､SCC､CYFRA21-1 及 MFG-E8 5 种项目对肺癌的诊断效能 ROC 曲线结 果显示,MFG-E8>191. 7 pg / ml,倾向于诊断肺部恶 性肿瘤｡ BALF 中 CEA､NSE､ SCC､ CYFRA21-1 及 MFG-E8 对肺癌患者均具有诊断价值｡ 见图 1､ 表 3｡

2. 2 肺泡灌洗液中CEA､NSE､SCC､CYFRA21-1 及 MFG-E8 5 种项目对肺癌的诊断效能

ROC 曲线结 果显示,MFG-E8>191. 7 pg / ml,倾向于诊断肺部恶 性肿瘤｡ BALF 中 CEA､NSE､ SCC､ CYFRA21-1 及 MFG-E8 对肺癌患者均具有诊断价值｡ 见图 1､ 表 3｡

表2 两组 BALF 中 CEA､NSE､SCC､CYFRA21-1 及 MFG-E8 水平比较

图1 BALF 中 CEA､NSE､SCC､CYFRA21-1 及 MFG-E8 对肺癌诊断的 ROC 曲线

表3 BALF 中 CEA､NSE､CYFRA21-1､SCC 及 MFG-E8 对肺癌诊断效能的敏感度及特异度

图2 BALF 中标志物二联及多联检测的 ROC 曲线

表4 联合检测中二联､三联､四联及五联的敏感度及特异度比较

2. 3 BALF 中 CEA､NSE､SCC､CYFRA21-1 及 MFGE8 5 种项目联合检测对肺癌的诊断效能

在鉴别诊断肺癌方面MFG-E8､CEA､CYFRA21-1 ROC 有较 好的敏感度和特异度,明显高于 NSE､SCC｡ 因此, 将 MFG-E8､CEA､CYFRA21-1 指标进行二联组合｡ 二联检测结果可见,MFG-E8+CYFRA21-1 二联检测 肺癌的诊断效能高于其他两种二联组合｡ 见图 2｡ 按表 3 中单项目的能效高低,对多联检测进行分组, 由表 4 可知,MFG-E8､CYFRA21-1､CEA 三联检测可 进一步提高诊断肺癌的敏感度､特异度;ROC 曲线 显示,其 AUC 高于 MFG-E8 与 CYFRA21-1 二联检 测｡ 四联及五联检测的 AUC,与三联检测相比比值 较接近｡ 见图 2｡ 尤其是 3 种多联合检测敏感度相 同,得出筛查肺癌的最适合肿瘤标志物组合是 MFGE8+CYFRA21-1+CEA 三联检测｡

3、讨论

1990 ~ 2017 年,肺癌患者死亡率和生命损失 年数(YLLs)分别增加至 28. 2%和 12. 6%,直接导 致 从 1990 年 排 名 第 13 位 变 化 到 2017 年 第 3 位〔6〕 ｡ 改善肺癌患者预后､延缓肺癌病死率的有 效手段是早发现､早诊断､早治疗｡ 目前检测肺癌 的金标准仍是穿刺活检或支气管镜活检,均为有 创检查,而胸部 X 线､MRI､CT 等诊断方法准确率 偏低,容易与其他肺部疾病混淆｡ 因此肺癌的早 期诊断仍然困难重重｡

肿瘤标志物是肿瘤细胞在癌变､浸润和转移过程中分泌的活性物质〔7〕 ,其本质是肿瘤细胞自身存 在的反应,最早也是在 BALF 中发现｡ 因此,同血清 等其他体液相比,BALF 中检测肿瘤标志物具有高 灵敏度和特异性,可了解病变程度和性质,对肺癌诊 断有一定的指导意义｡ 目前,与肺癌相关的肿瘤标 志物有 CEA､SCC､CYFRA21-1､NSE 等,这些标志物 已广泛用于肺癌的早期诊断和预后评估,但目前还 未发现单一的生物标志物可准确地检测患肺癌的风 险,临床急需探索新的肿瘤标志物及选择优化联合 检测指标｡

CEA 属于较广谱肿瘤标志物,在呼吸系统肿 瘤､消化系统肿瘤中常异常表达〔8〕 ｡ CYFRA21-1 是 细胞角蛋白 19 片段,分布于细胞胞质中,当肿瘤细 胞溶解时,可导致该肿瘤标志物水平增高〔9〕 ｡ NSE 是糖酵解过程中的一种肝糖分解酶,主要存在于正 常神经和具有神经内分泌功能的细胞内,在神经母 细胞瘤和内分泌起源的肿瘤中高表达,如小细胞肺 癌〔10〕 ｡ SCC 是一种糖蛋白,主要存在肿瘤细胞胞质 中,对鳞状细胞类癌有较高诊断价值〔11〕 ｡ 高鹏宇 等〔12〕研究发现, 肺癌组患者血清 CEA､ SCC､ CYFRA21-1 水平均高于良性组和对照组,并且在不同 类型的肺癌患者表达水平均不同｡ 杨宗桥等〔13〕 研 究显示,肺癌组､良性组及对照组血清 CEA､NSE､ CYFRA21-1 水平差异有统计学意义(P

MFG-E8 是一种乳汁脂肪小球表面的亲脂性 糖蛋白,黏附在乳汁脂肪小球膜表面的镶嵌型外 周蛋白〔14〕 ,乳脂由分化的乳腺上皮细胞合成,然后 通过膜包被分泌到乳导管腔中,包被于脂滴表面 的这层膜称为乳脂肪球膜(MFGE),主要由糖蛋白､胆固醇､蛋白､磷脂构成｡ 乳脂肪球因子(MFG-E)8 又称 lactadherin 或 SEDl,是乳脂肪球膜(MFGE)中 的主要糖蛋白,可由乳腺上皮细胞､巨噬细胞､不 成熟树突状细胞分泌｡ 其生物学功能主要是清除 凋亡细胞,从机制上分析:MFG-E8 含有两个表皮 生长因子(EGF)样结构域(EGF1､EGF2)和两个凝 集素型 C 结构域(C1､C2) ｡ 其中 EGF2 有一个精 氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(RGD)的序列,可结合整 合素受体 αvβ3 和 αvβ5,而 C2 结构域也能结合在 含有磷脂酰丝氨酸( PS) 的膜上｡ MFG-E8 作为桥 接蛋白,通过 C2､EGF2 结构域连接凋亡细胞和巨 噬细胞膜上对应的受体,从而能增强吞噬细胞对 凋亡细胞的吞噬作用〔15,16〕 ｡ MFG-E8 是一种新型 的肿瘤标志物,在多种肿瘤组织中的表达水平高 于正常组织,如恶性黑色素瘤､乳腺癌､结直肠癌､ 子宫 内 膜 癌､ 肺 癌 等 恶 性 肿 瘤｡ 研 究 发 现〔17〕 , MFG-E8 在乳腺癌中的阳性率高于癌旁乳腺组织 中的阳 性 率,差 异 有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 01) , 且 MFG-E8 阳性表达与淋巴结转移､临床分期无明显 相关性(P>0. 05) ,而与组织学分级显著相关( r = 0. 593,P < 0. 000; r = 0. 417,P = 0. 002) ｡ 研究发 现〔18〕 ,结直肠癌( CRC) 组织 MFG-E8 高表达率明 显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P< 0. 05) ,MFG-E8 蛋白强阳性表达还与浸润深度≥ 1 / 2 肌层､肿瘤大小淋及巴结转移相关(P 0. 05) ｡ 在病理类型之间存在差 异,阳性表达率腺癌显著高于鳞癌( P< 0. 05) ,表 明 MFG-E8 参与了非小细胞肺癌的发生发展,提示 对非小细胞癌诊断有一定临床意义｡ 姚华宁等〔21〕 研究发现,MFG-E8 在肺腺癌组织中表达明显高于 癌旁组织(P结转移､TNM 分期无关｡ 本实验结果提示,MFGE8 可以作为一种肺癌诊断的指标,与以往 MFGE8 在肺癌组织中的结果类似｡

本研究结果表明,BALF 中 CEA､NSE､SCC､CYFRA21-1 及 MFG-E8 对肺癌患者均具有诊断价值, CEA､CYFRA21-1 及 MFG-E8 对肺癌的检测具有相 对较高的敏感度,NSE､CYFRA21-1 的诊断特异度相 对很高,如果 NSE､CYFRA21-1 高表达应值得临床 医生重视｡ 由于肿瘤标志物的灵敏度偏低,而且在 不同病理类型肺癌中的表达水平不同,容易造成漏 诊,多种肿瘤标志物联合检测可提高肺癌诊断价 值〔12〕 ｡ 本研究结果显示,MFG-E8+CFYRA21-1 联合 检测肺癌的诊断效能高于单独检测及其他两种二联 组合检测｡ MFG-E8､CYFRA21-1､CEA 三联检测可 进一步提高了肺癌的诊断敏感度和特异度,诊断效 能优于 MFG-E8､ CYFRA21-1 二联检测｡ 且 MFGE8､CYFRA21-1､CEA 三联检测是本实验检测肺癌 比较合适的联合指标,对肺癌的早期筛查有一定的 临床意义｡

综上,肺癌患者 BALF 中 MFG-E8 水平显著升 高,对于早期诊断肺癌有较好的敏感度和特异度,是 一种新型诊断肺癌的肿瘤标志物｡ MFG-E8､CYFRA21-1､CEA 三联检测可提高早期肺癌患者的诊 断敏感度､特异度,有较好的诊

参考文献:

7 叶枫,王路遥,洪卫,等. 基于 SE-CapsNet 的肺结节良恶性诊断研 究〔J〕. 中国生物医学工程学报,2021;40(1):71-80.

9 高洋,张启知,凌建华,等. 非小细胞肺癌患者血清 CYfra21-1､ CEA､NSE 手术前后的水平变化及意义〔 J〕. 检验医学与临床, 2018;15(2):213-6.

11 潘丹,杨晶金,杨蒋颖,等. 细胞周期蛋白 D1､鳞状细胞癌抗原和 白细胞介素 10 在Ⅱ期宫颈癌组织中的表达研究〔 J〕. 中国卫生 检验杂志,2019;29(1):78-80.

12 高鹏宇,杨桦,刘学文. 癌胚抗原,鳞状细胞癌抗原,细胞角质蛋 白 19 片段抗原 21-1 联合检测对肺癌的诊断价值〔 J〕. 癌症进 展,2022;20(14):1497-500,1504.

13 杨宗桥, 胡贡学, 樊海琴. 联合检测 CEA､ NSE､ CYFRA21-1､ CA72-4 在老年肺部恶性肿瘤中的临床价值〔 J〕. 中国老年学杂 志,2022;42(14):3434-6.

17 姚华宁,邹积骏,张家衡. 乳腺癌组织中 MFG-E8 和 ER 表达的 相关性及其临床意义〔 J〕. 临床与实验病理学杂志,2014;30 (5):488-90.

18 陈超,任俊,朱建华,等. 结直肠癌组织乳脂肪球表皮生长因子 8 蛋白表达与临床病理特征和患者生存率的关系〔 J〕. 微循环学 杂志,2017;27(3):38-42.

19 周静,戴丛伟,赵琼,等. 子宫内膜癌组织 MFG-E8 蛋白表达与临 床病理特征和患者生存率的关系〔 J〕. 中国妇幼保健,2020;35 (5):934-7. 20 李占波. MFG-E8 和 E-cadherin 在 NSCLC 中的表达及意义〔D〕 张家口:河北北方学院,2018.

21 姚华宁,延文,贾珉,等. 肺腺癌中 MFG-E8 的表达及其临床意义 〔J〕. 临床与实验病理学杂志,2022;38(10):1247-9.

文章来源:陈超,姚华宁,范叶,等.肺泡灌洗液中MFG-E8在肺癌中的诊断价值[J].中国老年学杂志,2025,45(01):37-41.