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LncRNA HEIH和miR-103在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

2024-01-11 80 上传者：管理员

摘要：目的分析长链非编码(lncRNA)RNA HEIH和微小RNA(miR)-103在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法选取行切除术的96例NSCLC患者，分析癌组织和癌旁组织lncRNA HEIH和miR-103表达水平，并探讨lncRNA HEIH和miR-103与患者临床病理特征关系，Kaplan-Meier分析患者生存率，Cox回归分析影响NSCLC患者预后因素。结果 NSCLC癌组织中lncRNA HEIH显著高于癌旁组织，miR-103表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。淋巴结转移、TMN分期与lncRNA-HEIH表达水平和miR-103表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier结果表明，NSCLC患者癌组织中lncRNA HEIH高表达患者生存率显著低于lncRNA HEIH低表达患者，miR-103低表达患者生存率显著低于miR-103高表达患者(P<0.05)。Cox回归结果表明，有淋巴结转移、TMN分期为Ⅲ期和Ⅳ期、lncRNA HEIH高表达和miR-103低表达是NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论在NSCLC癌组织中lncRNA HEIH显著上调和miR-103显著下调，且二者均可作为评估NSCLC患者预后的生物标志物。

关键词：
NSCLC
微小RNA
肺癌
长链非编码RNA
非小细胞肺癌
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肺癌是我国病死率较高的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占80%～85%,5年生存率仅为5%～10%[1]。然而，由于缺乏有效的肿瘤标志物，NSCLC的治疗效果仍然很差[2]。因此，深入探索NSCLC相关标志物，提高NSCLC治疗和诊断效率至关重要。

长链非编码RNA(lncRNA)不具备蛋白质编码功能，长度超过200个核苷酸。研究发现，lncRNA表达异常出现在多种癌症，在肿瘤调控中具有重要作用。诸多文献中报道，NSCLC中lncRNA的调控作用，而且不同lncRNA 的作用和机制也是多样化。Qu等[3]提出lncRNA ROR在NSCLC组织中显著过度表达，这是预后不良的重要因素。此外，研究提出，lncRNA 00680高表达是软组织肉瘤患者预后不良的独立危险因素[4]。微小RNA(miRNA)是一种内源性单链非编码RNA,长度为20～24个核苷酸。其不仅可以调节细胞的发育和分化，而且是参与多种肿瘤相关过程的潜在肿瘤分子标志物，是关键的基因调节因子，在NSCLC进展和预后中发挥重要作用。miR-216a可用于NSCLC的分类和分期，在晚期鳞癌和腺癌组织中表达显著下调[5]。miR-613可增强NSCLC细胞对顺铂敏感性，具有肿瘤抑制作用，可能是NSCLC的治疗靶点[6]。

研究发现，lncRNA HEIH 在多种癌症中表达升高，其表达紊乱通过不同潜在机制影响肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和癌细胞耐药性，而且HEIH的高表达与晚期肿瘤分期、肿瘤大小、总体生存率降低显著相关[7]。miR-103a-3p 通过靶向10号染色体上缺失的磷酸酶和紧张蛋白同源物(PTEN)和蛋白激酶B(AKT)信号通路促进NSCLC进展[8]。miR-103在NSCLC患者血清中表达下调，可能对NSCLC预后具有一定预测作用[9]。LncRNA HEIH和miR-103在NSCLC患者癌组织中表达异常，但其作用目前尚未阐明。因此，本研究通过对NSCLC患者癌组织及癌旁组织中lncRNA HEIH和miR-103的表达进行分析并探讨其临床意义。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月至2019年12月在青海大学附属医院进行癌组织切除性治疗的NSCLC患者96例，男平均年龄(57.43±11.56)岁；女平均年龄(61.47±12.33)岁。本研究经医院伦理委员会批准，患者及其家属签署知情同意书。纳入标准：(1)临床资料完整，而且样本保存完好；(2)经病理科确诊为原发性非小细胞肺癌；(3)术前未经放疗、化疗等治疗手段。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤；(2)患有影响生存时间的其他疾病；(3)患者病历资料不全，依从性差，不配合研究者。

1.2 指标检测

收集患者切除的癌组织及癌旁组织样本，置于液氮罐中冻存24 h后移至-80 ℃保存待用。利用RNA提取试剂盒提取总RNA,再按照逆转录试剂盒操作说明制备cDNA,以GAPDH为内参，实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)分析lncRNA HEIH和miR-103表达水平，引物序列分别为：LncRNA HEIH正向引物5′-CCGGTTTTCCAGTTCTTGCAC-3′,反向5′-GCCTCACAGGGAAACTTCATGC-3′;miR-103正向引物5′-CCCGCCAAGCCCTTACC-3′,反向5′-GCCGTCGGTGATGCTTTTTTGG-3′;GAPDH正向引物5′-GGAAGGACTCATGACCACAGTCC-3′,反向5′-TCGCTGTIGAAGTCAGAGGAGACC-3′。

1.3 统计学方法

采用SPSS25.0软件进行独立样本t检验、χ2检验，绘制Kaplan-Meier生存曲线，Cox回归分析预后影响因素。

2、结果

2.1 组织中lncRNA HEIH和miR-103相对表达水平比较

癌组织中lncRNA HEIH相对表达(1.79±0.11)显著高于癌旁组织(1.05±0.02;t=0.573,P=0.041),癌组织中miR-103表达水平(0.48±0.14)显著低于癌旁组织(1.03±0.03;t=5.702,P=0.001)。

2.2 癌组织lncRNA HEIH和miR-103表达水平与患者临床病理特征关系

将lncRNA HEIH 相对表达水平中位数(1.75±0.32)作为界限，低于中位数者为lncRNA HEIH低表达，高于中位数者为lncRNA HEIH高表达；miR-103中位表达水平为(0.54±0.08),低于miR-103中位数为低表达，高于miR-103中位数为高表达。根据性别、年龄、是否有吸烟史、有无淋巴结转移、TMN分期、病理类型、分化程度，lncRNA HEIH和miR-103在癌组织中的表达水平进行比较，结果表明淋巴结转移、TMN分期与lncRNA-HEIH表达水平和miR-103表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.3 lncRNA HEIH和miR-103表达水平与NSCLC患者预后的关系

随访2～24个月，主要为电话随访或复诊，随访总例数96例，其中失访9例(9.38%)。如图1所示，经绘制Kaplan-Meier生存曲线结果表明，NSCLC患者癌组织中lncRNA HEIH高表达患者生存率显著低于lncRNA HEIH低表达患者(χ2=6.048,P=0.034)。miR-103低表达患者生存率显著低于miR-103高表达患者(χ2=10.623,P=0.000)。提示lncRNA HEIH高表达者和miR-103高表达者远期生存率更低。

表1 癌组织lncRNA HEIH和miR-103高表达水平与临床病理特征关系[n(%)]

图1 lncRNA HEIH和miR-103不同表达水平患者总生存率

2.4 影响NSCLC患者预后单因素及多因素Cox回归

单因素Cox回归分析结果表明，有淋巴结转移、TMN分期Ⅲ期和Ⅳ期、lncRNA HEIH高表达和miR-103低表达是NSCLC患者预后的危险因素和独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 影响NSCLC患者预后单因素Cox回归分析

3、讨论

由于NSCLC生长和分裂缓慢，转移相对较晚，一旦确诊患者多已处于中晚期，缺乏早期诊断的生物标志物成为其治疗的最大挑战之一。然而，随着研究不断深入，越来越多研究证实lncRNA和miRNA影响NSCLC的发生和进展。

LncRNA在非编码RNA网络中发挥重要作用，并参与调节肿瘤相关基因的表达，从而调节多种肿瘤的发展。LncRNA Ⅰ型前胶原前肽(PINT)具有抑制A549和H1299细胞生长作用，并通过调控不同基因抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。另外，研究提出，lncRNA会促进NSCLC的进展。Liu等[10]通过海绵吸附miR-433-3p促进NSCLC细胞的侵袭性。LncRNA MBNL1-AS1通过下调miR-301b-3p抑制NSCLC进展[11]。本研究结果提示，lncRNA HEIH可能在NSCLC进展中具有促进作用。

除了lncRNA,miRNA也是肿瘤学的研究热点。诸多研究发现，miRNA通过靶向调控癌基因发挥促进或抑制NSCLC的作用。miR-103通过直接抑制人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(LATS)2促进肝细胞癌的转移和EMT进展[12]。Li等[13]研究提出，miR-103可能通过靶向Krüpple样转录因子(KLF)7促进NSCLC进展，这与本研究结果不同，因为Li等[13]研究内容主要从体外细胞试验着手进行分析，本研究对象为临床样本，因此，研究结果存在差异。研究发现，miR-103通过直接靶向程序性细胞死亡因子(PDCD)-10发挥NSCLC肿瘤抑制作用[14],这与本文研究结果一致。因此，推测miR-103可能在不同癌症进展过程中，具有促癌或抑癌作用。

肿瘤转移通常发生在癌症晚期，因此早期诊断对改善肿瘤预后极为重要[15]。目前常用癌症诊断工具包括内镜超声、无创成像和基于细针穿刺的细胞学检查。但每种检测方法都有其缺陷，超声对较小肿瘤检测的灵敏度较低，细针穿刺细胞学检测和非侵入性成像的应用受到广泛限制[16]。因此，需要进行常规和廉价筛查的无创或微创方法。LncRNA和miRNA很容易从体液和组织中分离提取进行检测。目前，已发现多种lncRNA 和miRNA可作为肿瘤诊断生物标志物。研究发现，miRNA标记(miR-200c、miR-424、miR-29c和miR-124)可以预测顺铂治疗效果，并作为NSCLC患者的预后因素[17]。lncRNA HEIH足够稳定，可以在癌症患者血清及癌组织中检测到[18]。本研究不足之处在于临床样本收集有限，随访时间短，且没有对lncRNA HEIH和miR-103表达对NSCLC进展的分子机制进行深入探究，后期研究仍需进一步扩大样本，结合基础研究，为NSCLC诊疗提供可靠生物靶点。

综上，在NSCLC癌组织中lncRNA HEIH显著上调和miR-103显著下调，且二者均可作为评估NSCLC患者预后的生物标志物。

基金资助:青海省自然科学基金项目(2016-ZJ-936Q);

文章来源:宋玉,刘昱君.LncRNA HEIH和miR-103在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义[J].中国老年学杂志,2024,44(01):21-24.