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论他达拉非原料药中溶剂甲胺、三乙胺残留量测量与气相色谱法的结合

2020-06-18 439 上传者：管理员

摘要：目的采用顶空气相色谱法测定他达拉非原料药中溶剂甲胺、三乙胺的残留量。方法采用程序升温法,色谱柱为KB-5-V毛细管柱,进样口温度200℃,氢火焰离子化检测器温度260℃,氮气为载气,流速3.46mL•min-1,分流比为5:1,顶空平衡温度80℃,平衡时间30min,进样体积1.0mL。结果色谱图中两组分的分离较好,峰型较好;在实验浓度范围内,浓度与峰面积具良好的线性关系,回收率为95%～105%,RSD<3%。结论所用方法简单、准确、灵敏,适用于他达拉非原料药中甲胺与三乙胺残留溶剂的检测。

关键词：
三乙胺
他达拉非
分析化学
残留溶剂
毛细管柱
气相色谱
氢火焰离子化检测器
甲胺
顶空
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他达拉非是一种环磷酸鸟苷特异性磷酸二酯酶抑制剂,起效迅速,且不受高脂饮食和酒精摄入影响,除勃起功能障碍(ED)适应症外,还获批用于治疗肺动脉高压和良性前列腺增生[1]。近年来,药品质量安全问题倍受关注,因此,对他达拉非原料药的质量控制有了更高的要求。该药物的合成工艺中使用了甲胺和三乙胺,因此有必要对其残留量进行控制。甲胺与三乙胺均为含氮有机物,极性较大,采用一般色谱柱对该类物质进行分析比较困难,文献中相似结构的物质多采用离子色谱法或胺类专用分析柱[2,3],同时测定二者的残留量难度较大。目前有关他达拉非原料药中甲胺和三乙胺残留溶剂的检测鲜有报道。现参考相关文献,使用KB-5-V(5%苯基二甲基聚硅氧烷柱)色谱柱,采用顶空气相色谱法检测他达拉非原料药中甲胺和三乙胺残留量的检测[4,5,6,7]。

1、实验部分

1.1仪器与试药

GC-2010Plus气相色谱仪(日本岛津);氢火焰离子化检测器(FID)、顶空进样器(北京中兴分析仪器新技术研究所)。他达拉非原料药(河北凯盛医药科技有限公司,批号:180101、180102、180103);甲胺、三乙胺、二甲基亚砜(DMSO)(天津市科密欧化学试剂有限公司)均为分析纯。

1.2方法与结果

1.2.1色谱条件

平衡温度为80℃,平衡时间30min,阀箱温度90℃,传输温度100℃,进样时间1min,进样体积1.0mL,采用KB-5-V(5%苯基二甲基聚硅氧烷柱)石英毛细管柱(30m×0.32mm,3μm),程序升温(起始柱温70℃、保持7min,然后以40℃·min-1升温至200℃、保持2min),进样口温度200℃,检测器温度260℃,分流比为5:1,柱流速3.46mL·min-1。

1.2.2溶液的配制

精密称取本品约0.5g,置顶空瓶中,加5mLDMSO使溶解,摇匀,即得供试品溶液。分别精密称取125mg甲胺水溶液(40.1%)、250mg三乙胺,置5mL量瓶中,加DMSO溶解并定容,即得混合对照品贮备液。分别精密量取上述混合对照贮备溶液0.1、0.25、0.5、0.75、1(限度水平对照品溶液)、1.25、1.5mL于100mL量瓶中,加DMSO定容,即得混合对照线性溶液。

1.2.3专属性试验

精密量取1μL限度水平混合对照品溶液,按“1.2.1”项色谱条件进样,记录色谱图。由图1可见:甲胺、三乙胺、DMSO的出峰时间分别为1.207、4.329、9.013min,各组分均能完全分离,峰型良好,表明KB-5-V色谱柱能够有效分离被测组分,且方法的专属性良好。

图1混合对照品溶液的色谱图

1.2.4精密度的试验

精密量取甲胺和三乙胺的混合对照品溶液(残留溶剂限度水平)6份,置顶空瓶中,压盖密封,预热30min,取顶部气体注入气相色谱仪,记录甲胺与三乙胺的峰面积,计算得甲胺、三乙胺峰面积的RSD分别为1.53%、2.09%,表明仪器的精密度较好。

1.2.5线性关系、检测限与定量限的考察

取“1.2.2”项配制的混合对照品溶液各5mL,分别置于顶空瓶中,压盖密封,分别进样,记录峰面积。以峰面积对浓度(μg·mL-1)进行线性回归,得甲胺和三乙胺的线性方程分别为:Y甲胺=2.6041×104X-4.0071×105(r=0.9996);Y三乙胺=5.5197×104X-1.3930×105(r=0.9997)。26.23～157.36μg·mL-1甲胺、50.72～760.80μg·mL-1三乙胺与峰面积的线性关系良好。取“1.2.2”项制备的甲胺与三乙胺贮备液,逐级稀释成不同浓度溶液,依法测定,甲胺的检测限为1.2μg·mL-1,定量限为2.4μg·mL-1;三乙胺的检测限为0.09μg·mL-1,定量限为0.5μg·mL-1。

1.2.6加样回收率试验

取“1.2.2”项下的甲胺和三乙胺贮备液,分别制成浓度相当于50%、75%、100%水平的混合对照溶液。称取他达拉非样品9份,每份0.5g,分别置于20mL顶空瓶中,每3份为1组,分成A、B、C3组,A组中加入5mL50%限度水平的混合对照品溶液,B组中加入5mL75%限度水平的混合对照品溶,C组中加入5mL100%限度水平的混合对照品溶液。按“1.2.1”项色谱条件进样测定,计算得甲胺的平均回收率为100.1%,RSD=2.6%;三乙胺的平均回收率为99.1%,RSD=1.5%,满足残留溶剂的检测要求。

1.2.7方法耐用性的考察

根据《中国药典》要求,考察了载气流速变化与柱温变化,以及不同气相色谱柱对测量结果的影响。由于样品中未检测到残留溶剂,故制备对应限度水平的样品,考察方法的耐用性。由表1可知:当载气流速和柱温有小范围变化时,不会对方法准确度产生明显影响,HP-5色谱柱甲胺与三乙胺出峰稍快,分离度不太理想,目标组分峰和溶剂峰的峰型与KB-5-V色谱柱谱图中对应峰峰型相比,拖尾因子较大,但能满足试验要求,因此,选用KB-5-V色谱柱合适。

表1耐用性考察的结果

1.2.8样品的含量测定

精密称取他达拉非样品3批,每批0.5g,置20mL顶空瓶中,精密加入5mLDMSO溶解,轧盖密封,按“1.2.1”色谱条件测量甲胺与三乙胺的残留量,结果3批样品中均未检出甲胺与三乙胺。

2、讨论

文中所用气相色谱法快速、简便,有较高的准确度和精密度,适用于他达拉非原料药中甲胺和三乙胺残留量的检测,对于保障他达拉非临床用药安全有重要意义。

参考文献：

[1]钱彭飞.他达拉飞的合成工艺及有关物质的研究[D].苏州:苏州大学硕士学位论文,2016:3.

[2]刘珊,陈贵斌,洪利娅.顶空进样气相色谱法测定克林霉素磷酸酯中三乙胺残留量[J].中国抗生素杂质,2014,39(3):217-219.

[3]李鹏,刘亚莉,景晓宁,等.顶空气相色谱法测定帕瑞昔布钠起始原料中残留溶剂[J].中南药学,2018,16(2):216-220.

[4]黄尚顺,王俊,陈远霞,等.单、二、三乙醇胺混合液的气相色谱分析[J].现代化工,2009,29(1):358-361.

[5]唐杨.顶空气相色谱法测定异维A酸原料药中的10种残留溶剂[J].华西药学杂志,2019,34(1):58-62.

[6]聂忠莉,毛玉萍,王晓玲,等.基于气相色谱法的帕瑞昔布钠中残留溶剂测定[J].成都大学学报:自然科学版,2018,37(3):260-263.