白背叶楤木（Aralia chinensis Linn.var.nuda Nakai），俗名大叶槐木、刺老苞，为五加科楤木属楤木（Aralia chinensis）的变种，生于森林或灌丛中，主要分布于云南、广西、四川、甘肃等地[1]，是珍贵的药食两用植物。其嫩茎叶作野菜凉拌食用，清凉可口，香味特别，具有清热解毒作用，其根、根皮、茎皮皆可入药，主要功效为镇痛、消炎、行气、祛风、利尿等[2-3]。白背叶楤木已被证实有明显的抗肿瘤活性和免疫活性，且可改善糖皮质激素诱发骨质疏松大鼠的骨量和骨质，以及胫骨骨折大鼠的骨质代谢[4-5]。已有前期研究发现白背叶楤木富含黄酮类、挥发油类、有机酸类、甾醇类等物质[6-7]。我们从白背叶楤木乙酸乙酯萃取部位中分离得到12个化合物，其中，化合物1～10为首次从楤木属植物中分离得到，包括有机酸及其衍生物、生物碱类和单萜类。

1、材料

IKA RV10旋转蒸发仪（艾卡仪器设备有限公司），Agilent 1260 infinity液相色谱仪（Agilent公司），C18色谱柱（5μm,250 mm×10 mm,Thermo公司），Bruker Avance核磁共振仪（Bruker公司），Q-TOF(ESI）高分辨质谱仪（Waters公司），电子分析天平，RP-C18色谱材料（EMD Millipore公司），硅胶（100～200目、200～300目），薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂），Sephadex LH-20葡聚糖凝胶（GE Healthcare公司）。甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚等试剂均为分析纯。

白背叶楤木芽苞采集于云南省怒江州，经云南中医药大学云南省南药可持续利用研究重点实验室李艳平教授鉴定为楤木属植物白背叶楤木Aralia chinensis L.var.nuda Nakai的干燥芽苞，凭证标本号201904SM。

2、提取与分离

根据文献[6]所描述的方法对白背叶楤木进行提取与萃取。取乙酸乙酯部位浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚比丙酮（100∶0,100∶1,50∶1,20∶1,10∶1,8∶1,6∶1,4∶1,2∶1,0∶100）洗脱，获得10个流分Fr.A～J。

Fr.A (31.6 g）经RP-18反相色谱柱以甲醇-水（30%～100%）梯度洗脱，薄层色谱板检测后合并获得4个亚流分Fr.1～4，取Fr.1进行硅胶柱层析（200～300目），以石油醚-乙酸乙酯（200∶1,100∶1,50∶1,30∶1,10∶1,7∶3,6∶4）梯度洗脱，经薄层色谱检测后合并获得3个亚流分Fr.1a～1c。取Fr.1b经RP-18反相色谱柱以甲醇-水（9∶1）洗脱后得到1(2.5 mg）和4(8.3 mg）。Fr.4经半制备HPLC以乙腈-水（75∶15）等度洗脱后得到2(11.1 mg,254 nm,tR=12.1 min）。

Fr.C(27.2 g）使用MCI色谱柱以甲醇-水（20∶80,40∶60,60∶40,80∶20,100∶0）梯度洗脱，薄层色谱检测后合并获得5个亚流分Fr.1～5。Fr.3以甲醇-水（10%～100%）经MCI色谱柱梯度洗脱后合并获得4个亚流分Fr.3a～3d。Fr.3b使用半制备HPLC(29%乙腈）洗脱，得到化合物5 (4.1 mg,210 nm,tR=14.9min）。Fr.5经RP-18色谱柱梯度洗脱，以甲醇-水（10∶90,20∶80,30∶70,40∶60,50∶50,60∶40）为条件，薄层色谱检测后合并得到3个亚流分Fr.5a～5c。Fr.5b经半制备HPLC(16%乙腈）洗脱得到化合物7(2.0 mg,210 nm,tR=11.4 min）和6(3.2 mg,210 nm,tR=14.3 min）。Fr.5c经半制备HPLC(14%乙腈）洗脱后得到化合物10(2.2 mg,254 nm,tR=9.0 min）。

Fr.D(79.8 g）经硅胶色谱柱层析，以二氯甲烷-甲醇（50∶1,40∶1,18∶1,13∶1,8∶1,5∶1,3∶1）洗脱，薄层色谱板检测后合并得到5个亚流分Fr.1～5,Fr.1经硅胶色谱柱，以石油醚-乙酸乙酯（600∶1,400∶1,200∶1,50∶1,8∶1,0∶1）梯度洗脱，得到化合物3(6.0mg）和12(9.8 mg）。Fr.2经RP-18反相色谱柱以甲醇-水（10∶90,20∶80,30∶70,40∶60,50∶50）梯度洗脱，薄层检测后合并得3个亚流分Fr.2a～2c。Fr.2b经半制备HPLC(22%乙腈）洗脱得到化合物11(3.4 mg,254 nm,tR=18.6 min）。Fr.2c用甲醇经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱洗脱后得到化合物8(76.7 mg）和9(13.8 mg）。

3、结构鉴定

化合物1：淡黄色油状，ESI-MS m/z:389([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C24H38O4。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:7.72(2H,dd,J=5.7,3.3Hz,H-3,6),7.63 (2H,dd,J=5.7,3.3 Hz,H-4,5),4.18～4.25(4H,m,H-1',1"),1.69(2H,m,H-2',2"),1.28～1.32(10H,m,H-3'～5',3"～5"),0.89～0.96(18H,m,6×CH3);13C NMR(125 MHz,CD3OD)δ:169.4(2×C=O),133.6(C-1,2),132.4(C-4,5),129.9(C-3,6),69.1 (C-1',1"),40.2 (C-2',2"),31.6 (2',2"-CH3),30.1(C-3',3"),25.0(C-4',4"),24.0(C-5',5"),14.4(C-6',6"),11.4(5',5"-CH3）。经查阅文献[8]对比数据，鉴定化合物1为邻苯二甲酸（2,5-二甲基己基）二酯。

化合物2：白色粉末，ESI-MS m/z:343([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C19H36O5。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ:5.71(1H,dd,J=15.6,5.4 Hz,H-9),5.65 (1H,dd,J=15.6,5.4 Hz,H-10),4.04(1H,dd,J=11.0,6.2 Hz,H-8),3.90(1H,t,J=5.6Hz,H-11),3.64(3H,s,1'-CH3),3.40(1H,m,H-12),2.31(2H,t,J=7.5 Hz,H-2),1.60(2H,m,H-3),1.39～1.58 (6H,m,H-13～15),1.28～1.37 (12H,m,H-4～7,16～17),0.90 (3H,t,J=6.8 Hz,18-CH3);13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:176.0(C-1),136.5(C-9),131.1(C-10),76.5(C-11),75.8(C-12),73.0(C-8),52.0(OCH3),38.3 (C-7),34.8 (C-2),33.5 (C-13),33.1(C-16),30.5(C-15),30.4(C-4),30.1(C-5),26.6(C-14),26.5(C-6),26.0(C-3),23.7(C-17),14.4(C-18）。经查阅文献[9]对比数据，鉴定化合物2为（9E)-8,11,12-trihydroxyoctadecenoicacid methyl ester。

化合物3：无色油状，ESI-MS m/z:343([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C19H36O5。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ:5.70(1H,dd,J=15.6,5.3Hz,H-11),5.66 (1H,dd,J=15.6,5.3 Hz,H-12),4.05(1H,dt,J=6.2,5.3 Hz,H-13),3.90 (1H,t,J=5.7 Hz,H-10),3.65 (3H,s,OCH3),3.40 (1H,m,H-9),2.31(2H,t,J=7.5 Hz,H-2),1.57～1.65(2H,m,H-3),1.46～1.55(4H,m,H-8,14),1.28～1.38(14H,m,H-4～7,15～17),0.90 (3H,t,J=6.6 Hz,18-CH3);13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:176.0(C-1),136.5(C-11),131.1(C-12),76.5(C-10),75.8(C-9),73.0(C-13),52.0(OCH3),38.3(C-14),34.8(C-2),33.5(C-8),33.1(C-16),30.5(C-6),30.4(C-5),30.1(C-4),26.6(C-7),26.5(C-15),26.0(C-3),23.7(C-17),14.5(C-18）。经查阅文献[10]对比数据，鉴定化合物3为methyl(9S,10R,11E,13R)-9,10,13-trihydroxyoctadec-11-enoate。

化合物4：无色油状，ESI-MS m/z:325([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C18H30O5。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:3.65(3H,s,OCH3),2.31(2H,t,J=7.4 Hz,H-14),1.93 (3H,d,J=1.2 Hz,17-CH3),1.93(1H,m,H-5a),1.78(3H,d,J=1.2 Hz,16-CH3),1.78(1H,m,H-5b),1.56(2H,m,H-13),1.28～1.32(12H,m,H-7～12),1.22(1H,m,H-6a),1.15(1H,m,H-6b);13C NMR (125 MHz,CD3OD)δ:176.1(C-15),174.6(C-1),160.4(C-2),125.7(C-3),109.2(C-4),52.0(OCH3),36.9(C-5),34.8(C-14),30.2～30.5(C-7～12),26.0(C-13),24.1(C-6),10.8(C-17),8.2(C-16）。经查阅文献[11]对比数据，鉴定化合物4为capillasterolide。

化合物5：白色粉末，ESI-MS m/z:365([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C26H54。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:1.25(48H,m,H-2～25),0.88(6H,d,J=2.4 Hz,1,26-CH3);13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:32.1 (C-3,24),29.9 (C-6,21),29.8(C-5,22),29.5(C-4,23),22.9(C-2,25),14.3(C-1,26）。经查阅文献[12]对比数据，鉴定化合物5为二十六烷。

化合物6：无色针晶（甲醇），ESI-MS m/z:195([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C11H16O3。1H NMR(600 MHz,CD3OD)δ:5.75(1H,s,H-7),4.21(1H,m,H-3),2.42(1H,dt,J=13.6,2.6 Hz,H-4a),1.99(1H,dt,J=14.4,2.7 Hz,H-2a),1.76(3H,s,11-CH3),1.74 (1H,dd,J=13.6,2.6 Hz,H-4b),1.53(1H,dd,J=14.4,2.7 Hz,H-2b),1.46 (3H,s,9-CH3),1.27(3H,s,10-CH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δ:185.7(C-8),174.5(C-6),113.3(C-7),89.0(C-5),67.3(C-3),48.0(C-2),46.4(C-4),37.2(C-1),30.8(C-10),27.4(C-11),27.0(C-9）。经查阅文献[13]对比数据，鉴定化合物6为（-）-loliolide。

化合物7：无色油状，ESI-MS m/z:196([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C9H11NO4。1H NMR (500 MHz,CD3OD)δ:3.66(3H,s,OCH3),2.67(2H,m,H-2'),2.61 (2H,m,H-1'),1.95(3H,s,4-CH3);13C NMR(125 MHz,CD3OD)δ:174.5(C-3'),174.4(C-5),174.2(C-2),140.6(C-4),140.3(C-3),52.3(OCH3),32.7(C-2'),20.1(C-1'),8.4(C-4）。经查阅文献[14]对比数据，鉴定化合物7为methyl hematinate。

化合物8：白色固体，ESI-MS m/z:136([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C8H11NO。1H NMR(600 MHz,CD3OD)δ:7.03(2H,d,J=8.5 Hz,H-2,6),6.68(2H,d,J=8.5 Hz,H-3,5),2.80(2H,t,J=8.0 Hz,H-8),2.46 (2H,t,J=8.0 Hz,H-7);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δ:156.5(C-4),133.9(C-1),130.2(C-2,6),116.1(C-3,5),39.9(C-8),32.3(C-7）。经查阅文献[15]对比数据，鉴定化合物8为对羟基苯乙胺。

化合物9：黄色固体，ESI-MS m/z:220([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C12H15NO3。1H NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.28 (2H,t,J=7.5 Hz,H-3,5),7.22(1H,m,H-4),7.21(2H,d,J=7.5 Hz,H-2,6),4.65 (1H,dd,J=8.9,5.8 Hz,H-8),3.68(3H,s,9-OCH3),3.14 (1H,dd,J=13.8,5.7 Hz,H-7a),2.94(1H,dd,J=13.8,8.9 Hz,H-7b),1.90(3H,s,11-CH3);13C NMR (150 MHz,CD3OD)δ:173.6 (C-9),173.2(C-10),138.2(C-1),130.2(C-3,5),129.5(C-2,6),127.9(C-4),55.4(C-8),52.7(OCH3),38.4(C-7),22.2(C-11）。经查阅文献[16]对比数据，鉴定化合物9为（S)-methyl 2-acetamido-3-phenylpropanoate。

化合物10：白色粉末，ESI-MS m/z:167([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C8H8O4。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ:7.56(1H,s,H-2),7.54(1H,s,H-6),6.83 (1H,d,J=8.0 Hz,H-5),3.89(3H,s,OCH3);13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:175.8(C-7),152.4(C-4),148.6(C-3),125.2(C-6),115.8(C-2),115.8(C-1),113.8(C-5),56.4(OCH3）。经查阅文献[17]对比数据，鉴定化合物10为异香草酸。

化合物11：无色针晶（甲醇），ESI-MS m/z:167([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C8H8O4。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:7.56(1H,s,H-2),7.54 (1H,d,J=8.7 Hz,H-6),6.84 (1H,d,J=8.7Hz,H-5),3.89(3H,s,OCH3);13C NMR(125 MHz,CD3OD)δ:170.4(C-7),152.5(C-3),148.6(C-4),125.2(C-6),123.3(C-1),115.8(C-5),113.8(C-2),56.4(OCH3）。经查阅文献[18]对比数据，鉴定化合物11为vanillic acid。

化合物12：无色针晶（甲醇），ESI-MS m/z:137([M-H]-），结合13C NMR和DEPT谱图确定分子式为C7H6O3。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:7.87(2H,d,J=8.7 Hz,H-2,6),6.81 (2H,d,J=8.7 Hz,H-3,5);13C NMR(125 MHz,CD3OD)δ:170.4(C-7),163.2(C-4),133.0(C-2,6),123.1(C-1),116.0(C-3,5）。经查阅文献[18]对比数据，鉴定化合物12为p-hydroxybenzoic acid。

图1化合物1～12的化学结构

4、讨论

本实验对白背叶楤木的乙酸乙酯萃取部位进行了化学成分研究，分离得到12个化合物，化合物1～11为首次从该植物中分离得到，化合物1～10均首次从该属植物中分离得到，包括有机酸及其衍生物、生物碱类和单萜类。研究表明，化合物2能抑制核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB）的活性和一氧化氮的释放[19]。化合物6在10μmol·L-1的浓度下对NF-κB的抑制率为（62.31±4.8）%，具有潜在的抗炎活性[11]。化合物9对乙酰胆碱酯酶活性有抑制作用，IC50（半抑制浓度）为18.6±2.8μmol·L-1[16]。化合物10在40μmol·L-1时对酪氨酸酶活性表现出显著的抑制作用[20]，且与万古霉素合用可提高万古霉素对感染金葡菌致死性肺炎小鼠的治疗效果[21]。化合物11能通过下调ST2L受体和瞬时受体电位通道蛋白1的表达，抑制结肠组织细胞凋亡，从而改善电离辐射旁效应诱发的结肠损伤[22]。此外，楤木属植物在化学成分方面已报道了数百种单体化合物，如三萜皂苷类、黄酮类、香豆素类、木脂素类、萜类等[23]，部分化合物显示出镇痛抗炎、调节血脂、保肝护肝、抗肿瘤等多种药理活性[24-28]。本研究为阐明白背叶楤木的药效物质基础提供了科学依据，并为进一步开发利用该药食两用资源打下坚实基础。

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基金资助:国家自然科学基金项目(82260832,81860760);云南省中医联合专项(202101AZ070001-159,202001AZ070001-044);云南省重大科技专项(202002AA100007);

文章来源:李绍花,陈宇凡,钱海珊,等.白背叶楤木乙酸乙酯部位化学成分研究[J].云南中医药大学学报,2024,47(04):61-65.