首页 > 论文范文 > 农业科技论文 > 畜牧综合论文 > 畜牧学论文 > 杜泊羊冷冻精液活率受不同pH值稀释液的影响研究

杜泊羊冷冻精液活率受不同pH值稀释液的影响研究

2020-09-29 265 上传者：管理员

摘要：为探索杜泊羊冷冻精液稀释液的最佳pH值，选取8只杜泊羊制作细管冻精，将冻精稀释液的pH值调整为7.5、7.2、7.0、6.8、6.5五个梯度，通过平衡、冷冻、解冻3个过程对杜泊羊精子1次平衡后活率、2次平衡后活率、解冻后活率进行比较。结果表明：在1次平衡时，随着pH值的降低，精子活率逐渐升高，pH值为6.5时1次平衡后活率最高，达（65.61±1.95)%;2次平衡时，随着pH值的上升，精子活率逐渐升高，pH值为7.5时活率最高，达（60.61±1.95)%；稀释液pH值为7.5时，精子解冻后活率最高，达（40.00±6.58）%，且极显著高于pH值为7.0、6.8、6.5的试验组（P<0.01）。说明不同pH值稀释液对杜泊羊冷冻精液的活率影响较大，在不同的平衡阶段稀释液的pH值应有所调整。

关键词：
pH值
冻精
动物繁殖
平衡
杜泊羊
活率
稀释液
加入收藏

杜泊羊原产于南非，是用南非土种绵羊黑头波斯母羊作为母本，引进英国有角陶赛特羊作为父本杂交培育而成，其具有适应性强、早期生长发育快、遗传性稳定、胴体质量好等特点[1]，尤其是突出的产肉性能是我国目前引进的和国产的肉羊品种不可比拟的[2]。羊冷冻精液技术是一种高新畜品种改良技术，因其能高效利用优秀种公羊、节省饲养管理费用而得以发展。但由于绵羊精子的耐冻性差、冻后活力低、受胎率低等因素[3]，细管冻精达不到国家标准，制约了绵羊冻精的使用。我国绵羊冻精技术研究开始于20世纪70年代[4],截止目前，已对多种绵羊的冷冻精液技术进行了研究，但杜泊羊冷冻精液制作技术国内报道较少，相关研究也较为缺乏。随着市场对羊肉需求的增长，杜泊羊又具有出色的产肉性能，开展对杜泊羊冷冻精液技术的研究具有现实意义。

羊冻精制作成败的关键在于稀释液的配方与制作工艺，稀释液作为精子的保护剂显得尤为重要。精液pH值与精细胞的渗透压、酶系统、电离度有密切关联[5],pH值的高低又直接影响着精子解冻后的活率，因此，本试验将研究不同pH值稀释液对杜泊羊冷冻精液活率的影响。

1、材料

1.1试验时间与地点

试验于2017年4月10日至5月5日在新疆阿克苏地区天山肉用种羊基地进行。

1.2试验动物

选择8只年龄为3～4岁的杜泊种公羊，体重100～120kg。羊体态中等，生殖系统健康无疾病，性欲旺盛。试验公羊采取舍饲饲养管理方法，全年均在圈舍内。试验前经过1个月的补饲、运动、采精调教等准备工作。

1.3药品

葡萄糖≥99.5%分析纯、柠檬酸钠99.0%分析纯、柠檬酸99.0%分析纯，购自天津市盛奥化学试剂有限公司；甘油≥99.0%分析纯，购自天津永晟精细化工有限公司；卵黄，从蛋黄中抽取；CASSOU吸管0.25mL;CAS-SOU封口粉，等等。

1.4主要仪器

半自动精液分装机（KHFlabopart），酸度计（PHS-25），购自上海仪电科学仪器股份有限公司；生物显微镜（MoticXPS-BM-ZCA），购自MOTIC集团中国有限公司。

2、方法

2.1试验设计

本试验设5个试验组，相互对照。试验组分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、V组，采用葡萄糖、柠檬酸钠、卵黄、柠檬酸、甘油、双蒸水等为材料。试验采用两次平衡法，稀释液分为Ⅰ液与Ⅱ液，Ⅰ液为基础液，Ⅱ液为加入冷冻保护剂的Ⅰ液，甘油作为冷冻保护剂，在本研究中添加甘油的浓度为6%。以下为5个试验组的Ⅰ液配方及pH值。

2.2采精

用假阴道法采精，精液颜色白色、略带腥味、镜检活力大于0.7、密度为中等以上的精液作为试验对象。

表1试验处理方案

2.3精液处理

采集8只杜泊羊的精液，4只为一组，制成2组混精。将每组混精等量放入5个称量瓶中，分别按1∶3的比例加入5组温度为37℃的Ⅰ液。加入Ⅰ液后的混精在常温（25℃）下放置30min后，用毛巾包裹放入温度为4℃的冰箱平衡1.5h。平衡后蘸取少量精液检测活率，检测完毕后按照与Ⅰ液添加量1∶1的比例添加Ⅱ液（4℃），随后放入4℃的冰箱平衡3h,2次平衡后检测活率。

2.4细管冷冻

用4℃的细管吸取精液后，放入装有12L液氮的保温箱（长×宽×高：50cm×22cm×30cm）内熏蒸4min，细管距离液氮面2cm，熏蒸完后迅速将细管放入液氮。

2.5活率检测及计算方法

将冻精放入温度为42℃的水浴锅中解冻15s后，将细管两头与中间剪断，分别滴3滴待测精液于载玻片，加上盖玻片，置于400倍显微镜下检查，统计多个视野下直线前进运动精子与非直线运动精子的比例，求出活率。每个试验组抽取15支细管检测活率。

精子活率（%）=直线前进运动精子数/总精子数×100%

2.6统计学分析

采用SPSS18.0软件对数据进行统计分析，试验数据以平均值±标准误表示，采用方差分析和LSD多重比较分析，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。

3、结果与分析

由表2可知，随着稀释液pH值的降低，1次平衡后精子的活率逐渐上升，Ⅰ组活率显著低于Ⅳ组与Ⅴ组（P<0.05）。2次平衡后精子活率随着pH值的下降而下降，且Ⅰ组活率显著低于Ⅳ组与Ⅴ组（P<0.05）。精子解冻后活率总体随着pH值的降低而降低，Ⅳ组最低，Ⅰ组最高，达40%，且极显著高于Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组（P<0.01），Ⅱ组精子冻后活率亦极显著高于Ⅳ组和Ⅴ组（P<0.01）。

表2不同pH值对杜泊羊冻精活率的影响

4、讨论与结论

本试验通过调节稀释液的pH值对杜泊羊精液进行冷冻，发现不同pH值对精子的活率影响较大。从统计结果来看，精液冷冻过后，pH值为7.5与7.2的试验组解冻活率较高，建议在制作冻精时稀释液的pH值应控制在7.2～7.5之间。此结论与祝发明等[6]对波尔山羊冻精的研究结果相似，最佳pH值为7.2。但与Buckrell[7]建议的羊冻精pH保持在6.8左右有所不同。目前，国内对羊冷冻精液pH值的相关研究较少。马英玉等[8]建议羊冻精稀释液pH值应控制在6.8～7.2之间；丁瑜[9]认为pH值过高会影响冻精的保存。

其次，在本试验中发现2次平衡过程中精子的活率出现显著差异，1次平衡时，随着pH值的降低精子活率逐渐升高；2次平衡时，随着pH值的升高精子活率逐渐升高。此发现打破了对平衡阶段的pH值进行线性调整的模式，也许在冻精平衡过程中应当对pH值进行分段非线性调整，1次平衡时稀释液pH值应控制在6.5;2次平衡时应调整为7.5。

影响杜泊羊冷冻精液活率的因素较多，也较为复杂。一般与杜泊羊的营养状况、身体机能、遗传因素等有关，但稀释液的配方与制作工艺是冻精成功与否的关键。在稀释液的配方中主要考虑pH值、渗透压以及冷冻保护剂的选择，不同pH值对精子冻后活率的影响尤为显著。经过此次试验，对确定杜泊羊冷冻精液稀释液的最佳pH值有了一定探索，同时提出了在2次平衡过程中应当根据不同平衡阶段调整不同稀释液pH值的理论。但此次试验仅对杜泊羊冷冻精液稀释液的pH值进行了初步探索，尚未对2个平衡阶段进行分步试验，在以后的试验中将会进一步探索。

综上所述，说明不同pH值稀释液对杜泊羊冷冻精液的活率影响较大，在不同的平衡阶段稀释液pH值应有所调整。

参考文献：

[1]赵敏梦,杨在宾,杨维仁,等.杜泊羊生长期能量的代谢规律和需要量[J].动物营养学报,2013,25(6):1243-1250.

[2]赵有璋.杜泊羊及其在我国初步利用效果[J].现代畜牧兽医,2011(1):21-23.

[3]保国俊,王珂,张建军,等.不同冷冻方法对甘肃高山细毛羊精液冷冻效果的研究[J].畜牧兽医杂志,2014,33(5):1-3.

[4]胡大君.羊冷冻精液的制作与应用技术研究[J].当代畜牧,2008(1):37-38.

[5]王家振.关于家畜精液冷冻的几个技术问题[J].辽宁畜牧兽医,1987(6):13-14.

[6]祝发明,杜保华,曹斌云,等.波尔山羊冷冻精液稀释液配方研究[J].中国畜牧杂志,2005,41(12):18-20.

[8]马玉英,贺严峰.萨福克肉羊精液冷冻保存技术浅析[J].中国畜禽种业,2017(1):66-67.

[9]丁瑜.优质肉羊精液冷冻稀释液的研究[D].长春:吉林农业大学,2005.

郑银伟,买尔哈巴·艾合麦提,耿娟,张西顺,艾合麦提·吐尔逊,张富全,杨万超.不同pH值稀释液对杜泊羊冷冻精液活率的影响[J].中国草食动物科学,2020,40(05):81-83.

基金:国家绒毛用羊产业技术建设专项(SARS-40);科技兴阿项目“湖羊高频繁殖技术研究”