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肾结石患者血清中褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平的测定与意义

2020-08-12 349 上传者：管理员

摘要：目的：通过检测肾结石患者血清中褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平，探讨褪黑素及其代谢产物在肾结石形成过程中的意义。方法：选取2018年5-10月在广西壮族自治区钦州市第二人民医院泌尿外科就诊的肾结石患者32例为研究组，另选取同期来该院体检合格的健康者30例为对照组，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测肾结石患者血清中褪黑素水平及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平，并与对照组比较，分析2组间褪黑素及其代谢产物的水平差异。结果：研究组血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平分别为（50.35±5.62）、（41.23±4.14)pg/mL，对照组血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平分别为（59.23±6.13）、（47.26±5.35)pg/mL,2组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：肾结石患者体内低水平褪黑素可能是肾结石形成的危险因素。

关键词：
氧化应激
肾结石
自噬
褪黑素
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肾结石是泌尿外科的常见病和多发病，虽然近年来随着微创手术设备的更新及新技术的引入，临床治疗肾结石技术已较前大有进步，但肾结石的形成机制至今仍未明确，临床缺少全面预防肾结石形成的有效措施，间接导致了术后肾结石的高复发率。因此，尽快阐明肾结石的发病机制是泌尿外科工作者急需解决的问题。目前，氧化应激-炎性反应-自噬-肾小管上皮细胞损伤体系成为研究肾结石发病机制的热点[1]。最近有研究发现，褪黑素与肾结石的形成密切相关[2]。褪黑素是目前已知的最为强效的氧自由基清除剂，在抑制或调节体内氧化应激、炎性反应、细胞自噬等过程中发挥重要作用[3,4]。既然肾结石与氧化应激、炎性反应及细胞自噬关系密切，而褪黑素又具有抗氧化应激、抗炎、抑制自噬等作用，为了明确肾结石患者体内褪黑素水平与健康者体内有无区别，肾结石的形成与褪黑素之间的联系，笔者研究了肾结石患者血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平，以期了解褪黑素及其代谢产物与肾结石的关系。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2018年5-10月在广西壮族自治区钦州市第二人民医院泌尿外科就诊的32例经腹部CT证实为肾结石的患者为研究组，且均符合以下纳入标准：（1）无心脑血管疾病、肾病及糖尿病；（2）无急慢性炎症疾病；（3）入院前未服用褪黑素；（4）近期未服用免疫抑制剂、抗菌药物等；（5）非孕妇及哺乳期；（6）无烟酒等不良嗜好。其中左肾结石15例，右肾结石17例；男16例，女16例；年龄23～41岁，平均（30.12±2.35）岁。另选取同期在广西壮族自治区钦州市第二人民医院体检合格的健康者30例为对照组，其中男15例，女15例；年龄22～38岁，平均（30.52±1.36）岁。2组研究对象性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有均衡可比性。

1.2采集方法

血液标本采集时间均为患者就诊当日上午8:30，从肘正中采集5mL静脉血后立即4℃3000r/min离心15min，提取上清置于-80℃保存备用，尿液标本均为晨尿，与血液标本同时收集，采集后置于-80℃保存备用。

1.3标本测定

取标本，室温下解冻后4℃13000r/min离心15min，取上清液100μL，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测标本血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平，所有标本均在同一天进行检测。血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素ELISA试剂盒分别购自武汉华美生物技术公司及IBLGMBH公司，所有操作均严格按试剂盒说明书进行。

1.4统计学处理

采用SPSS20.0软件进行统计学分析，血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平等计量资料以表示，组间比较采用独立样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

研究组血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平均较对照组低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表12组血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平测定结果

3、讨论

研究认为，肾结石形成过程大致分为4步：晶体的附着、聚集、成核和成长。即在尿液过饱和的环境下，晶体黏附于受损的肾小管上皮细胞上，然后尿液中新的结晶再聚集于最先黏附在受损细胞膜表面的晶体上，发生异质成核或同质成核，晶体逐渐生长，最终形成结石。因此，作为肾结石形成的第1站，晶体黏附于细胞膜表面显得尤为重要，而晶体黏附于细胞膜表面的首要条件是肾小管上皮细胞损伤[5]。

晶体与肾小管上皮细胞接触可发生氧化应激反应，然后产生氧自由基，氧自由基通过催化肾小管上皮细胞膜表面的氨基磷脂移位酶，该酶被催化后可以使肾小管上皮细胞膜表面的磷脂胆碱发生外翻，受损细胞膜表面磷脂选择性减弱，而肾小管上皮细胞膜与尿液中晶体的黏附性增强，为晶体进一步聚集、成核甚至生长提供了可能[6]。

晶体与肾小管上皮细胞接触发生的炎性反应亦可导致细胞损伤，继而激活细胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶，促使氧自由基大量生成及释放，氧自由基可以迅速激活受损细胞内的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3及核因子-κB通路[7]，继而产生及释放大量的炎症因子，炎症因子在肾脏内形成级联放大效应，进一步加重肾小管上皮细胞的损伤，为尿液中的晶体提供更多膜表面结合位点，为肾结石的形成创造有利条件。

晶体与肾小管上皮细胞接触发生的自噬反应亦可导致细胞损伤，提示细胞自噬的激活系晶胞反应中氧化应激和炎症介导发生。最新研究表明，草酸钙刺激肾小管上皮细胞产生的活性氧族可介导肾小管上皮细胞自噬过度激活，继而加剧细胞炎症因子的释放，最终加重肾脏损伤，增加肾内成石风险，而使用自噬抑制剂不仅能有效降低肾小管上皮细胞自噬水平，还可减轻肾脏损伤，降低肾脏成石风险[8]。

褪黑素主要由松果体、视网膜及皮肤产生，其亦广泛存在于人体的许多组织内，如肾脏、肾上腺、血小板、内皮细胞等[9]。褪黑素的分泌具有昼夜节律性，夜间较日间分泌多，夜间2:00至4:00分泌达最高峰，中午分泌量至最低[10]。褪黑素具有脂溶性，在微粒体羟化酶的作用下生成6-羟基褪黑素，硫酸根再与6-羟基褪黑素结合形成6-羟基硫酸褪黑素，最后经尿液排出[11]。现已发现褪黑素在抑制或调节体内的氧化应激、炎症、细胞自噬等反应中发挥重要作用[3,4]。

本研究留取标本的时间均为患者就诊当日上午8:30，排除了褪黑素分泌昼夜节律性的影响，结果显示，肾结石患者血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平均较对照组低，差异有统计学意义（P<0.05），推测肾结石患者体内血清褪黑素水平较健康者低，相应的体内代谢产物尿液6-羟基硫酸褪黑素水平亦较健康者低，导致肾脏细胞缺少褪黑素保护，尿液中的晶体与肾小管上皮细胞相对健康者更容易发生氧化应激、炎性反应、细胞自噬等反应，继而介导肾脏细胞损伤，利于肾脏内结石形成。因此，笔者认为肾结石患者体内低水平的褪黑素可能是肾结石形成的危险因素。

褪黑素可以通过作用于氧化应激、炎性反应、细胞自噬等机制来阻碍肾结石形成，但褪黑素是否还可以通过其他作用机制来防止肾结石的发生，监测血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素水平是否能成为预测肾结石发生的新临床指标，针对褪黑素进行有效干预是否能成为预防肾结石新的靶点。由于本研究的局限性，以上疑问需要在今后的研究中进一步深入探讨。

参考文献：

[1]刘鑫,陈洁,粟宏伟.氧自由基,炎性反应与肾结石形成的研究进展[J].山东医药,2016,56(33):111-113.

[10]宋亚男.褪黑素昼夜节律紊乱对围术期认知功能障碍的研究进展[J].中国微创外科杂志,2019,19(6):556-558.

周吾溪,陈奎,王海荣,戚剑烽,魏波,李超文.肾结石患者血清褪黑素及尿液6-羟基硫酸褪黑素的测定与意义[J].检验医学与临床,2020,17(15):2206-2208.