紫藤Wisteriasinensis(Sims)Sweet是豆科紫藤属植物，又名藤萝、黄纤藤、岩搬豆等[1]。紫藤资源丰富，除了广泛应用于东方国家的庭院装饰，它还有很多其他的用途如药用。已有研究表明，紫藤瘤具有杀虫、止痛、解毒等功效[2]，可用于肝炎、胃癌、乳腺癌、皮肤癌[3,4,5,6]的治疗。有资料记载，紫藤茎性温，味甘苦，有小毒，可用于治疗蛔虫病、吐泻、关节疼痛[7]，这与紫藤瘤的药效有相似之处。现代化学研究发现紫藤茎中含有紫藤瘤化学成分的类似物，如紫藤皂苷[8]。所以能否利用资源丰富的紫藤茎代替紫藤瘤发挥药效值得进一步研究。为了明确紫藤茎的药效物质基础，对其甲醇提取物进行了系统的化学成分研究，从中分离得到了14个异黄酮类化合物，分别鉴定为鸢尾黄素-7-O-β-D-(6″-O-乙酰基)-葡萄糖苷[tectorigenin-7-O-β-D-(6″-O-acetyl)-glucoside,1]、7,3′,4′-三羟基异黄酮（7,3′,4′-trihydroxyisoflavanone,2）、芒柄花黄素（formononetin,3）、阿佛洛莫生（afromosin,4）、樱黄素（prunetin,5）、鹰嘴豆芽素A(biochaninA,6）、7,3′,5′-三羟基-4′-甲氧基异黄酮（gliricidin,7）、8-甲雷杜辛（8-O-methylretusin,8）、鸢尾苷（tectoridin,9）、染料木苷（genistin,10）、降紫香苷（sissotrin,11）、芒柄花苷（ononin,12）、葛花宁（kakkanin,13）、苦参醇O(kushenolO,14）。其中，化合物1是新化合物，命名为鸢尾苷A；化合物2、5、7、9～11、13、14为首次从紫藤属植物中分离得到。

1、仪器与材料

AVANCEIII600MHz核磁共振仪（德国布鲁克公司）；QTrap4500+型质谱仪（加拿大ABSCIEX公司）；半制备高效液相色谱仪（LC-20AB,SPD-20A，日本岛津公司）；C18半制备色谱柱（250mm×10mm,5μm，美国Kromsil公司）；SephadexLH-20（美国GE公司）；EL204电子天平（梅特勒-托利多仪器公司）；旋转蒸发仪（东京理化器械独资工厂）；化学试剂（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；氘代试剂（德国Merck公司）；HSGF254薄层色谱硅胶板（烟台江友硅胶开发有限公司）；柱色谱用硅胶（青岛海洋化工有限公司）；聚酰胺粉（国药集团化学试剂苏州有限公司）。

紫藤茎于2015年11月采集于湖北蕲春，由苏州大学药学院李笑然教授鉴定为紫藤Wisteriasinensis(Sims)Sweet的茎。药材标本（141018）保存于苏州大学药学院标本室。

2、提取与分离

干燥的紫藤茎100kg粉碎，用6倍量工业甲醇浸提3次，每次24h，日间每隔2h搅拌1次，滤过，滤液浓缩，得到药材甲醇提取液浸膏6L。用水将浸膏充分分散，再依次用石油醚、二氯甲烷及醋酸乙酯反复多次萃取，各个部分萃取液减压回收溶剂，得到石油醚萃取物（未干）、二氯甲烷萃取物（未干）、醋酸乙酯萃取物浸膏292g。二氯甲烷萃取物过ODS中压柱，用甲醇-水（10∶90→80∶20）梯度洗脱，得到6个洗脱部位Fr.A～F。其中Fr.C经过ODS中压柱分离，用甲醇-水梯度洗脱（10∶90→70∶30）得到Fr.C1～C5。Fr.C2经过半制备液相（甲醇-水40∶60）分离纯化得到化合物6(tR=21.5min,6.0mg）。Fr.D经过半制备液相（甲醇-水38∶62）分离纯化得到化合物3(tR=25.0min,6.0mg）、4(tR=22.5min,2.0mg）。Fr.F经过硅胶中压柱色谱，用二氯甲烷-甲醇（95∶5→80∶20）梯度洗脱得到3个洗脱部位，分别为Fr.F1～F3。Fr.F3经过半制备液相（甲醇-水40∶60）分离纯化得到化合物5(tR=21.0min,10.0mg）。醋酸乙酯萃取物浸膏292g用甲醇溶解时，沉淀经重结晶纯化得化合物9(4.0g）；上清液浓缩后过200～300目减压硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（95∶5→80∶20）梯度洗脱，得到5个洗脱部位，分别为Fr.a～e。Fr.b过硅胶柱色谱二次减压，用石油醚-醋酸乙酯（80∶20→20∶80）梯度洗脱得到Fr.b1～b7。Fr.b4经过半制备液相色谱（甲醇-水43∶57）分离纯化得到化合物2(tR=18.5min,2.0mg）、7(tR=16.0min,7.0mg);Fr.b5经过SephadexLH-20凝胶柱色谱（MeOH）得到化合物10(12.0mg);Fr.b6用甲醇溶解，沉淀重结晶得到化合物11(1.0g），上清液经过中压硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇（95∶5→70∶30）得到8个洗脱部位Fr.b6a～b6h。Fr.b6d经过SephadexLH-20凝胶柱色谱（甲醇）得到Fr.b6d1～b6d3。Fr.b6d2经过半制备液相色谱（甲醇-水36∶64）分离纯化得到化合物1(tR=18.0min,23.0mg）。Fr.c用半制备液相色谱（甲醇-水35∶65）分离纯化得到化合物12(tR=26.0min,5.0mg);Fr.d用中压聚酰胺柱，经过甲醇-水（10∶90→50∶50）梯度洗脱，得到8个洗脱部位Fr.d1～d8。Fr.d2经过半制备液相色谱（甲醇-水38∶62）分离纯化得到化合物8(tR=24.0min,4.0mg）。Fr.d5用半制备液相色谱（甲醇-水28∶72）分离纯化得到化合物13(tR=22.5min,11.0mg）、14(tR=24.5min,3.0mg）。

3、结构鉴定

化合物1：白色粉末（甲醇），mp263～264℃，[α]D28-43(c0.1,MeOH);:208,265,331(sh);3398,1634,1576,1459,1289;FeCl3和Molish反应呈阳性。HR-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z:527.1172[M+Na]+（计算值527.1165），结合1H-、13C-NMR以及2D-NMR数据推测分子式为C24H24O12，不饱和度是13。1H-NMR和13C-NMR数据见表1。13C-NMR谱中显示出24个碳信号，包括10个季碳信号（δC181.2,171.3,157.5,156.3,153.2,153.0,132.6,123.1,121.5,107.0）、1个甲基碳信号（δC19.0）、1个甲氧基碳信号（δC60.1）、1个亚甲基碳信号（δC63.3）和11个次甲基碳信号（δC154.0,129.9,129.9,114.9,114.9,100.5,94.2,76.4,74.2,73.3,70.1）。将化合物1与文献报道[9]中化合物鸢尾苷核磁数据相比较，发现二者碳谱数据相近，化合物1多出1个δC171.3的羰基碳和1个δC19.4的甲基碳。结合HSQC谱，从HMBC谱中（图1）发现甲基碳的H-8″(δH2.06)和C-7″(δC171.3)相关，说明化合物1比鸢尾苷多出1个乙酰基结构片段。HMBC谱中葡萄糖的H-1″(δH5.03)与C-7(δC156.3)相关，说明糖连接在鸢尾黄素母核的C-7位上。此外，从糖端基质子信号δH5.03(d,J=7.0Hz)的偶合常数判断苷键的构型为β型。化合物1与鸢尾苷核磁数据相比，葡萄糖的C-5″位化学位移值由77.4变为74.2，向高场位移了3.2，而葡萄糖的C-6″位化学位移值由60.9变为63.3，向低场位移了2.4。说明葡萄糖C-6″位的羟基可能被酯化。再结合HMBC谱中H-6″(δH4.21)与C-7″(δC171.3)、C-5″(δC74.2)相关，可以推测出葡萄糖的C-6″位的羟基被乙酰化。

表1化合物1的13C-NMR(150MHz,CD3OD)和1H-HMR(500MHz,CD3OD)数据

图1化合物1主要的HMBC及1H-1HCOSY相关

综上所述，化合物1的结构确定为鸢尾黄素-7-O-β-D-(6″-O-乙酰基)-葡萄糖苷，为1个新化合物，命名为鸢尾苷A。结构见图1。

化合物2：淡褐色粉末（甲醇）；ESI-MSm/z:271[M+H]+，分子式为C15H10O5。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ:8.09(1H,s,H-2),8.04(1H,d,J=9.0Hz,H-5),7.01(1H,d,J=2.0Hz,H-2′),6.94(1H,dd,J=2.0,9.0Hz,H-6),6.84(1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.83(1H,dd,J=2.0,8.0Hz,H-6′),6.82(1H,d,J=8.0Hz,H-5′)；13C-NMR(125MHz,CD3OD)δ:176.7(C-4),163.2(C-7),158.3(C-9),153.3(C-2),145.2(C-4′),144.8(C-3′),127.1(C-5),124.6(C-3),123.4(C-1),120.3(C-6′),116.8(C-10),116.1(C-2′),115.0(C-6),114.9(C-5′),101.8(C-8)。以上数据与文献报道基本一致[10]，故鉴定化合物2为7,3′,4′-三羟基异黄酮。

化合物3：黄色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:267[M-H]-，分子式为C16H12O4。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.44(1H,d,J=8.5Hz,H-5),8.12(1H,s,H-2),7.76(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.23(1H,dd,J=2.5,8.5Hz,H-6),7.14(1H,d,J=2.5Hz,H-8),7.06(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),3.68(3H,s,-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:175.4(C-4),164.7(C-7),159.7(C-4′),158.5(C-9),152.4(C-2),130.6(C-2′,6′),127.9(C-5),125.2(C-1′),124.3(C-3),117.3(C-10),116.0(C-6),113.9(C-3′,5′),102.9(C-8),55.0(4′-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[11]，故鉴定化合物3为芒柄花黄素。

化合物4：白色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:299[M+H]+，分子式为C17H14O5。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.61(1H,s,H-2),7.91(1H,s,H-5),7.80(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.21(1H,s,H-8),7.06(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),3.72(3H,s,6-OCH3),3.68(3H,s,4′-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:175.1(C-4),159.7(C-4′),154.4(C-7),152.9(C-9),152.3(C-2),147.6(C-6),130.6(C-2′,6′),125.4(C-3),123.8(C-1′),117.3(C-10),114.0(C-3′,5′),105.5(C-5),103.8(C-8),55.7(6-OCH3),55.0(4′-OCH3)。以上数据与文献报道一致[12]，故鉴定化合物4为阿佛洛莫生。

化合物5：黄色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:283[M-H]-，分子式为C16H12O5。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.16(1H,s,H-2),7.69(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.27(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),6.61(1H,d,J=2.0Hz,H-6),6.54(1H,d,J=2.0Hz,H-8),3.73(3H,s,7-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:181.1(C-4),165.7(C-7),163.0(C-5),159.1(C-4′),158.1(C-9),153.5(C-2),130.8(C-2′,6′),123.6(C-1′),121.9(C-3),116.1(C-3′,5′),106.5(C-10),98.4(C-6),92.4(C-8),55.7(7-OCH3)。以上数据与文献报道一致[13]，故鉴定化合物5为樱黄素。

化合物6：淡黄色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:283[M-H]-，分子式为C16H12O5。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.11(1H,s,H-2),7.68(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.06(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),6.74(1H,d,J=2.0Hz,H-6),6.66(1H,d,J=2.0Hz,H-8),3.69(3H,s,4′-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:180.8(C-4),165.9(C-7),163.4(C-5),159.9(C-4′),158.4(C-9),153.4(C-2),130.5(C-2′,6′),123.7(C-3),123.0(C-1′),114.1(C-3′,5′),105.5(C-10),100.0(C-6),94.4(C-8),55.0(4′-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[14]，故鉴定化合物6为鹰嘴豆芽素A。

化合物7：白色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:299[M-H]-，分子式为C16H12O6。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.38(1H,d,J=9.0Hz,H-5),8.15(1H,s,H-2),7.35(2H,s,H-2′,6′),7.22(1H,dd,J=2.0,9.0Hz,H-6),7.10(1H,d,J=2.0Hz,H-8),4.02(3H,s,4′-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:175.4(C-4),165.1(C-7),158.4(C-9),152.6(C-2),152.0(C-3′,5′),136.9(C-4′),128.9(C-1′),127.9(C-5),124.8(C-3),117.1(C-10),116.2(C-6),109.5(C-2′,6′),102.9(C-8),60.0(4′-OCH3)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物7为7,3′,5′-三羟基-4′-甲氧基异黄酮。

化合物8：浅黄色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:297[M-H]-，分子式C17H14O5。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.30(1H,d,J=9.0Hz,H-5),8.20(1H,s,H-2),7.89(1H,d,J=9.0Hz,H-6),7.73(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.06(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),4.12(3H,s,8-OCH3),3.68(3H,s,4′-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:175.4(C-4),159.8(C-4′),155.1(C-7),152.7(C-2),150.8(C-9),138.0(C-8),130.5(C-2′),130.5(C-6′),124.8(C-1′),124.3(C-3),121.5(C-5),120.7(C-10),115.2(C-6),114.0(C-3′),114.0(C-5′),61.4(8-OCH3),55.0(4′-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物8为8-甲雷杜辛。

化合物9：白色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:461[M-H]-，分子式C22H22O11。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.13(1H,s,H-2),7.70(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.29(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),7.18(1H,s,H-8),5.82(1H,d,J=7.0Hz,H-1″),4.62(1H,dd,J=1.5,12.0Hz,H-6″a),4.06(3H,s,6′-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:181.4(C-4),159.1(C-4′),157.4(C-5),154.2(C-7),153.7(C-2),153.1(C-9),133.5(C-6),130.8(C-2′,6′),123.1(C-3),121.9(C-1′),116.1(C-3′,5′),107.5(C-10),101.8(C-1″),94.6(C-8),79.1(C-5″),78.3(C-3″),74.4(C-2″),71.0(C-4″),62.3(C-6″),60.6(6′-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[17]，故鉴定化合物9为鸢尾苷。

化合物10：白色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:431[M-H]-，分子式为C21H20O10。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.10(1H,s,H-2),7.67(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.27(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),6.92(1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.85(1H,d,J=2.0Hz,H-6),5.79(1H,d,J=7.5Hz,H-1″),4.58(1H,dd,J=1.5,12.0Hz,H-6″a);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:181.1(C-4),163.8(C-7),162.8(C-5),159.1(C-4′),157.8(C-9),153.6(C-2),130.7(C-2′,6′),123.6(C-1′),121.8(C-3),116.1(C-3′,5′),107.1(C-10),101.5(C-1″),100.4(C-6),94.9(C-8),79.0(C-5″),78.2(C-3″),74.5(C-2″),70.9(C-4″),62.1(C-6″)。以上数据与文献报道基本一致[18]，故鉴定化合物10为5,7,4′-三羟基异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物11：白色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:445[M-H]-，分子式为C22H22O10。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.12(1H,s,H-2),7.66(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.06(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),6.93(1H,d,J=2.5Hz,H-8),6.86(1H,d,J=2.5Hz,H-6),5.79(1H,d,J=2.5Hz,H-1″),3.69(3H,s,4′-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:180.9(C-4),163.9(C-7),162.9(C-5),160.0(C-4′),157.8(C-9),153.8(C-2),130.5(C-2′,6′),123.4(C-3),123.3(C-1′),114.1(C-3′,5′),107.1(C-10),101.5(C-1″),100.5(C-6),94.9(C-8),79.0(C-5″),78.2(C-3″),74.5(C-2″),70.9(C-4″),62.1(C-6″),55.0(4′-OCH3)。以上数据与文献报道一致[19]，故鉴定化合物11为降紫香苷。

化合物12：浅黄色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:429[M-H]-，分子式C22H22O9。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.36(1H,d,J=9.0Hz,H-5),8.11(1H,s,H-2),7.74(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.43(1H,d,J=2.0Hz,H-8),7.28(1H,dd,J=2.0,9.0Hz,H-6),7.06(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),5.79(1H,d,J=7.5Hz,H-1″),3.69(3H,s,4′-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:175.3(C-4),162.2(C-7),159.8(C-4′),157.6(C-9),152.9(C-2),130.5(C-2′),130.5(C-6′),127.5(C-5),124.8(C-1′),124.5(C-3),119.5(C-10),115.8(C-6),114.0(C-3′),114.0(C-5′),104.0(C-8),101.6(C-1″),79.0(C-5″),78.2(C-3″),74.6(C-2″),71.0(C-4″),62.2(C-6″),55.0(4′-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[20]，故鉴定化合物12为芒柄花苷。

化合物13：白色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:577[M-H]-，分子式C27H30O14。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.13(1H,s,H-2),7.62(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.08(1H,d,J=2.0Hz,H-8),7.05(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),6.84(1H,d,J=2.5Hz,H-6),5.67(1H,d,J=7.5Hz,H-1″),4.95(1H,d,J=7.0Hz,H-1′′′a),3.70(3H,s,4′-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:180.9(C-4),163.9(C-7),162.7(C-5),159.9(C-4′),157.9(C-9),153.9(C-2),130.5(C-2′,6′),123.3(C-1′,3),114.1(C-3′,5′),107.2(C-10),105.9(C-1′′′),101.7(C-1″),100.6(C-6),95.2(C-8),78.2(C-3″),78.0(C-3′′′),77.3(C-5″),74.8(C-2″),74.4(C-2′′′),71.2(C-4″),70.8(C-4′′′),70.0(C-6″),66.9(C-5′′′),55.1(4′-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[21]，故鉴定化合物13为葛花宁。

化合物14：白色粉末（吡啶）；ESI-MSm/z:561[M-H]-，分子式C27H30O13。1H-NMR(500MHz,C5D5N)δ:8.38(1H,d,J=8.0Hz,H-5),8.11(1H,s,H-2),7.67(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),7.59(1H,d,J=1.5Hz,H-8),7.31(1H,dd,J=1.5,8.0Hz,H-6),7.03(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),3.69(3H,s,4′-OCH3);13C-NMR(125MHz,C5D5N)δ:175.3(C-4),162.2(C-7),159.7(C-4′),157.8(C-9),152.8(C-2),130.5(C-2′),130.5(C-6′),127.5(C-5),124.9(C-3),124.4(C-1′),119.6(C-10),116.0(C-6),114.0(C-3′),114.0(C-5′),106.0(C-1′′′),104.4(C-8),101.9(C-1″),78.3(C-3″),78.1(C-3′′′),77.5(C-5″),74.8(C-2″),74.5(C-2′′′),71.3(C-4″),70.9(C-4′′′),70.0(C-6″),66.9(C-5′′′),55.0(4′-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[22]，故鉴定化合物14为苦参醇O。

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