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贵州地产太子参高效毛细管电泳指纹图谱研究

2025-07-21 60 上传者：管理员

摘要：目的建立贵州地产太子参HPCE指纹图谱，为太子参药材的质量控制提供参考。方法采用75μm×60 cm的熔融石英毛细管柱，DAD检测器，检测波长203 nm;以30 mmol/L的硼砂作为缓冲液；工作电压为22 kV;柱温20℃。结果记录15批贵州地产太子参药材的色谱图，初步建立了以11个共有峰为特征指纹信息的太子参药材HPCE指纹图谱。结论该方法准确可靠，可作为贵州地产太子参药材内在质量评价的依据。

关键词：
太子参
抗疲劳
指纹图谱
生津润肺
高效毛细管电泳
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太子参为石竹科多年生草本植物孩儿参[Pseudostellariaheterophylla(Miq.)PaxexPaxetHoffm.]的块根[1],为2020版《中国药典》所收载的常用中药,广泛用于多类方剂,是生产中成药重要的原料｡该药具有益气健脾,生津润肺等功效,现代医学研究[2-3]发现,太子参还具有增强免疫､抗疲劳､改善记忆等多种药理作用｡近年来,随着市场需求量的逐年增加,太子参野生原药材早已不能满足市场需求,大面积的人工栽培方式将是解决这一突出矛盾的重要途径｡太子参药材人工栽培范围扩大,产地管理,采收加工,运输贮存等环节上的差异,造成太子参质量参差不齐[4],其内在质量控制和评价成为当前急需解决的问题｡本研究采用高效毛细管区带电泳(CZE)模式对贵州地产太子参指纹图谱进行了初步探讨,获取了共有模式,为贵州地产太子参的质量控制和评价提供参考｡

1、材料与方法

1.1材料与仪器

1.1.1药品和试剂硼砂(南京化学试剂一厂,分析纯);环肽B对照品(中国食品药品检定研究院,批号:111887-201001);甲醇(天津科密欧化学试剂有限公司,色谱纯);乙腈(天津市科密欧化学试剂有限公司,色谱纯);甲醇(成都市科龙化工制剂厂,分析纯);水为娃哈哈纯净水｡

1.1.2样品不同产地太子参样品采集信息详见表1｡所有样品均采集于贵州省内各地区,经贵州中医药大学魏升华教授鉴定为石竹科多年生草本植物太子参[Pseudostellariaheterophylla(Miq.)PaxexPaxetHoffm.]的块根｡

表1太子参样品产地信息

1.1.3仪器三维高效毛细管电泳色谱仪(美国安捷伦公司);AE-240双量程电子分析天平,量程:万分之一和十万分之一两档(梅特勒-托利多上海有限公司);超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,KQ5200DE型)｡

1.2方法

1.2.1电泳条件毛细管:75μm×60cm的熔融石英毛细管柱,有效长度为80.1cm(河北永年锐沣色谱件有限公司);DAD检测器,检测波长203nm;以30mmol/L的硼砂-水作为缓冲液;工作电压为22kV;压力进样:20mbar×15s;电解质封口:20mbar×20s;柱温20℃｡

1.2.2供试品溶液的制备取太子参样品粉末约1.0g,精密称定,置于50mL具塞锥形瓶中,加入25mL甲醇,称定重量,超声提取45min,取出,放冷至室温,用甲醇补足减失的重量｡过滤于蒸发皿中,在水浴锅上挥干溶剂甲醇,再用蒸馏水溶解残渣,定容于10mL容量瓶中,过微孔滤膜,即得供试品溶液｡

1.2.3方法学考察

1.2.3.1精密度试验精密吸取按“1.2.2”项下制备的太子参药材供试品溶液0.5mL于样品小瓶中,按照“1.2.1”项下的电泳条件,连续进样6次,记录各色谱峰的保留时间和峰面积,以峰面积最大,峰高最高的峰为参照峰,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积｡

1.2.3.2稳定性试验精密吸取按“1.2.2”项下制备的太子参药材供试品溶液0.5mL于样品小瓶中,按“1.2.1”项下的电泳条件,分别于0､2､4､8､12､24h进行检测,记录各主要色谱峰的保留时间和峰面积,以峰面积最大,峰高最高的峰为参照峰,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积｡

1.2.3.3重复性试验取太子参药材粉末6份,每份约1.0g,精密称定,按“1.2.2”项下制备太子参药材供试品溶液,分别精密量取供试品溶液0.5mL置于6个样品小瓶中｡按照“1.2.1”项下的电泳条件,分别进样,记录各色谱峰的保留时间和峰面积,以峰面积最大,峰高最高的峰为参照峰,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积｡

1.2.4太子参HPCE指纹图谱的建立及相似度评价按“1.2.2”项下制备太子参药材供试品溶液,精密量取供试品溶液0.5mL于电泳小瓶中,按照“1.2.1”项下电泳条件进行测定,记录相应的色谱图,即得15批贵州太子参高效毛细管电泳图谱｡将色谱数据导入相似度评价软件,采用中位数法计算相似度,自动匹配处理可以得到对应的数据和图谱｡

2、结果

2.1不同产地太子参药材相似度比较本研究对采集于贵州不同产地的15批太子参药材进行了检测,分析了15批药材指纹图谱的相似度数据,用相关系数(中位数)代表相似度,得到15批贵州太子参药材样品的相似度分别为S1(0.993)､S2(0.995)､S3(0.987)､S4(0.996)､S5(0.997)､S6(0.998)､S7(0.991)､S8(0.987)､S9(0.998)､S10(0.980)､S11(0.994)､S12(0.994)､S13(0.988)､S14(0.994)､S15(0.998),见表2､图1､图2｡从上述图表可以看出,贵州境内15批不同产地的太子参样品相似度较高,相似度位于0.980~0.998之间,此结果表明15批贵州不同产地的太子参药材获得的共有图谱模式具有一定代表性,可以体现贵州太子参所具有的指纹特性｡

结果表明,不同产地太子参药材相似度均在0.90以上,说明贵州不同产地太子参相似度较高｡由检测图谱分析可知,不同样品间主要色谱峰基本一致,峰形基本吻合,表明其主要化学成分基本相同,但不同产地的太子参样品中各成分的含量存在一定的地域差异｡若将HPCE指纹图谱作为贵州地产太子参质量控制的一部分,则其相似度不应该低于0.90｡

图115批太子参样品HPCE指纹图谱

表215批不同产地太子参药材相似度

图215批太子参药材指纹图谱相似度投影图

2.2相对保留时间及相对峰面积结果根据处理软件生成的数据信息,以供试品中峰面积最大,峰高最高的峰为参照峰来标定色谱图中其他各共有指纹峰的相对保留时间及相对峰面积,计算参照峰和共有峰的相对保留时间和相对峰面积,记录相关数据的变化,结果表明共有峰相对保留时间的RSD%位于0.186~0.824之间,相对峰面积的RSD%位于10.704~63.565之间｡

3、讨论

目前,在控制中草药内在质量方面获得国际公认的一项技术即色谱指纹图谱技术[5-6]｡整体性和模糊性是该项技术的两大基本属性,在控制和评价原药材及制剂质量的稳定性和一致性方面具有重要意义[7-9]｡建立指纹图谱的方法多种多样[10],包括HPLC[11]､HPCE[12]､GC-MS[13]､TLC[14]､IR[9]､NMR[15]及HPLC-MS[16]等联用技术,这些色谱技术的运用极大地提高了指纹图谱的研究水平｡在建立该指纹图谱时采用的检测波长较低,且低于甲醇位于紫外区的截止波长[17],若采用甲醇溶解样品,很容易造成干扰｡因此,制备供试品溶液时先挥干甲醇溶剂后再用蒸馏水溶解样品残渣,这样可以排除甲醇可能带来的干扰｡

分离电压是影响高效毛细管电泳分离条件的重要因素之一,应该选择尽可能高的电压以达到最大柱效､最大分离度和最短分离时间,而又不产生过多的焦耳热｡试验中分别选取了15､20､22､25､30kV电压对分离度的影响｡试验结果表明,随着分离电压的提高,样品各色谱峰保留时间均缩短,柱效提高,但是当分离电压过高时柱效反而下降,各组分分离效果不理想,综合考虑选择分离电压为22kV较为适宜｡

另外,缓冲溶液的浓度通过影响电渗流､电流大小及管壁与溶质间的吸附作用来影响样品组分的分离[18]｡试验中分别考察了浓度为20､30､40､50mmol/L的缓冲液对分离的影响｡随着缓冲液浓度的升高,电渗流速降低,样品分析时间延长,适宜的缓冲液浓度有利于各个组分的分离,选择30mmol/L硼砂缓冲液较为合适｡最后,过高的柱温容易使得毛细管里产生气泡,从而出现电流很低甚至为零的情况,严重阻碍电泳的正常进行｡鉴于此,本试验分别考察了15､20､25､30℃的柱温对分离效果的影响｡试验结果表明,较低的柱温会使得样品分析时间增加,当柱温过高时柱效有所下降,分离度受到影响,分离效果不太理想｡从分离效率和分离度等方面综合考虑,最终选择20℃作为电泳柱温｡当前,2020版《中国药典》尚缺乏针对太子参质量控制的指标性化学成分,基于HPCE方法构建的贵州地产太子参指纹图谱并获取共有模式图谱,这为评价贵州地产太子参质量提供参考依据｡

参考文献:

[1]陈家从.太子参食用开发研究与展望[J].中国食物与营养,2011,17(3):72-74.

[2]王奕霏,卢慧蕴,丰心月,等.太子参化学成分及生物活性研究进展[J].食品安全质量检测学报,2024,15(7):122-132.

[3]丰心月,王奕霏,邓嘉航,等.太子参改善斑马鱼和APP/PS1小鼠学习记忆[J].食品与发酵工业,2024,50(8):55-61.

[4]方雅冰,李全新.中国中药材产业健康发展分析与对策[J].农业展望,2021,17(10):123-129.

[5]宋建平,刘训红,张月婵.太子参道地药材指纹图谱的构建[J].中华中医药学刊,2008,(9):1938-1941.

[10]梁生旺.中药制剂分析[M].北京:中国中医药出版社,2003:360-363.

[15]裴洁荣,金如意,苏梅,等.大血藤质子核磁共振指纹图谱研究[J].中南药学,2023,21(7):1707-1711.

[16]刘训红,居文政,蔡宝昌,等.太子参HPLC-MS指纹图谱的初步研究[J].中成药,2008,(2):160-163.

[17]黄世德,梁生旺.分析化学(下册)[M].北京:中国中医药出版社,2005:316.

[18]王跃国,王惠民,王忠慧,等.高效毛细管电泳分离氨基酸部分影响因素的探讨[J].检验医学,2005,(6):15-17.

基金资助:中国药学会-施维雅青年医院药学创新研究资助(CPA-B04-ZC-2024-001);2024年药物安全研究项目(ADR2024MS15);贵州省人民医院2019年度国家自然科学基金后补助资金资助([2019]GPPH-NSFC-D-2019-25,GPPH-NSFC-2019-26);

文章来源:白雪,唐才林,许琴,等.贵州地产太子参高效毛细管电泳指纹图谱研究[J].贵州医药,2025,49(07):1011-1014.