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紫苏梗和大皂角的质量标准

2024-03-01 305 上传者：管理员

摘要：目的建立紫苏梗和大皂角两种中药材的质量标准。方法对10批不同产地紫苏梗和大皂角的药材性状和粉末显微特征进行观察，采用薄层色谱法进行定性鉴别。并分别对其水分、总灰分进行测定。对紫苏梗中的迷迭香酸含量进行HPLC测定，对大皂角的酸不溶性灰分、浸出物进行测定。结果紫苏梗和大皂角的性状与药典描述一致，明确了其显微结构特征。薄层色谱鉴别中，供试品与对照品在相同位置显示出相同颜色斑点。紫苏梗的水分、总灰分分别≤12.0%、8.0%,含量测定中迷迭香酸含量≥0.10%;大皂角的水分、总灰分、酸不溶性灰分分别≤13.0%、8.0%、1.0%,水冷浸、水热浸、醇冷浸以及醇热浸浸出物，均≥30.0%。结论本研究制定了紫苏梗和大皂角的质量标准，为这两种药材的质量标准修订提供了参考。

关键词：
含量测定
大皂角
显微鉴别
紫苏梗
薄层色谱
质量标准
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紫苏梗(Perillae caulis)为唇形科植物紫苏Perilla frutescens(L.) Britt. 的干燥茎，秋季果实成熟后采割，除去杂质，晒干，或趁鲜切片，晒干，呈类方形的厚片[1]。其具有理气宽中、止痛、安胎的功效，用于治疗胸膈痞闷、胃脘疼痛、嗳气呕吐、胎动不安[2,3]。紫苏入药始载于汉魏时期《名医别录》,列为中品。“苏，味辛，温。主下气，除寒中，其子尤良”,其所载性味与今相符[4]。紫苏梗被单独使用，则载于宋代的《本草图经》中，曰：“苏，紫苏也。旧不著所出州土，今处处有之。叶下紫色而气甚香，夏采茎叶，秋采实。其茎并叶，通心经，益脾胃，煮饮尤胜，与橘皮相宜，气方中多用之”。紫苏茎即为紫苏梗[5]。2020版《中国药典》中收载了紫苏梗的质量规范，但未收载水分、总灰分。

皂荚(Gleditsia sinensis Lam.)最早载于《神农本草经》,曰：“皂荚味辛、咸，温。主风痹死肌，邪气，风头泪出，利九窍，杀精物。生川谷”[6]。大皂角为皂荚的干燥成熟果实，秋季果实成熟变黑时采摘，晒干[1]。主产于山东、河南、山西等地[7]。大皂角具有祛痰开窍、散结消肿等功效[8],常用于咳嗽疾喘、病肿便毒、疮癣痢癞等症的治疗[9],具有较大的药用价值。2020 年版《中国药典》一部只收录其来源、性状、粉末鉴别和薄层鉴别的方法，尚未收载水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物。

本文通过对紫苏梗和大皂角的质量标准进行研究，将有助于丰富《中国药典》内容，可为紫苏梗和大皂角药材质量标准提供参考依据。

1、材料与仪器

1.1 药品与试剂

本实验共收集到主产地四川、山东、山西等地的紫苏梗饮片样品10批，共收集到主产地四川、山东、河南等地的大皂角样品10批，均购自河北济鑫堂药业有限公司。见表1。

表1 紫苏梗与大皂角产地与批次

迷迭香酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号为111871-202007)。大皂角对照药材(中国食品药品检定研究院，批号为121611-201702)。甲醇(天津市汇杭化工科技有限公司)、正己烷(天津市科密欧化学试剂有限公司)、乙酸乙酯(天津市富宇精细化工有限公司)、甲酸(国药集团化学试剂有限公司)、硅胶G薄层板(青岛谱科分离材料有限公司与青岛海洋化工有限公司)、水合氯醛(阿拉丁)、三氯甲烷，乙酸，丙酮(烟台三和化学试剂有限公司)、95%乙醇(天津市汇杭化工科技有限公司)。

1.2 仪器

三用紫外分析仪(温州铭仁仪器有限公司),超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司),电热鼓风干燥箱(上海力辰邦西仪器科技有限公司),CX31 RBSFA显微镜(北京科至达信息技术有限公司),TB-215D电子天平(北京丹佛仪器有限公司)。

2、实验方法

2.1 性状鉴别参照《中国药典》(2020年版)紫苏梗项和大皂角项的描述。

2.2 显微鉴别将各批次紫苏梗或大皂角饮片粉碎过60目筛，用10%水合氯醛透化稀甘油封片制为碎粉片。用显微成像系统拍摄。

2.3 定性鉴别

2.3.1 紫苏梗

2.3.1.1 供试品溶液制备取本品粉末1 g, 加入甲醇25 mL,超声提取30 min, 过滤，滤液进行蒸干，残留的药渣加入甲醇1 mL使其溶解，作为供试品溶液。

2.3.1.2 对照品溶液的制备取迷迭香酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3.1.3 薄层色谱方法考察参照薄层色谱法《中国药典》(2020年版)四部通则0502试验，对薄层色谱法各影响因素进行考察。硅胶板选取青岛海洋和青岛谱科预制薄层板进行考察。展开剂选择不同比例正己烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶3∶0.2)、(4∶3∶0.2)、(2∶3∶0.2)、(3∶3∶0.1)进行考察。点样量选择2、4、6和8 μL进行考察。展开温度选择40℃、4℃和常温进行考察。饱和状态选择展开前饱和30 min和展开前不饱和进行考察。

2.3.2 大皂角

2.3.2.1 供试品溶液的制备取本品粉末l g, 加入甲醇10 mL,超声处理30 min, 过滤，滤液蒸干，残渣加水10 mL使其溶解，然后用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10 mL,合并，蒸干，然后加入1 mL的甲醇将其溶解，作为供试品溶液。

2.3.2.2 对照品溶液的制备将大皂角对照药材l g, 用上述方法制成对照品溶液。

2.3.2.3 薄层色谱方法考察参照薄层色谱法《药典》2020年版四部通则0502试验，对薄层色谱法各影响因素进行考察。硅胶板选取青岛海洋和青岛谱科预制薄层板进行考察。展开剂选择不同比例三氯甲烷-甲醇-水-冰醋酸(18∶1∶0.6∶0.2)、(17∶1∶0.6∶0.2)、(19∶1∶0.6∶0.2)、(18∶1∶0.6∶0.1)进行考察。点样量选择 5、10和15 μL进行考察。展开温度选择40℃、常温和4℃对进行考察。饱和状态选择展开前饱和30 min和展开前不饱和进行考察。

2.4 水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物检查对10批次紫苏梗与大皂角药材饮片按照《中国药典》(2020年版)四部通则0832第二法(烘干法)测定水分。按照通则2302测定灰分、酸不溶性灰分。对10批次大皂角按照通则2201进行浸出物测定。

2.5 紫苏梗中迷迭香酸含量测定参照高效液相色谱法通则0512测定。

2.5.1 色谱条件与系统适应性试验填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-0.1%甲酸水(38∶62),流速1 mL/min, 检测波长330 nm, 柱温25℃。理论塔板数按照迷迭香酸色谱峰计算≤3 000。

2.5.2 供试品溶液的制备根据“2.3.1.1”制备供试品溶液。

2.5.3 对照品溶液的制备根据“2.3.1.2”制备对照品溶液。

2.6 测定方法分别吸取10 μL对照品溶液与供试品溶液，使用高效液相色谱仪进行测定。

3、结果

3.1 紫苏梗

3.1.1 性状鉴别

本品呈方柱形，四棱钝圆，长短不一，直径0.5～1.5 cm。体轻，质硬，断面裂片状。切片厚2～5 mm, 常呈斜长方形，木部黄白色，射线细密，呈放射状，髓部白色，疏松或脱落。气微香，味淡。见图1。

图1 紫苏梗饮片图

3.1.2 显微鉴别

本品粉末灰白色。木纤维众多，多成束，常与木薄壁细胞、导管或木射线连接，甚细长，末端尖，纹络稀疏，有细点状的小孔。有单独或者成束状的纤维，分为两种。一种比较长，尾部比较尖，非木化，没有明显的孔沟，有的胞腔内有细小的草酸钙针晶。另一种为梭形，周边参差，具有比较密集的孔沟，胞腔小。导管主要是具缘纹孔或者螺纹导管。有散落的单个小腺毛，圆头，单细胞头，单细胞柄。见图2。

3.1.3 薄层色谱定性鉴别

3.1.3.1 硅胶板考察结果

青岛海洋薄层板较青岛谱科的斑点清晰，且Rf值适中。最终选用青岛海洋预制硅胶G薄层板。见图3。

图2 紫苏梗显微鉴别图

图3 紫苏梗硅胶板考察结果

3.1.3.2 展开剂考察结果

紫苏梗各批次药材和对照品溶液在正己烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶3∶0.2)展开剂下分离的效果更好，斑点更清晰，且Rf值适中。最终选择正己烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶3∶0.2)作为展开剂。见图4。

图4 紫苏梗展开剂考察结果

3.1.3.3 点样量考察结果

点样量在4、6和8 μL时斑点不够清晰，而2 μL点样下斑点清晰，分离的效果更好。点样量最终确定为2 μL。见图5。

3.1.3.4 展开温度考察结果

温度在40℃时斑点分离效果欠佳，而在4℃和常温时薄层板斑点清晰，分离效果较好。最终选择展开温度为常温。见图6。

3.1.3.5 饱和状态考察结果

经展开前饱和后的斑点分离效果较好，未进行饱和的斑点存在分离效果欠佳和边缘效应现象。最终选择展开前饱和30 min。见图7。

3.1.3.6 验证试验

依据上述考察结果，本研究采用以下条件对各批次紫苏梗进行验证。薄层板采用青岛海洋预制硅胶G薄层板，展开剂为正己烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶3∶0.2)。在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。见图8。

图5 紫苏梗点样量考察结果

图6 紫苏梗展开温度考察结果

图7 紫苏梗饱和状态考察结果

图8 紫苏梗薄层色谱法鉴别图谱

3.1.4 水分、总灰分、酸不溶性灰分检查

紫苏梗10批药材水分、总灰分、酸不溶性灰分的测定结果见表1。紫苏梗水分≤12.0%、总灰分≤8.0%、酸不溶性灰分≤2.0%。

表2 紫苏梗水分、总灰分和酸不溶性灰分测定结果/%

3.1.5 含量测定

《中国药典》(2020年版)规定，紫苏梗含迷迭香酸≥0.10%。见表3。

表3 紫苏梗中迷迭香酸的含量

3.2 大皂角

3.2.1 性状鉴别

本品呈扁长的剑鞘状，有的略弯曲，长15～40 cm, 宽2～5 cm, 厚0.2～1.5 cm。表面棕褐色或紫褐色，被灰色粉霜，擦去后有光泽，种子所在处隆起。基部渐窄而弯曲，有短果柄或果柄痕，两侧有明显的纵棱线。质硬，摇之有声，易折断，断面黄色，纤维性。种子多数，扁椭圆形，黄棕色至棕褐色，光滑。气特异，有刺激性，味辛辣。见图9。

图9 大皂角饮片图

3.2.2 显微鉴别

本品粉末淡黄棕色。有很多直径在45～100 μm的石细胞。形状不规则或者类似圆形。有的厚鼻孔纹细胞是长方形，偶尔能看见晶纤维。副卫细胞成环排列，有棕红色的外果皮细胞，表面看似多角形状。见图10。

图10 大皂角显微鉴别图

3.2.3 薄层色谱定性鉴别

3.2.3.1 硅胶板考察结果

青岛谱科薄层板较青岛海洋的斑点清晰，且Rf值适中。最终选择青岛谱科预制硅胶G薄层板。见图11。

图11 硅胶板考察结果

3.2.3.2 展开剂考察结果

大皂角和对照品用三氯甲烷-甲醇-水-冰醋酸(18∶1∶0.6∶0.2)作为展开剂，分离的效果更加明显清楚，Rf值适中。最终选择三氯甲烷-甲醇-水-冰醋酸(18∶1∶0.6∶0.2)为展开剂。见图12。

图12 展开剂考察结果

3.2.3.3 点样量考察结果

点样量在15 μL时斑点不够清晰，在10 μL和5 μL点样量下斑点清晰，但是10 μL分离效果更好。最终点样量确定为10 μL。见图13。

3.2.3.4 展开温度的考察结果

4℃和40℃下斑点分离效果欠佳，常温下薄层板斑点清晰，效果较好。最终选择展开温度为常温。见图14。

3.2.3.5 饱和状态考察结果

经展开前饱和后的薄层展开效果更好，未进行饱和后展开的斑点存在分离效果欠佳和边缘效应现象。最终确定条件为展开前饱和30 min。见图15。

3.2.3.6 验证实验

依据上述方法考察结果，本研究采用以下条件对各批次大皂角进行验证。薄层板采用青岛谱科预制硅胶G薄层板，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水-冰醋酸(18∶1∶0.6∶0.2)的下层溶液，展开，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。见图16。

图13 点样量考察结果

图14 展开温度考察结果

图15 饱和状态考察结果

图16 大皂角验证实验结果

3.2.4 水分、总灰分、酸不溶性灰分检查

大皂角10批样品测定结果显示，大皂角的水分≤13.0%,总灰分≤8.0%,大皂角的酸不溶性灰分≤1.0%。见表5。

表5 大皂角水分、总灰分和酸不溶性灰分测定结果/%

3.2.5 浸出物的测定

大皂角10批样品测定结果显示，大皂角的水冷浸法、水热浸法、醇冷浸法(70%乙醇作溶剂)以及醇热浸法(70%乙醇作溶剂)均≤30.0%。见表6。

表6 大皂角浸出物测定结果/%

4、讨论

本研究通过观察大皂角和紫苏梗饮片及粉末的显微特征，为两种药材的显微鉴别提供了参考。通过对薄层板厂家、点样量、展开剂比例、展开温度、饱和状态等薄层色谱条件进行考察，最终确定了大皂角和紫苏梗的薄层色谱鉴别方法。该方法色谱斑点清晰、专属性强、稳定性好、耐用性强。

本研究通过对水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量的测定得出以下质量标准：大皂角水分≤13.0%,总灰分≤8.0%,酸不溶性灰分≤1.0%,浸出物限度为≤30.0%;紫苏梗水分≤12.0%,总灰分≤8.0%,酸不溶性灰分≤2.0%。

本研究通过对大皂角进行性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别、水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物测定，对紫苏梗进行性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别、水分、总灰分、酸不溶性灰分、迷迭香酸含量测定，系统地考察了两种药材的各项质控指标，结合《中国药典》和各地两种药材的质量要求，制定了其质量标准，为这两种植物药的质量控制提供了参考依据。

参考文献:

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基金资助:国家自然科学基金(81903790);

文章来源:陈旭,范丽萍,周新华等.紫苏梗和大皂角的质量标准[J].滨州医学院学报,2024,47(02):87-93.