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ASC自身抗体及总胆固醇与阿尔茨海默病相关性研究

2024-03-12 104 上传者：管理员

摘要：目的探讨凋亡相关斑点样蛋白自身抗体(NAbs-ASC)及总胆固醇(TC)与阿尔茨海默病(AD)的相关性。方法选取2022年10月—12月陆军军医大学大坪医院神经内科门诊38例AD患者及健康管理科38例为对照组。比较两组血浆NAbs-ASC及总胆固醇水平，分析NAbs-ASC及TC与AD的相关性。结果 AD组血浆的NAbs-ASC水平低于对照组(P<0.05)，总胆固醇水平高于对照组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示，NAbs-ASC水平与总胆固醇水平呈负相关(rs=-0.290,P<0.05)，认知功能水平与总胆固醇水平呈负相关(rs=-0.380,P<0.05)，而与血浆NAbs-ASC水平呈正相关(rs=0.550,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示，总胆固醇升高为AD的危险因素[■=3.004(95%CI:1.075,8.396)],NAbs-ASC升高为AD的保护因素[■=0.998(95%CI:0.997,0.999)]。结论 NAbs-ASC降低、总胆固醇升高与AD有相关性，并与认知功能水平下降有关。

关键词：
凋亡相关斑点样蛋白自身抗体
总胆固醇
神经退行性疾病
认知功能
阿尔茨海默病
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阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD）是一种以认知功能进行性下降为主要表现的神经退行性疾病，患者的认知、行为、情感及其他神经功能会出现不同程度的损害[1,2]。AD的主要病理表现为老年斑的沉积与神经元纤维缠结。然而最新的研究发现AD可能是一种自身免疫性疾病，在AD患者的脑脊液中发现了针对自身组织的特异性抗体（自身抗体），并且在AD的发病过程中其自身抗体谱发生紊乱[3]，同时，AD患者血脑屏障的破坏或通透性增加[4]，可能使免疫细胞更容易进入脑组织，并产生自身抗体来攻击神经元进而引起神经元死亡。这说明自身免疫可能在AD的病理中起着核心作用。凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC）在巨噬细胞、树突状细胞等免疫细胞中表达。研究发现ASC在β淀粉样蛋白（amyloidβ-protein,Aβ）聚集和沉积方面的重要调控作用。ASC促进Aβ的产生，而过多的Aβ可激活小胶质细胞促使ASC斑点形成，ASC斑点迅速与Aβ结合进而促进Aβ的聚集。因此，阻断ASC与Aβ的聚集可能具有防治AD的作用。既往研究表明，自身免疫性疾病患者血浆中存在针对ASC的自身抗体（naturally occurring antibodies against ASC,NAbsASC)[6]。NAbs-ASC通过与ASC斑点特异性结合具有减少Aβ聚集的作用，然而目前其在AD中的变化特点及对AD发生、发展的作用尚不明确。总胆固醇（total cholesterol,TC）是神经细胞膜的重要组成部分，高TC水平可增加血脑屏障的通透性。研究发现脑内TC水平增加，与Aβ的降解与产生有关，并且降低TC水平，自身ASC水平也随之降低[8,9,10]。表明ASC与TC可能存在一定的相关性，但其具体的机制尚不清楚。本研究旨在探讨NAbs-ASC及TC与AD的相关性，以期进一步研究AD的发病机制。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2022年10月—12月陆军军医大学大坪医院神经内科门诊38例AD患者及健康管理科38例为对照组。AD纳入标准：①45岁≤年龄<85岁；②AD的诊断依据2018版NIA-AA标准[11]并经匹兹堡B型化合物正电子发射断层扫描（PiB-PET）确认阳性。对照组纳入标准：①45岁≤年龄<85岁；②简易精神状态检查（mini-mental state examination,MMSE）评估其认知功能正常者[12]。排除标准：①既往有AD家族史；②既往有其他神经退行性病变史或其他中枢神经系统疾病，包括脑部肿瘤、癫痫、脑外伤等；③既往有恶性肿瘤，严重心、肝、肾等重要器官疾病及各类急慢性炎症；④其他全身性情况，如甲状腺功能减退、维生素B12或叶酸缺乏、烟酸缺乏、严重贫血、低钠血症、低钙血症、神经梅毒、人类免疫缺陷病毒感染、酒精及药物滥用等；⑤拒绝签署知情同意书者。本研究所有研究对象经本院体检中心或门诊自愿签署知情同意书、完成体格检查及实验室检查等相应指标。本研究遵循《赫尔辛基宣言》，通过陆军军医大学陆军特色医学中心（大坪医院）伦理委员会批准，伦理审批号：2022-290。

1.2方法

1.2.1一般资料收集

包括年龄、性别、既往病史（高血压病、糖尿病、冠心病、脑卒中等）、吸烟、饮酒、空腹血糖、TC、甘油三酯等。

1.2.2酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）检测NAbs-ASC水平

受试者空腹抽取5 mL静脉血置于肝素抗凝管中，使用低速台式离心机（cenceTD5A-WS，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）2 000 r/min离心10 min，取上清液保存至-80℃冰箱。ELISA步骤如下：①标准品的稀释：把原倍标准品稀释为5个不同浓度。②加样：分别设空白孔（不加样品及酶标试剂）、标准孔、待测样品孔。在标准孔中加入标准品50μL，待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL。③温育：用封板膜封板后置于37℃条件下温育30 min。④配液：浓缩洗涤液稀释备用。⑤洗涤：弃去液体，加入洗涤液30 s后弃去，重复5次。⑥加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外。⑦温育：操作同③。⑧洗涤：操作同⑤。⑨显色：每孔依次加入显色剂A与显色剂B各50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 min。⑩终止：每孔加终止液50μL。⑪测定：酶标仪450 nm波长处测量各孔的吸光度值。ELISA试剂盒购自上海泛柯实业有限公司。

1.2.3 MMSE量表评估认知功能

该量表共11项，各项内容计分总和为30分，涉及定向力、记忆力、注意力和计算力、回忆、语言5个方面的内容。初中及以上学历者>26分，小学学历者>22分，文盲>19分为认知功能正常。

1.3统计学方法

数据分析采用SPSS 26.0与GraphPad Prism 9.0统计软件。计量资料以均数±标准差或中位数（四分位数）[M(P25,P75）]表示，比较采用t检验或秩和检验；计数资料以构成比或率（%）表示，比较采用χ2检验；相关分析用Spearman法；影响因素的分析采用多因素一般Logistic回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1两组一般资料比较

两组的性别构成、受教育年限、高血压占比、糖尿病占比、冠心病占比、脑卒中占比、吸烟占比、饮酒占比、甘油三酯水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。两组的年龄、空腹血糖、TC水平、MMSE评分比较，差异有统计意义（P<0.05);AD组患者年龄低于对照组，空腹血糖、TC水平高于对照组，MMSE评分低于对照组。见表1。

表1 AD组与对照组的一般资料比较（n=38)

2.2两组血浆NAbs-ASC水平的比较

AD组患者的血浆NAbs-ASC水平为1 587.95 ng/L(1 329.43,1 901.92），对照组的血浆NAbs-ASC水平为2 650.95 ng/L(2 186.32,3 114.77），经秩和检验，差异有统计学意义（P<0.05);AD组患者低于对照组。见图1。

图1两组血浆NAbs-ASC水平的比较

2.3 NAbs-ASC和TC的相关性及两者与MMSE评分的相关性

Spearman相关性分析显示，NAbs-ASC与TC呈负相关（rs=-0.290,P=0.012);MMSE评分与TC呈负相关（rs=-0.380,P=0.000），与NAbs-ASC呈正相关（rs=0.550,P=0.000）。见图2。

2.4 AD患者相关危险因素的Logistic回归分析

单因素一般Logistic回归分析显示，TC升高[=2.532(95%CI:1.407,4.557）]为AD的危险因素（P<0.05);NAbs-ASC升高[=0.998(95%CI:0.997,0.999）]、年龄[=0.948(95%CI:0.902,0.995）]为AD的保护因素（P<0.05）。多因素一般Logistic回归分析（矫正性别、年龄、甘油三酯、高血压、冠心病、糖尿病、脑卒中、吸烟、饮酒、空腹血糖后）显示：TC升高[=3.004(95%CI:1.075,8.396）]为AD的危险因素（P<0.05);NAbs-ASC升高[=0.998(95%CI:0.997,0.999）]为AD的保护因素（P<0.05）。见图3。

图2 NAbs-ASC和TC的相关性及两者与MMSE评分的相关性线性图

图3一般Logistic回归分析AD的危险因素

3、讨论

本研究结果显示，AD患者血浆TC水平高于对照组，并且TC水平与MMSE评分呈负相关，提示TC升高与认知功能下降相关。本研究发现AD患者TC水平高于对照组，与既往研究结论一致[13,14]，高TC与认知障碍相关，也有研究发现高TC对AD无明显影响[15,16]，这说明TC对AD的影响存在一定的争议。研究发现TC升高可能具有抑制α-分泌酶，增加β-分泌酶的作用，增加Aβ生成进而促进其沉积[17,18]。此外，高水平的胆固醇导致脑血管动脉硬化形成引起管腔狭窄，脑细胞存在不同程度的缺血缺氧引起氧自由基生成，进而加重AD病理与认知障碍[19]，这可能是TC水平与认知功能下降相关的原因。

ASC是炎症小体的重要接头蛋白，参与细胞焦亡、炎症、免疫反应等过程，是启动免疫反应的关键蛋白。研究发现ASC促进AD患者Aβ斑块聚集与神经原纤维缠结，可能是AD进展的驱动因子[20]。抗ASC特异性抗体通过与游离的ASC结合，阻断ASC与Aβ的结合，进而减少ASC对Aβ聚集的促进作用[21,22,23]。本研究发现AD患者的NAbs-ASC水平低于对照组，并与认知功能呈正相关，这表明NAbs-ASC可能对AD具有保护作用。研究表明，机体TC水平降低的同时，ASC的表达也降低，这提示ASC表达与总胆固醇水平可能存在关联[8,9,10]。本研究结果发现，血浆NAbs-ASC水平与TC水平呈负相关，这可能与高TC水平增加血脑屏障的通透性有关。

单因素一般Logistic回归分析显示，TC升高为AD的危险因素，NAbs-ASC升高为AD的保护因素；且矫正性别、年龄、甘油三酯、高血压、冠心病、糖尿病、脑卒中、吸烟、饮酒、空腹血糖后，多因素一般Logistic回归分析显示，TC升高仍为AD的危险因素，NAbs-ASC升高仍为AD的保护因素。这之前的研究结果：总胆固醇升高为AD的危险因素是一致的[24]。与其他的研究不同的是[15,25]，本研究结果发现，AD患者与对照组的甘油三酯比较，差异无统计学意义，这可能是AD患者血脂代谢紊乱，存在着其他的作用机制，同时也说明AD患者更容易发生TC紊乱。本研究还发现AD患者与对照组的受教育年限比较，差异无统计学意义，这与其他研究结果不同[26]，可能的原因是本研究样本量少，纳入的AD患者的病理及认知程度的不同带来的结果。

本研究样本量相对较小，未能进行亚组分析进一步明确性别及年龄可能带来的差异；也可能存在其他可能影响测量结果的因素，如前驱糖尿病、胰岛素抵抗、营养不良等[26]，都可能对结果造成一定的偏倚。同时MMSE量表目前已广泛被国内外研究者用来评估认知功能，但可能会不可避免地对本研究的低学历研究对象带来误差。

综上所述，AD患者TC水平高于对照组而NAbs-ASC水平低于对照组，NAbs-ASC水平升高为AD的保护因素，TC水平升高为AD的独立危险因素，且两者呈负相关。但TC与NAbs-ASC呈负相关的机制目前并不清楚，需要进一步的研究阐明。

基金资助:国家自然科学基金(No:82071435);

文章来源:朱晓鹏,龙艳,黄亮等.ASC自身抗体及总胆固醇与阿尔茨海默病的相关性研究[J].中国现代医学杂志,2024,34(05):78-82.