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中老年人非小细胞肺癌主要驱动基因联合检测突变

2025-04-29 67 上传者：管理员

摘要：目的探索非小细胞肺癌主要驱动基因联合检测突变情况及临床应用价值。方法收集经病理诊断为非小细胞肺癌的234例患者的肿瘤组织和临床病理资料，采用扩增阻滞突变系统(ARMS)检测表皮生长因子受体(EGFR)、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)、神经母细胞瘤-拉病毒癌基因同源物(NRAS)、V-拉鼠肉瘤病毒癌基因同源物B1(BRAF)、人类表皮生长因子受体(HER)2、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、c-ros癌基因(ROS)1、RET原癌基因(RET)、间质上皮转化因子(MET)等10种主要驱动基因突变情况。结果 234例非小细胞肺癌患者中，发生基因突变167例，EGFR基因突变119例(50.85%);其次为KRAS基因突变(10.68%)。EGFR基因突变以19 Del和L858R突变比率较高，分别占44.54%和46.22%,且女性高于男性。患者年龄、性别、吸烟史、病理类型与发生基因突变显著相关(P<0.05),淋巴结转移、肿瘤分期与是否发生基因突变无显著相关性(P>0.05),且罕见靶点突变达占比为6.84%。结论非小细胞肺癌中发生EGFR突变率较高，联合驱动基因检测对临床靶向治疗具有重要指导价值，其中以EGFR基因发生突变最高。

关键词：
基因突变
恶性肿瘤
非小细胞肺癌
驱动基因
鳞癌
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肺癌是全球范围内发病率和病死率最高的恶性肿瘤,国家2022全国癌症报告显示,在我国肺癌在所有男性恶性肿瘤中发病率和病死率均位列第一,在所有女性恶性肿瘤中发病率位列第二,仅次于乳腺癌｡其中,腺癌和鳞癌占比最大,病死率则位列第一,其严重的疾病负担,一直是全世界急需攻克的难题〔1~3〕｡近10年来,随着分子检测技术发展,对非小细胞癌在生物学应用研究取得一定的突破,驱动基因成为临床中对非小细胞肺癌诊断､治疗及预后的一个很好的评价指标,对非小细胞肺癌患者中腺癌及鳞癌进行主要驱动基因检测情况的探讨〔4,5〕,具有重要临床价值｡本研究对非小细胞肺癌患者中腺癌及鳞癌的主要驱动基因进行检测｡

1、材料与方法

1.1临床资料

收集漳州市医院病理科2019年1月至2022年6月做病理组织检查的首次确诊非小细胞肺癌234例患者的肺组织,年龄45~85岁,平均年龄(64.5±7.8)岁｡诊断标准:按照非小细胞肺癌国际TNM分期及世界卫生组织(WHO)非小细胞肺癌组织学病理类型分类标准｡

1.2主要试剂和仪器DNA提取试剂盒(厦门艾德公司)及基因突变检测试剂盒(厦门艾德公司)｡CobasZ480PCR仪;微型干式恒温器(GY2101);ND2000微型紫外分光光度仪｡

1.3DNA､RNA提取严格按照提取试剂盒说明书操作,紫外分光光度仪测定提取样本核酸的纯度和浓度,DNA､RNA的OD260/OD280纯度在1.8~2.1样本为好｡

1.4扩增阻滞突变系统(ARMS)法提取核酸产物为模板,DNA稀释浓度为2~3ng/μl;RNA浓度10~500ng/μl;其中,采用基因突变检测试剂盒〔DNA可检测表皮生长因子受体(EGFR)､Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)､神经母细胞瘤-拉病毒癌基因同源物(NRAS)､V-拉鼠肉瘤病毒癌基因同源物B1(BRAF)､人类表皮生长因子受体(HER)2､磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA);RNA可检测间变性淋巴瘤激酶(ALK)､c-ros癌基因(ROS)1､RET原癌基因(RET)､间质上皮转化因子(MET),其中MET检测14号外显子跳跃突变〕,10种突变探针由5-羧基荧光素(FAM)信号及六氯荧光素叠氮(HEX)､紫罗兰荧光染料(VIC)信号指示,实验均设阴､阳性对照;EGFR的聚合酶链反应(PCR)程序:42℃5min,95℃5min,1个循环;95℃25s,64℃20s,72℃20s,10个循环;93℃25s,64℃35s(采集荧光),72℃20s,36个循环｡

1.5结果判断基因突变结果判定:严格按照试剂盒说明书提供判读标准及检验结果解释进行｡

1.6统计学分析采用SPSS25.0软件进行t､χ2检验｡

2、结果

2.1突变基因的主要类型234例非小细胞肺癌患者中发生基因突变167例(71.37%):其中EGFR基因发生突变最高119例(50.85%),其次为KRAS基因突变25例(10.68%,主要为基因第2外显子突变),ALK(基因融合突变)､HER-2(均为20号外显子的插入突变)各6例(2.56%),RET､ROS1各4例(1.71%,均为基因融合突变),MET2例(0.85%,基因跳跃突变),PIK3CA1例(0.43%)｡ALK+ROS1+RET+MET总共为16例(6.84%)｡

2.2非小细胞肺癌中基因突变状况与临床病理特征的相关性经分析显示,患者年龄､性别､吸烟史､病理类型与基因突变显著相关(P<0.05),淋巴结转移､肿瘤分期与基因突变无显著相关性(P>0.05)｡见表1｡

表1基因突变状况与临床病理特征的相关性(n)

2.3EGFR基因突变EGFR基因突变患者平均年龄(63.21±9.20)岁,其中男平均年龄(63.2±9.02)岁;女平均年龄(62.94±9.21)岁｡其中以19Del和L858R突变比率较高,分别占44.54%和46.22%,且女性高于男性｡见表2｡

表2EGFR基因突变分析(n)

3、讨论

随着近年来基因检测技术的迅速发展,通过针对驱动基因变异的靶向药可显著改善非小细胞肺癌患者的生存质量,延长生存期,且可以对非小细胞肺癌发生发展的认识进一步深入研究,同时可为患者的靶向治疗提供重要指导｡本文基因突变占比结果与其他研究者等〔6,7〕的研究基本一致,基因突变状况与临床病理特征的相关性结果与文献一致〔8~10〕｡

本研EGFR基因突变结果提示,EGFR基因突变更倾向于女性腺癌患者,其中以19外显子缺失(19Del)和21外显子L858R突变比率较高,且女性高于男性｡19Del和21外显子L858R两种突变类型的非小细胞肺癌为EGFR-TKIs敏感性突变,因这两种突变的位点可刺激酪氨酸激酶结构域活化,为此可作为EGFR-TKIs疗效和预后预测优先因子｡同时还发现了其他的突变类型如Exon18的G719X突变､Exon20的20ins和S768I突变及Exon21中的S768I､L858R､L861Q突变类型,并出现三种联合突变形式,如Exon18+21的G719X,L861Q突变､Exon19+20的19Del,T790M突变及Exon21+19的L858R,19Del突变,既往研究认为非小细胞肺癌驱动基因的激活突变是相互排斥的,但近年来已陆续报道非小细胞肺癌中存在两个或以上驱动基因突变〔11~14〕,这应该引起临床的重视｡同时此次纳入研究的234例中也发现了其他KRAS突变､ALK重排/融合突变､HER2基因突变､RET基因融合,MET基因跳跃突变,ROS1基因融合突变,PIK3CA基因突变,在非小细胞肺癌中,这些突变大部分也有相对应的靶向药物使用,且都属于A类证据,特别是美国食品药品监督管理局(FDA)或中国国家食品药品监督管理总局(CFDA)已经批准的在非小细胞肺癌使用靶向药物的靶点检测,如ALK､ROS1､RET､MET等,这部分靶点被认为是罕见靶点,本文这4个罕见靶点的突变率为6.84%｡因此,在非小细胞肺癌的治疗中,除了EGFR主要驱动基因外,应加强其他驱动基因的检测｡

综上所述,通过联合驱动基因筛查为临床提供决策依据,特别是罕见靶点检测将是未来辅助靶向治疗非小细胞肺癌的重点｡本研究虽然样本量收集较少,但发现的如EGFR双位点突变驱动基因共突变的现状不容忽视,今后应该进一步深入研究单基因甚至多基因的协同效应发生的可能机制｡

参考文献:

1郭浩阳,陈浩,汪伟,等.2004~2019年中国肺癌死亡分布及趋势〔J〕.济宁医学院学报,2022;45(3):167-70,175.

2国家卫生健康委办公厅.原发性非小细胞肺癌诊疗指南(2022年版)〔J〕.协和医学杂志,2022;13(4):549-70.

4赫捷,魏文强.2019中国肿瘤登记年报〔M〕.北京:人民卫生出版社,2021:59-98.

6魏丹凤,郭元彪,王战豪,等.四川地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变分型与临床病理特征的相关性分析〔J〕.临床肿瘤学杂志,2018;23(10):915-9.

7祝梦晓,胡晨,何勇.血清肿瘤标志物与非小细胞肺癌驱动基因突变发生率的相关性分析〔J〕.陆军军医大学学报,2022;44(24):2465-73.

8马莉莉,谷飞飞,程春来.新型驱动基因融合阳性非小细胞肺癌脑转移的研究进展〔J〕.现代肿瘤医学,2022;30(23):4387-90.

11庄其宏,陈岚兰,卢芳,等.非小细胞肺癌组织中NOTCH1的表达情况及其与患者临床特征和EGFR基因突变状态的关系〔J〕.癌症进展,2020;18(1):55-7,68.

基金资助:漳州市自然科学基金(2020J011302);漳州卫生职业学院科技创新团队培育计划(kjcx-07);漳州卫生职业学院院本课题(ZWYZ202304,ZWYXJZ202303);

文章来源:郭月丽,梅序桥,黄仲庆,等.中老年人非小细胞肺癌主要驱动基因联合检测突变[J].中国老年学杂志,2025,45(08):1847-1849.