首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 肿瘤科论文 > 肺癌论文 > 皮层肌动蛋白表达水平与NSCLC患者MVD及术后预后的关系

皮层肌动蛋白表达水平与NSCLC患者MVD及术后预后的关系

2023-10-25 59 上传者：管理员

摘要：目的探讨皮层肌动蛋白(cortactin)表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤微血管密度(MVD)及术后预后的关系。方法选取行手术治疗的140例NSCLC患者，于术中获取癌组织及癌旁正常组织，采用免疫组化法检测cortactin表达情况，用CD34标记微血管计算MVD。比较癌组织及癌旁正常组织中表达水平，癌组织cortactin水平与MVD的相关性采用Pearson相关性分析，采用受试者工作特征(ROC)曲线分析cortactin对预后的预测效能。分析cortactin表达与临床病理特征的关系，采用COX比例风险模型分析NSCLC术后预后的影响因素。结果癌组织cortactin表达量(1.09±0.27)明显高于癌旁组织(0.65±0.12;P<0.05)。癌组织中MVD计数为(38.09±7.27)个，Pearson相关性分析显示MVD与cortactin呈正相关(r=0.594,P<0.05)。随访3年，140例NSCLC患者中死亡58例(41.43%),存活82例(58.57%)。单因素、多因素Logistic回归分析显示，临床分级、淋巴结转移、MVD、cortactin均是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。cortactin表达阳性组存活36例(54.55%),死亡30例(45.45%),阴性组中位生存时间[(30.56±2.68)个月]明显高于阳性组[(27.15±2.30)个月；χ2=4.235,P=0.022]。ROC曲线分析显示，cortactin截断值为1.15时，诊断曲线下面积为0.844(95%CI:0.796～0.902),灵敏度为77.59%,特异度为86.59%。结论 NSCLC癌组织中cortactin高表达，且与MVD存在正相关性，是影响NSCLC患者术后预后的危险因素，对于预后具有良好的预测效能。

关键词：
微血管密度
皮层肌动蛋白
肺癌
非小细胞肺癌
预测效能
加入收藏

肺癌是一种常见呼吸系统恶性肿瘤，其中80%～85%的患者为非小细胞肺癌(NSCLC),发病率高居我国恶性肿瘤第一位[1]。尽管NSCLC的诊断和治疗已取得了极大进步和发展，但死亡率仍较高，其中术后复发是影响手术治疗效果的重要因素[2]。随着致癌机制、癌症复发相关理论研究逐渐完善，侵袭与转移属于癌细胞的恶性生物学行为，可增加术后复发风险[3,4]。皮层肌动蛋白(cortactin)属于肌动蛋白结合蛋白，可富集于细胞的侵袭性伪足，从而调控肿瘤细胞的移动和肿瘤侵袭过程[5]。肿瘤血管新生是肿瘤细胞转移的关键途径，使恶性肿瘤发生远处转移成为可能，其中以CD34标记血管内皮细胞进行肿瘤微血管密度(MVD)计数，可反映肿瘤新生血管情况，既往研究亦证实，MVD与肺癌术后复发及肿瘤转移密切相关[6]。目前，关于cortactin对于NSCLC患者术后预后评估价值尚不明确，本研究探讨cortactin在NSCLC肿瘤组织中表达水平，并分析其与MVD及患者术后预后之间的关系。

1、资料与方法

1.1 基本资料

选取2016年5月至2018年9月于医院行手术治疗的140例NSCLC患者，于术中获取肺癌组织及癌旁正常组织，癌旁正常组织距离肿瘤病灶边缘>5 cm, 男74例，女66例。该研究已获伦理委员会批准。纳入标准：(1)经影像学(CT、X线)、病理学、肺穿刺等检测确诊为NSCLC[7];(2)入组后成功施行手术治疗成功，术前均未行抗肿瘤治疗；(3)病例资料完整，依从研究方案，接受术后随访。排除标准：(1)入组前接受过其他治疗，放疗、化疗等；(2)既往肺部手术史，复发性肺癌；(3)存在其他原发性恶性肿瘤；(4)死于NSCLC以外的其他因素；(5)严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍；(6)缺乏随访资料。

1.2 一般资料收集

收集受试者的临床资料，包括性别、年龄、吸烟、TNM分期、癌症类型、淋巴结转移、生存情况。电话随访获取患者术后3年内的生存情况，如是否死亡及死亡时间。

1.3 采用免疫组化法检测癌组织、癌旁组织cortactin表达水平

术中获取癌组织、癌旁正常组织，甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续切片(厚度4 μm),常规脱蜡，脱苯，水化，行抗cortactin免疫组织化学染色。焦碳酸二乙酯(DEPC)抗原进行热修复，3% H2O2灭活内源性过氧化物酶。加入山羊血清，37 ℃孵育0.5 h, 加入cortactin抗体(1∶500),4 ℃过夜。磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次，加入山羊抗兔辣根过氧化酶标记的二抗，37 ℃孵育0.5 h, PBS冲洗3次，二氨基联苯胺(DAB)溶液显色，蒸馏水漂洗、苏木素复染，脱水、中性树胶封片。每张切片中随机选取10个400倍视野，采用Image-Pro Plus6.0软件计cortactin的积分光密度(IOD),取平均值为最终结果，以PBS代替一抗作为阴性对照，计算组织中cortactin相对表达量(相对IOD值)。

1.4 MVD

癌组织经固定、脱水、石蜡包埋，以CD34标记肿瘤微血管，低倍镜(×100)下观察切片，寻找3个最强的新生血管形成区域，微血管计数取均值，其中具有较厚肌层的或者血管腔内≥8个红细胞的血管排除在外。

1.5 随访

随访8～36个月，随访截至2021年9月30日，每3个月1次电话随访，询问患者生存情况，若患者生存时间低于3年，记录生存时间，并终止随访。入组146例患者中6例失访。

1.6 统计学分析

采用SPSS20.0软件进行χ2检验、独立样本t检验、Pearson相关性分析，术后生存率采用Kaplan-Meier曲线表示，采用COX比例风险模型分析NSCLC术后预后的影响因素。

2、结果

2.1 cortactin在NSCLC癌组织和癌旁组织中的表达情况

癌组织cortactin表达量(1.09±0.27)明显高于癌旁组织(0.65±0.12;t=17.118,P<0.001),见图1。

2.2 癌组织中cortactin表达量与MVD计数的关系

癌组织中MVD计数为(38.09±7.27)个，Pearson相关性分析显示MVD与cortactin呈正相关(r=0.594,P<0.05)。

2.3 影响预后的关系

随访3年，140例 NSCLC患者中死亡58例(41.43%)。单因素研究结果显示，临床分级、淋巴结转移、MVD、cortactin与NSCLC患者预后存在相关性(P<0.05),即死亡患者临床分级多为Ⅲ级，淋巴结转移比例及MVD计数、cortactin表达水平较高，见表1。

图1 cortactin在癌旁组织及癌组织中阳性表达(免疫组化，×400)

表1 影响NSCLC患者预后的单因素分析(n) 导出到EXCEL

2.4 癌组织cortactin表达量对预后的预测价值

以生存情况(存活=0,死亡=1)为因变量，对癌组织cortactin表达量预测患者预后价值进行ROC分析结果显示，cortactin截断值为1.15时，诊断曲线下面积为0.844(95%CI:0.796～0.902),灵敏度为77.59%,特异度为86.59%,约登指数为0.594,见图2。

2.5 采用COX比例风险模型分析NSCLC术后预后的影响因素

以生存情况(存活=0,死亡=1)为因变量，以单因素分析中具有显著差异的变量为自变量，采用COX比例风险模型分析，各变量赋值为：临床分级：Ⅰ级=0,Ⅱ级=1,Ⅲ级=2;淋巴结转移：否=0,是=1;MVD:测量值；cortactin: ≤1.15=0;>1.15=1。结果显示临床分级(HR=1.962,95%CI:1.260～3.056)、淋巴结转移(HR=1.881,95%CI:1.057～3.348)、MVD(HR=2.309,95%CI:1.147～4.649)、cortactin(HR=2.477,95%CI:1.214～5.055)均是影响患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。

2.6 cortactin表达量对总生存期情况的影响

截止末次随访时间，阴性组中位生存时间[(30.56±2.68)个月，n=74]明显高于阳性组[(27.15±2.30)个月，n=66;χ2=4.235,P=0.022],见图3。

图2 cortactin预测NSCLC患者预后的ROC曲线

图3 cortactin表达量对NSCLC患者3年生存情况的影响

3、讨论

NSCLC的发病率、死亡率均较高，其在病程早期便可通过淋巴结、血液循环等途径发生转移，研究认为，转移是导致NSCLC患者死亡的主要原因[8]。cortactin是一种新的肌动蛋白结合蛋白，属于细胞骨架重组的关键性调节蛋白，可以与纤维状肌动蛋白(F-actin)连接，调控细胞骨架重组、细胞黏附及肿瘤细胞侵袭，且研究已证实，其与恶性肿瘤患者的病理分期密切关联，影响肿瘤进展[9,10]。既往研究表明，cortactin在多种恶性肿瘤中过量表达，包括直肠癌、乳腺癌、结脑胶质细胞瘤等，且cortactin的表达与恶性肿瘤细胞的侵袭转移、迁移血管生成等方面密切相关[11]。Uzair等[12]研究认为，cortactin参与肿瘤转移的机制可能与肌动蛋白相关蛋白(Arp)2/3复合体存在协同效应，诱导F-actin骨架的重构，从而调控肿瘤细胞的侵袭与转移。尽管有众多的相关研究，但cortactin促进的恶性肿瘤侵袭和转移的相关机制尚未达成共识，且其在NSCLC中的表达情况及对预后的影响也尚不明确。

本研究结果表明，cortactin在NSCLC癌组织中处于高表达状态，参与调控疾病的发生发展过程。肿瘤血管新生是肿瘤微环境的重要特征，与肿瘤的不良预后有关，新生血管结构及功能异常，血管基质不完善，容易发生渗漏，故而肿瘤细胞可直接穿过血管内进入血流，并在远隔部位形成转移，增加了肿瘤转移风险[13,14,15,16]。本研究结果表明，cortactin可能通过促肿瘤血管生成而诱导疾病进展。分析认为，cortactin在血管内皮细胞中普遍表达，调控细胞骨架重组及迁移，cortactin可能是恶性肿瘤血管形成过程中的关键因子之一[17,18]。

本研究结果表明，临床分级Ⅲ级、淋巴结转移、cortactin高表达、MVD高值均可增加术后不良预后风险。李恒等[19]、Yamada等[20]研究发现，高的临床分级(Ⅲ～Ⅳ)、淋巴结转移NSCLC患者癌组织中cortactin表达阳性率较高，恶性程度越高，临床分级及淋巴结转移是肿瘤侵袭和转移的结果，可增加术后复发风险，故而是影响NSCLC患者术后预后的危险因素。增殖、侵袭可增加术后复发、死亡风险，以上这些参数直接反映NSCLC的增殖、侵袭转移情况，可推测cortactin高表达的患者肿瘤恶性程度较高，预后较差，需重点关注cortactin高表患者，术后定期复查。

本研究结果表明，cortactin水平与NSCLC患者的远期预后密切关联，即cortactin表达量越高则死亡风险越高。cortactin是位于染色体11q13的多结构域蛋白，通过与肌动蛋白相关蛋白Arp2/3复合物结合，诱导肌动蛋白网络分支的形成，促进肿瘤细胞形成片状伪足，进而增加了肿瘤细胞的侵袭、迁移等能力[10,21,22]。研究[10,23,24]证实，cortactin在头颈部鳞状细胞癌组织中过度表达，且表达水平与组织学分级恶性程度增高、远处淋巴结转移、无病生存期缩短、局部复发率增加及5年总生存率下降相关，结合本次结果进一步证实cortactin高表达患者恶性程度高，不良预后风险高。研究表明，磷酸化黏着斑激酶可以通过PRR2和PRR2区域而与cortactin直接相连，进而使黏着斑重塑，同时cortactin还能分泌金属蛋白激酶，降解局部基质蛋白，提高了肿瘤细胞的移动能力[25]。黏着斑激酶(FAK)-Src复合体可以导致cortactin蛋白磷酸化，研究证实cortactin磷酸化程度与诱导肿瘤细胞潜力能力呈正相关性[26,27]。另外，龙谦等[28]通过体外细胞实验证实，采用小干扰RNA技术抑制肺癌A549细胞表达cortactin, 其的侵袭、迁移能力明显降低，cortactin表达与肺癌患者生存预后有关，有望成为肺癌治疗的新靶点。本研究结果进一步表明，cortactin具有良好的预测价值，可作为NSCLC预后的标志物。

综上，NSCLC癌组织中cortactin高表达，且与MVD存在正相关性，是影响NSCLC患者术后预后的危险因素，对于预后具有良好的诊断效能。

参考文献:

[1]陈宏达,郑荣寿,王乐,等.2019年中国肿瘤流行病学研究进展[J].中华疾病控制杂志,2020;24(4):7-13.

[5]黄琰菁,王琳,李赛,等.非小细胞肺癌组织TFAP4表达及其对A549增殖和侵袭影响[J].中华肿瘤防治杂志,2019;26(11):778-83.

[7]王丽.中国原发性肺癌诊疗规范(2015年版)[J].中华肿瘤杂志,2016;37(7):433-6.

[9]林宇斌,仲艾芳,刘胜华,等.皮层肌动蛋白结合蛋白Cortactin研究进展[J].吉林医学,2018;39(12):2367-71.

[15]王冬宇,路静.肿瘤微环境对肿瘤血管生成的影响[J].肿瘤,2018;38(4):379-85.

[16]赵川,李俊萱,刘雪梅,等.肿瘤血管生成机制的研究进展[J].中华中医药学刊,2017;35(1):130-2.

[17]孙波,于涓瀚,齐新阳,等.Cortactin及FAKPY397在非小细胞肺癌中的表达及关系[J].现代肿瘤医学,2015;23(4):464-7.

[19]李恒,冯雨,黄云超,等.Cortactin在非小细胞肺癌中的表达及其与临床特征的关系探讨[J].肿瘤预防与治疗,2013;26(5):255-8.

[22]王月,徐振华,苏荣健.外分泌葡萄糖调节蛋白78对肝细胞癌侵袭的影响[J].中国医科大学学报,2018;47(7):589-92.

[23]杨阳,李校天,张九娜,等.血管内皮生长因子C和皮层肌动蛋白在食管鳞癌细胞中的表达及其临床意义[J].医学研究生学报,2019;32(5):59-63.