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采用QuE-UPLC/MS/MS法测定动物源性食品中氯霉素类药物的残留量

2020-06-12 407 上传者：管理员

摘要：本文采用QuE-UPLC/MS/MS法测定猪肉、草鱼、牛奶、蜂蜜等动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素的残留量。该方法使用乙腈作为提取溶剂,样品经搅匀、涡旋、振荡、离心、净化处理后上机分析。本方法的优点体现在样品前处理方法简易、省时,能够同时检测氯霉素和甲砜霉素两种目标组分,在节省了检测时间的同时降低了基质效应;氯霉素和甲砜霉素的回收率均可达到85%以上,确保了实验结果的准确性和重现性;氯霉素和甲砜霉素的检出限均为0.1μg/kg,优于《可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定液相色谱-串联质谱法》(GB/T20756-2006)的检测方法。

关键词：
QuE-UPLC/MS/MS
分析化学
残留量
氯霉素
甲砜霉素
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氯霉素又名氯胺苯醇,是一种广谱抗菌素,可有效抑制革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌等多种病原菌[1]。由于氯霉素具有面世时间早、药性稳定、价格便宜等优点,曾被广泛应用于畜禽疾病的控制与治疗[2]。但是,食品中残留的氯霉素会对人体健康造成威胁,如可逆性骨髓抑制、神经系统受损等,故西方发达国家已将氯霉素列为违禁药物[3]。我国现行有效标准《动物源性食品中兽药最高残留限量》(农业部第235号公告)中也明确规定,氯霉素在动物源性食品中不得检出[4]。甲砜霉素是氯霉素的同类物[5],其抗菌谱和抗菌作用与氯霉素相仿——具有广谱抗微生物作用,可有效杀灭流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌[6]。作为氯霉素的替代品,甲砜霉素能有效克服氯霉素导致的再生障碍性贫血的副作用[7],故被广泛应用于动物源性食品的生产以防治畜禽由流感杆菌、大肠杆菌、沙门菌属感染导致的呼吸系统、肝胆系统、泌尿系统和消化系统疾病[8],但甲砜霉素残留量过高也会对人体健康造成危害。因此,全球各国分别制定了甲砜霉素在肉类食品中的最高残留限量[9]。我国农业部第235号公告中规定,食品中甲砜霉素的最大残留限量为50μg/kg。

表1实验梯度洗脱程序设置参数

由于动物源性食品中氯霉素类药物残留量超标会影响肉、蛋、奶等食品的安全性,不仅会对人体健康产生危害,还不利于我国养殖业的健康发展,更会对我国农产品的出口造成不利影响[10]。因此,开发一种简便、高效、安全的氯霉素类兽药残留检测方法已迫在眉睫。本研究利用QuE-UPLC/MS/MS法测定草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜等动物源性食品中氯霉素类药物的残留量,希望能对相关检测工作起到借鉴作用。

1、材料和方法

1.1所需仪器设备和试剂样品

1.1.1仪器设备

WatersXevoTQD三重四极杆液质联用仪,沃特世公司;ME204T分析天平,梅特勒-托利多集团;EPED-PLUS-E3超纯水机,南京易普易达科技发展有限公司;HD-2500多管漩涡混合仪,杭州佑宁仪器有限公司;MV5多通道平行浓缩仪,北京莱伯泰科仪器股份有限公司。

1.1.2试剂样品

市售草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜等动物源性食品;色谱纯乙腈,氯霉素、甲砜霉素标准品,坛墨质检;ProElutQuE2mLTube固相萃取净化管、0.22μmProMax尼龙针头式滤器,迪马科技。

1.2操作方法

1.2.1提取

1.2.1.1猪肉、草鱼、蜂蜜样品

依次在15mL离心管中加入5.0g待测样品、2.0gNaCl,搅拌均匀后加入5.0mL乙腈,在多管漩涡混合仪中涡旋混匀1min。振荡5min,8000rpm下离心3min,取1mL上清液待净化。

1.2.1.2牛奶样品

在15mL离心管中加入5.0g待测样品、2.0gNaCl,搅拌均匀后加入2.5mL乙腈,在多管漩涡混合仪中涡旋混匀1min。振荡5min,8000rpm下离心3min,取1mL上清液待净化。

1.2.2净化

将1mL提取液转移到ProElutQuE2mLTube固相萃取净化管,涡旋混合30s。10000rpm下离心1min,取上清液500μL于浓缩管中,加水100μL,涡旋混匀,室温下氮吹至剩余约100μL溶液,加水定容至500μL,混匀,过0.22μm微孔滤膜,进LC-MS/MS分析。

1.2.3色谱条件

1.2.3.1UPLC条件

色谱柱C18:100×2.1mm,1.8μm;流速:0.2mL/min;进样量:5μL;柱温:35℃;流动相A:10mmol/L乙酸铵,流动相B:乙腈;实验梯度洗脱程序设置参数如表1。

1.2.3.2质谱条件

电离模式:ESI;扫描方式:负离子扫描;检测方式:多反应监测;电喷雾电压:-4500V;雾化器压力:50psi;辅助气气压:50psi;气帘气压力:20psi;离子源温度:500℃。

2、结果与讨论

2.1提取溶剂的选择

查阅文献可知,氯霉素类药物残留的提取剂有乙腈、乙酸乙酯[11]、水[12]等,本实验比较了3种不同的提取溶剂对提取效果的影响。实验数据表明,以乙腈作为提取溶剂时,提取效果优于乙酸乙酯和水,故本实验选用乙腈作为提取溶剂。

2.2色谱条件的优化

本研究分别以10mmol/L乙酸铵-乙腈、水-甲醇[13]、水-乙腈[14]为流动相,按照“1.2.3.1”中的梯度洗脱条件进行检测。由实验结果可知,以10mmol/L乙酸铵-乙腈作为流动相时对氯霉素、甲砜霉素的分离效果最好,色谱峰尖锐、对称,响应灵敏度最高。

2.3标准曲线和检出限

本实验目标组分在0.25～50μg/kg的范围内线性关系良好,回归方程y=0.0084x+0.0366,相关系数R2=0.9932。采用在空白猪肉样品中添加目标组分的方法,依据GB/T27415-2013[15]的规定计算得出本实验最低定量限在0.25μg/kg,检测限为0.1μg/kg。

2.4精密度和回收率试验

分别向空白草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜等样品中添加2个浓度水平的氯霉素、甲砜霉素标准溶液,进行回收率实验,结果见表2。氯霉素、甲砜霉素的回收率分别为85.8%～96.4%,87.3%～97.1%,相对标准偏差为0.8%～1.3%。

3、结论

本文建立了一种动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法,即采用乙腈作为提取溶剂,样品经搅匀、涡旋、振荡、离心、净化处理,然后上机分析。本方法的优点为,样品前处理方法简易、省时,并且能够同时检测氯霉素和甲砜霉素两种目标组分,在节省检测时间的同时降低了基质效应;氯霉素和甲砜霉素的回收率均达到85%以上,确保了实验结果的准确性和重现性;氯霉素和甲砜霉素的检出限均为0.1μg/kg,优于国家标准GB/T20756-2006的检测方法。

表2实验回收率测定结果表

参考文献：

[1]赵文亚.水产品中氯霉素残留分析技术的研究[D].南京农业大学,2003.

[2]蔡梦迪,蔡波,郑添裕.食品中残留氯霉素的检测方法研究[J].科技风,2015(12):142-143.

[3]戴华,王美玲,李拥军,等.饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素含量的HPLC测定方法[J].光谱实验室,2006(06):82-86.

[4]农业部畜牧兽医局.农业部发布动物性食品中兽药最高残留限量[J].中国兽药杂志,2003,25(2):5-11.

[5]陈月虎.对甲砜基苯甲醛衍生物的合成、结构分析与抗菌活性研究[D].山东理工大学,2012.

[6]何俊莎,毛以智,王兴群.甲砜霉素的抗菌作用和毒、副作用[J].养殖与饲料,2010(4):47-49.

[7]韩飞,张曼,张周,等.甲砜霉素临床应用及残留检测的研究进展[J].陕西农业科学,2014,60(7):55-58.

[8]陆广富,陈晓兰,卜仕金.鸡组织中甲砜霉素残留HPLC检测方法[J].中国兽医杂志,2008(2).

[9]马素英.动物性食品中氯霉素和甲砜霉素残留的定量及确证方法建立[D].华中农业大学,2005.

[10]陈一资,胡滨.动物性食品中兽药残留的危害及其原因分析[J].食品与生物技术学报,2009(02):24-28.