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miR-363-3p在多发性骨髓瘤中的表达意义及其与预后的关系

2021-09-27 113 上传者：管理员

摘要：目的:分析多发性骨髓瘤(MM)患者血浆微小核糖核酸-363-3p(miR-363-3p)表达意义,并评估其与预后关系。方法:回顾性分析北京航天总医院106例MM患者临床资料,并纳入32例健康体检者作为对照组,记录2组血浆miR-363-3p表达水平差异。根据MM患者血浆miR-363-3p表达水平分为高表达组(≥平均值)和低表达组(<平均值),比较2组临床特征及疗效,并评估MM患者血浆miR-363-3p表达水平与临床特征、疗效的相关性;使用Kaplan-Meier生存分析法评估2组预后生存情况。结果:MM患者血浆miR-363-3p相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。高表达组与低表达组间性别、年龄、免疫球蛋白分型、DS分期及血钙、血红蛋白水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);但2组间国际分期体系(ISS)分期存在显著差异(P<0.05),且高表达组临床疗效显著高于低表达组(P<0.05)。经Spearman秩相关分析发现,MM患者血浆miR-363-3p表达水平与ISS分期呈显著负相关(r=-0.421,P<0.05),与临床疗效呈显著正相关(r=0.533,P<0.05)。随访36个月时,高表达组生存31例(56.36%),低表达组生存18例(35.29%),Kaplan-Meier生存分析及LogRank检验显示,高表达组生存率明显高于低表达组(P<0.05)。结论:miR-363-3p在MM患者血浆中表达下调,其表达水平能评估MM患者病情及临床疗效,还能判断患者预后生存情况。

关键词：
miR-363-3p
临床特征
多发性骨髓瘤
生存时间
预后
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多发性骨髓瘤是血液系统第二位常见恶性肿瘤，为克隆性浆细胞异常增殖的恶性疾病，目前无法获得治愈。随着诊断技术的发展及新药的不断问世，MM诊疗得到改进及完善，但患者预后并未显著改善，5年生存率仅为30%～40%。因此，寻找MM及调控MM细胞恶性行为的潜在机制成为近年研究的热点。微小核糖核酸为19～25个核苷酸长度的非编码RNA,可参与多种实体肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡过程，能发挥类似于癌基因或抑癌基因作用。目前，miR-363-3p被发现与胃癌、结直肠癌、宫颈癌等恶性肿瘤发生发展相关，miR-363-3p与MM的关系国内外报道均较为少见。基于此，本研究就MM患者血浆miR-363-3p表达水平与临床特征及预后的关系展开分析，为MM诊疗提供新靶点，现报告如下。

1、资料与方法

1.1对象

回顾性分析2015年2月—2017年12月我院106例MM患者临床资料。纳入标准：①经骨髓穿刺病理学检查确诊且符合《中国多发性骨髓瘤诊治指南(2015年修订)》诊断标准；②首次诊疗；③病理检查、预后随访等资料完整。排除标准：①合并其他血液系统疾病、恶性肿瘤；②既往行抗肿瘤治疗；③伴结核等感染性疾病；④妊娠或哺乳期女性。并纳入32例健康体检者作为对照组。MM患者男58例，女48例；年龄39～69(58.52±9.22)岁。对照组男18例，女14例；年龄35～66(57.03±9.10)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义，具有可比性(P>0.05)。根据MM患者血浆miR-363-3p表达水平不同，又将其分为高表达组(≥0.492)55例和低表达组(<0.492)51例。

1.2方法

收集MM患者清晨空腹外周静脉血5mL,对照组则收集体检时空腹静脉血5mL,经1200r/min离心10min,分离血浆，保存于-80℃;取200μL样本，采用Trizol法提取血浆总RNA,以1μg总RNA为模板行反转录合成互补脱氧核糖核酸,反转录使用反转录试剂盒(日本TakaraBioInc公司生产);最后行实时荧光定量聚合酶链式反应(德国QIAGEN公司),U6为内参，以2-ΔΔCt分析miR-363-3p表达量；引物序列如下，miR-363-3p上游引物5′-ACACTCCAGCTGGGGAATTGCACGGTATCCA-3′,下游引物5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′,U6上游引物5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,下游引物5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′,均由美国Invitrogen公司提供。

收集MM患者国际分期体系分期、Durie-Salmon(DS)分期及血钙、血红蛋白等临床资料；MM患者均行硼替佐米为基础的联合化疗，以3周为1个疗程，均接受4～6个疗程的化疗，采用国际骨髓瘤工作组制定的统一疗效标准评估疗效，总有效率=(完全缓解+部分缓解)/总例数×100%;所有患者行36个月的随访观察。

1.3统计学方法

应用SPSS21.0进行统计学分析，计量资料以x¯±s表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料以例(%)表示，采用χ2检验；相关性分析采用Spearman秩评估；使用Kaplan-Meier生存分析法及LogRank检验评估预后生存情况；以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1MM组与对照组血浆miR-363-3p表达水平比较

MM患者血浆miR-363-3p相对表达量(0.492±0.098)显著低于对照组(1.196±0.218)(t=25.838,P<0.05)。

2.2高表达组与低表达组临床特征比较

高表达组与低表达组在性别、年龄、免疫球蛋白分型、DS分期及血钙、血红蛋白水平等方面比较，差异无统计学意义(P>0.05),但2组间ISS分期存在显著差异(P<0.05),见表1。

2.3高表达组与低表达组临床疗效比较

高表达组临床疗效显著高于低表达组(P<0.05),见表2。

2.4MM患者血浆miR-363-3p表达水平与其临床特征、临床疗效的相关性分析

经Spearman秩相关分析发现，MM患者血浆miR-363-3p表达水平与ISS分期呈显著负相关(r=-0.421,P<0.001),与临床疗效呈显著正相关(r=0.533,P<0.001)。

2.5高表达组与低表达组预后生存情况分析

随访36个月时，高表达组生存31例(56.36%),低表达组生存18例(35.29%),经Kaplan-Meier生存分析法绘制生存曲线，见图1;经LogRank检验，高表达组生存率明显高于低表达组(χ2=5.719,P=0.017)。

3、讨论

miR为非编码RNA,对50%以上蛋白质编码基因有调节作用，可与靶基因3′UTR区结合而发挥抑制翻译的功能，可在多种恶性肿瘤的发生发展中发挥作用。有报道认为miR-363的过表达可抑制人类神经母细胞瘤细胞浸润转移能力，miR-363-3p可在胃癌等恶性肿瘤组织中呈低表达，且表达水平与分化程度、病理分期等临床特征相关。近年，Gowda等及Chen等也发现，miR-363在MM中低表达，且前列腺癌相关转录因子1不仅能调节β-catenin/Akt信号通路参与肿瘤细胞的增殖，还可通过调节miR-363-3p/metadherin蛋白轴参与MM的发生发展。然而，miR-363-3p与MM之间是否存在联系，相关报道仍然较少。本研究发现，MM患者血浆miR-363-3p相对表达量显著低于对照组，提示miR-363-3p在MM患者血浆中呈低表达，可能成为潜在的MM标志物。

本研究还就MM临床特征与血浆miR-363-3p表达水平的关系展开分析，发现高表达组与低表达组ISS分期存在显著差异，且MM患者血浆miR-363-3p表达水平与ISS分期呈显著负相关。其中ISS分期是2005年国际骨髓瘤工作组制定的分期系统，包含白蛋白及β2微球蛋白2个简单、客观指标，MM发病时，β2微球蛋白大量合成入血，可在一定程度上反映机体肿瘤负荷情况。因此，上述结果也说明miR-363-3p表达水平越高，MM患者肿瘤负荷越小，miR-363-3p在MM中可能发挥抑癌基因作用。另据文献报道，血钙增高、贫血等也是MM常见骨髓瘤相关器官功能损害临床表现。本研究中，血浆miR-363-3p表达水平不同者血钙、血红蛋白水平比较无显著差异，提示miR-363-3p表达与上述MM常见临床表现无相关性。

硼替佐米为主的方案是MM的一线治疗，良好的疗效是控制MM病情、改善患者预后的关键。本研究结果显示，经硼替佐米为基础的治疗后，高表达组临床疗效显著高于低表达组，且MM患者血浆miR-363-3p表达水平与临床疗效呈显著正相关。这也表明，miR-363-3p高表达者行硼替佐米为基础的联合化疗疗效更好。究其原因可能与miR-363-3p在MM中发挥抑癌基因作用，miR-363-3p高表达者对化疗治疗更为敏感有关。不仅如此，在随访36个月期间，血浆miR-363-3p表达不同者生存情况也不同，高表达组生存率明显高于低表达组，提示miR-363-3p高表达者不仅能获得良好的化疗疗效，还能有更长的生存时间，预后更佳。这也与miR-363-3p高表达时，MM患者肿瘤负荷越小，其抑癌基因作用也能有效控制病情进展，患者能获得更好的预后有关。然而，本研究为回顾性分析，收集资料有限，未对miR-363-3p作用于MM的相关机制做进一步分析，也是本研究存在的缺陷，还需后续前瞻性研究进行深入分析。