首页 > 论文范文 > 农业科技论文 > 畜牧综合论文 > 兽医学论文 > 围产期氟摄入对子代小鼠肝脏CAT表达的影响

围产期氟摄入对子代小鼠肝脏CAT表达的影响

2023-12-19 102 上传者：管理员

摘要：为研究围产期氟摄入对子代小鼠肝脏过氧化氢酶（CAT）表达的影响，本试验将48只怀孕昆明小鼠随机分成4组：对照组（饮用蒸馏水）、低氟组（氟化钠浓度为25 mg/L的蒸馏水）、中氟组（氟化钠浓度为50 mg/L的蒸馏水）、高氟组（氟化钠浓度为100 mg/L的蒸馏水）。母鼠分娩21 d后，每组选取雄性仔鼠6只，断颈处死采血，摘取肝脏。通过HE染色观察肝组织结构，免疫组织化学技术检测CAT表达量。结果显示，与对照组相比，低氟组局部区域肝细胞坏死，肝窦有充血肿胀且空腔变大，胞浆结构疏松；中氟组和高氟组肝细胞局部坏死、细胞核溶解，肝窦叶间静脉淤血，细胞排列紊乱，过氧化氢酶表达量显著下降（P<0.01）。结果表明，围产期氟摄入可造成子代小鼠过氧化氢酶的表达降低和肝脏功能损伤。

关键词：
围产期
小鼠
氟摄入
肝脏
过氧化氢酶
加入收藏

氟元素广泛存在于自然环境中，是人类生命活动必需的微量元素之一，但长期摄入高剂量的氟化物不仅会侵害机体的牙齿、骨骼，导致氟斑牙、氟骨症等疾病，还会对非骨相器官组织，如肝脏、脾脏、肾脏、胃肠道、脑、中枢神经系统、甲状腺等造成广泛性的损伤[1,2,3,4]。氟中毒会引起肝脏发生退行性病变，光镜下可见索状肝细胞、疏松的细胞浆结构。研究证明，氟在体内堆积过多可引起肝脏发生脂质过氧化反应，导致机体产生较多的氧自由基[5]，这些氧自由基可通过抗氧化酶催化反应转化为氧气和二氧化碳。细胞中抗氧化酶主要有过氧化氢酶（Catalase,CAT）、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶等。前期文献表明，氟中毒可以引起肝脏中CAT的活性显著降低，导致体内产生过量的自由基无法清除，进而引发多种疾病[6,7,8]。目前尚缺乏关于围产期氟摄入是否会对子代肝脏CAT表达产生影响的文献报道。

本研究通过给围产期小鼠饮用添加不同浓度氟化钠的蒸馏水建立氟中毒动物模型，取子代小鼠肝脏，使用HE染色观察子代小鼠肝脏细胞的形态结构，通过免疫组化技术检测肝脏组织中CAT的表达量，旨在研究围产期氟摄入对子代小鼠肝脏损伤及CAT表达的影响。

1、材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂

DAB显色试剂盒（博士德生物公司）；SABC免疫组化染色试剂盒（博士德生物公司）；免疫组化专用PBS；一抗为兔抗鼠Catalase Polyclonal Antibody(Proteintech公司）；二抗为羊抗兔Ig G-Biotin（博士德生物公司）；0.01 M枸橼酸盐缓冲液；30%H2O2溶液；粘附载玻片；氟化钠、蒸馏水、乙醇、二甲苯等常规实验室药品。

1.1.2 试验动物

怀孕昆明小鼠48只，由山西医科大学实验动物中心提供，均为普通级动物。小鼠饲料为标准颗粒饲料，由实验动物中心配制提供。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的建立

将48只怀孕昆明小鼠随机分为4组饲养，即对照组（A组）、低氟组（B组）、中氟组（C组）、高氟组（D组）。其中对照组（A组）供给蒸馏水，低氟组（B组）为含25 mg/L氟化钠的蒸馏水，中氟组（C组）为含50 mg/L氟化钠的蒸馏水，高氟组（D组）为含100 mg/L氟化钠的蒸馏水。直到母鼠分娩21 d后，每组随机选取雄仔鼠6只，断颈处死采血，采集的血液室温静置2 h后3 000 r/min离心10 min，取上层血清，放置在-20℃冰箱保存备用转氨酶的测定；摘取肝脏，以4%多聚甲醛固定，4℃保存。

1.2.2 肝脏组织石蜡切片制作

肝脏组织在4%多聚甲醛中固定约24 h以后，取出组织进行修块，并转移到75%酒精中过夜，置于梯度酒精中脱水，并用二甲苯透明，在石蜡中完成浸蜡与包埋。之后，在切片机上将组织切成5μm的薄片，在37℃摊片机中摊片，60℃烤片。

1.2.3 免疫组织化学切片制作

依次进行常规脱蜡、切片煮沸热修复抗原、SABC法免疫组织化学染色、DAB显色、封片，然后在显微镜下对免疫组化后的切片进行观察与分析，用图像分析软件Image-Pro对光镜下黄色或棕黄色进行分析，每组观察12张免疫组化切片，用IOD/Area（积分光密度与所在区域的比值）指示CAT的表达量。

1.3 数据统计

应用统计学软件Graphpad Prism 6.0进行方差分析。*P﹤0.05代表差异显著，**P﹤0.01代表差异极显著。

2、试验结果

2.1 肝脏组织切片观察

由图1可知，对照组小鼠肝脏组织结构紧密，肝小叶紧密有序。低氟组局部区域肝细胞坏死，肝窦有充血肿胀且空腔变大，胞浆结构疏松，中氟组和高氟组肝细胞局部坏死、细胞核溶解，肝窦叶间静脉淤血，细胞排列紊乱。

2.2 肝脏CAT免疫组化结果

由图2和表1免疫组化结果显示，新生仔鼠肝脏中CAT含量随着氟化物添加量的增加而减少，氟摄入组均比对照组有所降低，且中氟组、高氟组与对照组相比差异极显著（P<0.01）。试验结果表明，中氟组、高氟组氟摄入可明显降低肝脏抗氧化功能，增加自由基在肝脏中的蓄积。

图1 围产期氟摄入对子代小鼠肝脏组织形态结构的影响(H.E.400X)

图2 围产期氟摄入对子代小鼠肝脏CAT表达的影响

表1 肝脏CAT含量测定结果（平均值±标准误）

3、讨论与结论

肝脏是机体重要的解毒场所，是体内最大的消化腺，具有解毒、代谢、分泌胆汁、免疫防御等多种功能[9]。CAT是以铁卟啉为辅基的结合酶，它可促使H2O2分解为氧分子和水，清除体内多余的过氧化氢，从而保护细胞免受H2O2损伤，是生物机体防御系统的关键酶之一。机体发生氧化应激时，肝脏中CAT分泌量增加，以预防氧自由基对机体可能造成的氧化损伤。关于氟化物能刺激细胞产生氧自由基的问题提出较早，二十世纪七八十年代，国外的一些学者就已经提出了氟化物能够刺激细胞产生氧自由基的问题[10,11]。在氟中毒大鼠肝细胞凋亡的研究中发现，氟化物的毒性可导致肝细胞凋亡，从而致使机体抗氧化能力降低[6]。

本试验肝脏组织切片显示，低氟组局部区域肝细胞坏死，肝窦有充血肿胀且空腔变大，胞浆结构疏松，中氟组和高氟组肝细胞局部坏死、细胞核溶解，肝窦叶间静脉淤血，细胞排列紊乱。免疫组化结果显示，新生仔鼠肝脏中CAT随着氟化物添加量的增加而减少。这些结果表明围产期氟摄入可造成子代小鼠过氧化氢酶的表达降低和肝脏功能损伤。

参考文献:

[3]王量,范红结.过量氟对动物机体的影响[J].中国畜牧兽医,2014, 41(4):119-122.

[4]张慧慧,李瑞,王婧,等.添加GSH对氟中毒小鼠肾脏SOD和CAT活性的影响[J].山西农业科学, 2018, 46(10):1631-1633.

[5]李勇,孔令青,高洪,等.自由基与疾病研究进展[J].动物医学进展, 2008, 29(4):85-88.

[6]姜宜成,沈成兴.抗氧化酶基因转染治疗心血管疾病的研究进展[J].中国心血管杂志, 2012, 17(1):70-72.

[7]赵阳飞. IL-17及其受体通路在氟致小鼠肝脏损伤中的机制研究[D].晋中:山西农业大学, 2019.

[8]朱璐,张玉良,张雯,等.氟中毒对子代雄性小鼠肾脏中过氧化氢酶表达的影响[J].畜牧兽医科技信息, 2014(11):32-33.

文章来源:陈诗琪,张佳慧,丁斓等.围产期氟摄入对子代小鼠肝脏CAT表达的影响[J].山东畜牧兽医,2023,44(12):7-9.