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干眼患者结膜上皮细胞及泪液中TLR4和NF-κB的表达及临床意义

2025-06-03 61 上传者：管理员

摘要：干眼发病率较高,是较为常见的眼部疾病,年龄､生活环境､生活方式等因素都与干眼的发病有关[1-2]｡干眼多因患者泪液分泌不足､成分异常等原因导致,引发患者眼疲劳､眼部不适,严重可导致视力下降､角膜损伤等不良情况,影响患者日常生活[3]｡目前多使用药物替代泪液､促进泪液分泌或使用抗炎药物对患者进行治疗,缓解患者症状[4]｡

关键词：
Toll样受体4(TLR4)
干眼
核因子κB(NF-κB)
眼部疾病
诊断
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干眼发病率较高,是较为常见的眼部疾病,年龄､生活环境､生活方式等因素都与干眼的发病有关[1-2]｡干眼多因患者泪液分泌不足､成分异常等原因导致,引发患者眼疲劳､眼部不适,严重可导致视力下降､角膜损伤等不良情况,影响患者日常生活[3]｡目前多使用药物替代泪液､促进泪液分泌或使用抗炎药物对患者进行治疗,缓解患者症状[4]｡研究发现眼表免疫稳态失衡､泪液成分的变化､氧化应激等因素与干眼的发生有关,延误治疗会导致患者病情加重,引发角膜穿孔或感染,严重威胁患者健康[5]｡因此,本研究旨在寻找与干眼有关的生物标志物,探究与干眼发病有关的因素,为干眼临床预防及诊断提供依据,对患者眼部健康有重要意义｡Toll样受体4(toll-likereceptor4,TLR4)与机体免疫反应相关,参与多条信号通路调节炎症因子的分泌,调控机体炎症反应,与干眼的发生发展密切相关[6]｡核因子κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)存在于多种组织和细胞中,与机体炎症反应有关,研究发现PI3K/AKT/NF-κB信号通路参与调节干眼相关的炎症反应,抑制其表达可以对眼表组织起保护作用[7]｡结膜上皮细胞中生物标志物可能与干眼的病理生理变化有关,探究干眼发病密切相关的分子或通路可为治疗提供理论基础,泪液的检查是诊断干眼的重要指标,因此,本研究探究干眼患者结膜上皮细胞及泪液中TLR4､NF-κB的表达情况,分析TLR4､NF-κB对干眼的临床价值｡

1、对象和方法

1.1对象

选择2023年1月至2024年6月在本院就诊的干眼患者104例104眼为干眼组(均选取左眼入组),男49例,女55例,年龄37-74(平均53.48±9.76)岁｡纳入标准:(1)符合干眼相关诊断标准[8]:有干燥感､异物感､烧灼感､疲劳感､不适感､视力波动等且泪膜破裂时间(BUT值)≤5s;(2)无其它眼部疾病;(3)无眼部手术史;(4)自愿参与本研究;(5)临床资料完整｡排除标准:(1)合并精神障碍;(2)合并心脑血管疾病､重要脏器功能障碍;(3)睑板腺功能异常｡另选取本院体检的100名100眼健康者为对照组(均选取左眼入组),男46例,女54例,年龄36-72(平均52.17±9.62)岁｡参与者同意参与本研究并签署知情同意书,本研究经过医院伦理委员会审批(批准号:LS2022098)｡

1.2方法

1.2.1资料收集

收集研究对象年龄､性别､BMI､吸烟史､饮酒史､近视情况､使用滴眼液情况､泪膜破裂时间(BUT)､泪液分泌试验(SⅠt)､泪膜厚度(TFT)､角膜荧光素染色(CFS)评分等资料｡

1.2.2结膜上皮细胞及泪液收集

结膜上皮细胞:研究对象采用仰卧位或坐位,眼睛向上看,医生分开患者眼睑充分暴露球结膜,手持细胞刮刀,于球结膜表面轻柔､平稳的刮取2-3次,放入冻存管,于-80℃低温环境保存;泪液:在研究对象下睑部位约1/3处放置试纸,试纸与眼睑贴合后闭眼5min,将试纸放置在离心管中于-80℃低温环境保存｡

1.2.3TLR4及NF-κB检测

采用酶联免疫吸附法测定研究对象结膜上皮细胞及泪液中TLR4､NF-κB水平,操作严格按照试剂盒说明进行｡标准液､样本分别加入孔板,孵育后弃液,加入A工作液孵育后弃液并清洗,加入B工作液孵育后弃液并清洗,加入基底液孵育后加入终止液,酶标仪进行检测｡统计学分析:采用统计软件SPSS23.0进行数据处理与分析,性别等计数资料以n(%)表达,采用χ2检验;TLR4等计量资料以x±s表达,行独立样本t检验;Pearson分析结膜上皮细胞及泪液中TLR4与NF-κB表达的相关性;Logistic分析影响干眼患病的因素;ROC分析结膜上皮细胞及泪液中TLR4､NF-κB表达对干眼的诊断价值,AUC比较采用Z检验｡P<0.05为差异具有统计学意义｡

2、结果

2.1两组相关临床信息对比

干眼组与对照组年龄､性别､BMI､吸烟史､饮酒史､近视情况差异均无统计学意义(均P>0.05)｡干眼组频繁使用滴眼液占比､CFS评分高于对照组,BUT值､SⅠt值､TFT低于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.01),见表1｡

2.2两组结膜上皮细胞及泪液中TLR4和NF-κB表达分析

干眼组结膜上皮细胞及泪液中TLR4､NF-κB表达水平皆显著高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.01,表2)｡

2.3干眼组结膜上皮细胞及泪液中TLR4与NF-κB表达的相关性分析

采用Pearson分析干眼组结膜上皮细胞及泪液中TLR4与NF-κB表达的相关性,可知结膜上皮细胞和泪液中TLR4与NF-κB均正相关(r=0.392､0.348,均P<0.05)｡

2.4影响干眼患病的因素Logistic分析

影响干眼患病的因素,以是否患干眼为因变量,以滴眼液使用情况､BUT值､SⅠt值､TFT､CFS评分､TLR4､NF-κB为自变量进行分析,发现频繁使用滴眼液､CFS评分､TLR4､NF-κB是患干眼的危险因素(OR=2.153､3.183､1.578､2.452,均P<0.05),BUT值､SⅠt值､TFT是患干眼的保护因素(OR=0.654､0.755､0.276,均P<0.05),见表3｡

2.5结膜上皮细胞中TLR4及NF-κB表达对干眼的诊断价值

结膜上皮细胞中,TLR4诊断干眼的敏感性､特异性､AUC分别为61.54%､82.00%､0.763,NF-κB诊断干眼的敏感性､特异性､AUC分别为63.46%､85.00%､0.771,TLR4联合NF-κB诊断干眼的敏感性､特异性､AUC分别为86.54%､81.00%､0.889,见表4,图1｡结膜上皮细胞中TLR4､NF-κB两者联合对干眼的诊断比单独诊断价值高(Z两者联合-TLR4=3.506,P=0.001;Z两者联合-NF-κB=3.165,P=0.002)｡

2.6泪液中TLR4及NF-κB表达对干眼的诊断价值

泪液中,TLR4诊断干眼的敏感性､特异性､AUC分别为62.50%､75.00%､0.722,NF-κB诊断干眼的敏感性､特异性､AUC分别为74.04%､73.00%､0.769,泪液中TLR4联合NF-κB诊断干眼的敏感性､特异性､AUC分别为82.69%､70.00%､0.818,见表5,图2｡泪液中TLR4､NF-κB两者联合对干眼的诊断比单独诊断价值高(Z两者联合-TLR4=3.117,P=0.002;Z两者联合-NF-κB=2.363,P=0.018)｡

表1干眼组与对照组相关临床信息对比

表2干眼组与对照组结膜上皮细胞及泪液中TLR4和NF-κB的表达分析

表3影响干眼患病的因素分析

表4结膜上皮细胞中TLR4及NF-κB表达对干眼的诊断价值

表5泪液中TLR4及NF-κB表达对干眼的诊断价值

图1结膜上皮细胞中TLR4及NF-κB表达诊断干眼的ROC曲线｡

图2泪液中TLR4及NF-κB表达诊断干眼的ROC曲线｡

3、讨论

干眼是慢性眼表疾病,患者泪膜功能异常,导致炎症反应,患者可能出现眼部干涩､异物感､眼部胀痛､畏光等症状,影响患者生活,严重导致患者失明[9]｡干眼的发生与环境因素､生活习惯､眼部手术等有着密切关联[10]｡人工泪液､凝胶是治疗干眼的常用药物,减轻眼部干涩情况,减缓炎症情况[11]｡早期预防和及时诊断可以减少干眼的发病和不良情况的发生[12],因此,本研究探究干眼患者结膜上皮细胞及泪液中TLR4､NF-κB表达情况的变化,以及影响干眼患病的影响因素,为干眼的临床预防和诊断提供参考依据｡

研究发现GSDMD介导的细胞焦亡与NLRP12与NLRC4炎症小体有关,产生IL-33,这一过程需要TLR4诱导激活黏膜角膜上皮细胞中的半胱天冬酶-8,因此,TLR4在干眼的发展中起着重要作用[13]｡Jiang等[14]研究发现在糖尿病干眼模型小鼠体内TLR4､NF-κB､NLRP3和IL-1β的表达水平升高,TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路对干眼疾病的进展起调节作用｡此外,有研究发现HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路也与干眼的发展有关,使用抑制炎症的药物使HMGB1､TLR4､NF-κB表达水平降低,减轻眼表炎症与角膜上皮细胞结构功能障碍[15]｡在本研究中,干眼患者结膜上皮细胞及泪液中TLR4表达水平高于健康者,TLR4是患干眼的危险因素,与上述研究结果类似,表明TLR4表达水平升高与干眼患病风险增加有关｡其原因可能是TLR4参与了多条与炎症反应相关的信号通路,研究发现TLR4可参与TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,对干眼动物模型的炎症反应和免疫活动起调节作用,通过药物治疗后细胞中TLR4表达水平降低,此时炎症小体表达被抑制,TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路被抑制,从而有利于保护眼表结构[16]｡

王超群等[17]研究发现干眼模型大鼠经过治疗后,结膜上皮细胞中炎症因子(白细胞介素-1､肿瘤坏死因子-α)表达水平降低,NF-κB表达水平降低｡抑制NF-κB表达能够减弱角膜周围免疫细胞活性,从而降低机体炎症反应,使患者眼表情况得到改善｡孙心怡等[18]研究发现干眼模型豚鼠与健康豚鼠相比,BUT值以及泪液分泌量均降低,CFS和角膜上皮细胞附近的免疫细胞数量均上升,炎症因子含量以及NF-κB表达明显升高,经过电针治疗后BUT值以及泪液分泌量均增加,CFS和角膜上皮细胞附近的免疫细胞数量均降低,炎症因子和NF-κB表达水平下降｡本研究发现干眼组结膜上皮细胞及泪液中NF-κB表达水平高于对照组,与上述研究结果类似,表明NF-κB水平升高与干眼患病风险增加相关｡其原因可能是NF-κB参与和眼部疾病有关的信号通路,抑制其表达可对患者眼部起保护作用,降低NF-κB表达水平抑制NF-κB信号通路,可降低炎症反应造成的角膜损伤[19-20]｡

TLR4/NF-κB炎症信号通路参与干眼的发生发展过程,研究发现经过治疗后的糖尿病干眼大鼠模型的角膜､结膜､泪腺等病理变化减轻,眼表症状改善,TLR4､NF-κB和TNF-α的表达水平降低,抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应[21]｡在本研究中,结膜上皮细胞和泪液中TLR4与NF-κB均正相关,且TLR4与NF-κB联合对干眼的诊断价值优于二者单一诊断效能｡提示TLR4与NF-κB在干眼中相互作用,共同参与相关信号通路调控干眼的发展过程｡

综上,在本研究中干眼患者结膜上皮细胞及泪液中TLR4､NF-κB表达水平升高,两者升高与患干眼风险增加有关,且两者呈正相关,同时研究发现TLR4联合NF-κB对干眼有一定诊断意义,未来可能用于干眼临床诊断中｡但是本研究所使用样本量较小,且未进行多中心验证,可能使结果具有一定局限性｡后续将使用大样本量对其进行验证,以便后期对其相关机制进行深入研究,增加创新性｡

参考文献:

[1]杨娟,李牧玲,朱佩燕,等.生活方式相关性干眼预防及管理的最佳证据总结.中华护理杂志,2023,58(21):2662-2669.

[2]苏萌,白惠玲,梁丽,等.兰州市中学生干眼症患病率及危险因素分析.眼科新进展,2020,40(1):70-72.

[3]陈娟,李爽乐.玻璃酸钠联合rhEGF滴眼液治疗白内障术后干眼症的疗效.中国老年学杂志,2021,41(14):3006-3009.

[4]曹瑾,龚兰兰,吕旭东.虎杖苷激活MEK/ERK信号通路改善东莨菪碱诱导的干眼症大鼠眼表功能障碍和病变.中国免疫学杂志,2024,40(5):1089-1095.

[5]杨雪,张琪.干燥环境相关性干眼的发病机制研究进展.眼科新进展,2023,43(6):496-499.

[8]亚洲干眼协会中国分会,海峡两岸医药卫生交流协会眼科学专业委员会眼表与泪液病学组,中国医师协会眼科医师分会眼表与干眼学组.中国干眼专家共识:检查和诊断(2020年).中华眼科杂志,2020,56(10):741-747.

[9]姜祎,庞雨莲,张旭.干眼检查方法的研究进展.国际眼科杂志,2023,23(4):573-577.

[10]耿玉倩,王婉丽,叶倩,等.环境气象因素对脂质异常型干眼发病的风险研究.国际眼科杂志,2023,23(11):1880-1886.

文章来源:刘国英,侯江平,吴幻,等.干眼患者结膜上皮细胞及泪液中TLR4和NF-κB的表达及临床意义[J].国际眼科杂志,2025,25(06):975-979.