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中国健康志愿者应用盐酸曲美他嗪片的生物等效性研究

2020-08-27 265 上传者：管理员

摘要：目的评价2种盐酸曲美他嗪片在中国健康受试者的生物等效性及安全性。方法按单中心、开放、随机、单次给药、两制剂、两序列、两周期、交叉试验研究设计方法,空腹和餐后条件下分别入组健康受试者28例和24例,随机交叉单次口服受试制剂和参比制剂20 mg,用HPLC-MS/MS法测定血浆中曲美他嗪的浓度,用Phoenix WinNonlin(7.0版本)软件计算曲美他嗪的药动学参数,并进行生物等效性评价。结果受试者服用受试制剂和参比制剂后,空腹组血浆中曲美他嗪的主要药代动力学参数如下:Cmax分别为(59.31±13.89)和(56.63±10.36) ng·mL-1;AUC0-t分别为(528.16±142.91)和(534.64±142.04) ng·h·mL-1;AUC0-∞分别为(549.33±146.05)和(556.28±144.96) ng·h·mL-1。餐后组血浆中曲美他嗪的主要药代动力学参数如下:Cmax分别为(61.15±15.95)和(67.75±17.73) ng·mL-1;AUC0-t分别为(507.68±99.16)和(527.69±113.57) ng·h·mL-1;AUC0-∞分别为(527.05±99.66)和(546.25±114.92) ng·h·mL-1。2种制剂的Cmax、AUC0-t和AUC0-∞经对数转换后90%可信区间分别为空腹状态下97.94%～109.31%,94.45%～102.24%,94.58%～102.09%;餐后状态下82.69%～98.82%,93.86%～99.40%,94.31%～99.54%。结论 2种盐酸曲美他嗪片在中国健康受试者中具有生物等效性。

关键词：
中国健康受试者
曲美他嗪
生物等效性
药代动力学
血药浓度
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盐酸曲美他嗪是一种哌嗪类衍生物,在缺血性心脏病患者中,曲美他嗪作为一种代谢剂,可保持心肌细胞内高能磷酸盐水平。实现抗心肌缺血作用的同时未影响血液动力学[1,2]。曲美他嗪片由Les Laboratories Servier Industrie原研生产。原研盐酸曲美他嗪片于1978年获准在法国上市,2000年,盐酸曲美他嗪片在我国上市。远大医药(中国)有限公司生产的盐酸曲美他嗪片按化学药品注册分类,属于原注册分类的仿制药6类,药品批准文号是国药准字H20083806。本研究旨在评价国产制剂与进口制剂在中国健康受试者的生物等效性及安全性,为该药一致性评价提供依据。

材料、对象与方法

1.药品与仪器

盐酸曲美他嗪片(受试制剂),规格:每片20 mg,批号:20170703,远大医药(中国)有限公司生产提供;盐酸曲美他嗪片(参比制剂),规格:每片20 mg,批号:979699,Les Laboratories Servier Industrie公司生产,远大医药(中国)有限公司提供。盐酸曲美他嗪标准品,批号:100889-201302,中国食品药品检定研究院提供;盐酸曲美他嗪-d8(内标),批号:2441-025A5,TLC Pharmaceutical Standards提供。

LC-20ADXR高效液相色谱仪,Shimadzu公司产品;Triple Quad 4500质谱仪,AB Sciex公司产品。

2.受试者选择

试验方案经原中国人民解放军第三〇二医院医学伦理委员会批准。所有受试者均自愿书面签署知情同意书。试验分为空腹给药组和餐后给药组。空腹组入选28例健康受试者,其中男性受试者18例,女性受试者10例,平均年龄为(38.10±11.96)岁,平均身高为(163.64±9.34)cm,平均体重为(60.33±8.67)kg,平均体重指数(body mass index, BMI)为(22.48±2.22)kg·m-2。餐后组入选24例健康受试者,其中男性受试者16例,女性受试者8例,平均年龄为(33.60±8.28)岁,平均身高为(164.25±9.23)cm,平均体重为(62.26±8.77)kg,平均BMI为(22.98±1.83)kg·m-2。所有入组受试者符合入排标准。

入选标准 ①性别:中国健康男性或女性受试者,且单一性别比例不低于1/3;②年龄:18周岁以上(含18周岁);③体重男性≥50 kg,女性≥45 kg,且BMI:19～26 kg·m-2(包含边界值,BMI=体重(kg)/身高(m2));④受试者必须在试验前对本研究知情同意,并自愿签署书面的知情同意书;⑤从签署知情同意书开始至试验结束后的1个月内受试者或其伴侣必须愿意使用医学上可接受的避孕方法,且从筛选前14 d至试验结束受试者不能使用避孕药物;⑥受试者能够与研究者作良好的沟通并能够依照方案规定完成研究。

排除标准 ①过敏体质或有药物、食物过敏史,或已知对盐酸曲美他嗪片中任一组分过敏;②研究者认为具有临床上有意义的肝、肾、内分泌、心血管、神经、精神、胃肠道(如消化性溃疡病)、肺、肿瘤、免疫、皮肤、血液或代谢紊乱等疾病或任何其他疾病,或具有这些疾病的病史,或将危害受试者的安全或影响研究结果的因素;或曾有过重大手术史;③筛选期体格检查、生命体征测量、实验室检查(血常规、尿常规、血生化、血妊娠)、12导联心电图检查、胸部X线检查结果研究者判断异常有临床意义;④乙肝表面抗原阳性,或丙肝抗体阳性,或梅毒螺旋体抗体阳性,或艾滋病病毒抗体检测阳性;⑤女性受试者在筛选期或试验过程中血妊娠检查结果阳性或为哺乳期妇女;⑥酒精呼气试验阳性或药物滥用筛查阳性者;⑦受试者或伴侣在给药前30 d至研究结束后1个月内有捐精捐卵计划或有妊娠计划;⑧具有药物滥用史,或习惯性服用任何药物,包括中草药;⑨筛选前14 d内服用了任何处方药、非处方药、保健品或中草药等。

3.分组、治疗方法与血样采集

本试验采用两周期、完全重复、自身交叉、单剂量口服给药试验设计。

空腹条件下和餐后条件下分别入组28例和24例受试者,均随机分为2组,分别在空腹或高脂餐后状态下交叉口服受试制剂或参比制剂20 mg,温水240 mL送服。给药前后1 h禁水(高脂餐除外)。给药4 h后进午餐,10 h后进晚餐。空腹试验2次给药间隔清洗期为3 d,餐后试验2次给药间隔清洗期为7 d。空腹组以及餐后组的药代采血时间均为给药前60 min内和给药后0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,2.5,3,3.5,4,5,6,8,10,12,24,36 h。每次采血量约4 mL,置于含EDTA-K2抗凝剂的真空采血管中,以3500 r·min-1离心10 min,分离血浆,取约1 mL置于检测管(不少于0.80 mL,但也不多于1.00 mL),剩余的血浆转移到备份管。样品需储存于试验中心的-60℃～-90℃冰箱,直到分析。从血样采集至血浆冻存的时间不超过2 h。

4.测定方法和样品处理[3]3]

色谱条件色谱柱:Ultimate XB-C18,2.10×50.00 mm,5.00μm;流动相:A:含0.10%甲酸和10 mmol·L-1甲酸铵水溶液,B:乙腈;洗脱方式:梯度洗脱(0.01 min,5% B;1.30 min,20% B;1.40 min,90% B;2.10 min,90% B;2.20 min,5% B;2.80 min,停止);流速:1.00 mL·min-1;进样体积:10.00μL;柱温箱温度:30℃。

质谱条件电喷雾离子化源(ESI);正离子模式;多反应监测(MRM);喷射电压:4500 V;离子源温度:600℃;曲美他嗪和曲美他嗪-d8的去集束电压(DP)分别为40和40 V,碰撞能量(CE)分别为18和21 V;用于定量分析的离子反应为曲美他嗪m/z 267.2→181.2,曲美他嗪-d8 m/z 275.2→181.2。

血浆样品处理精密转移样品50μL至96孔板中,加入内标工作溶液25μL,往每个样品中加入乙腈400μL,涡旋混合5 min;在4℃的离心机中3125 r·min-1离心15 min,然后转移上清液50μL至装有超纯水350μL的96孔板中,涡旋混匀,在进样分析前,将处理后的样品保存在自动进样器中或0～10℃的冰箱中。

5.方法学评价[4]4]

专属性取6名受试者的空白血浆,按照“血浆样本处理”项下进行操作,在曲美他嗪及其内标的保留时间窗中,内源性干扰物的峰面积小于20%的校正标样最低定量下限(LLOQ),并且小于5%的内标峰面积。结果表明,血浆内源性物质不干扰待测物及内标的测定,该方法专属性良好。

标准曲线与定量下限取标准曲线样品(1,2,5,10,25,50,90,100 ng·mL-1),按“血浆样本处理”项下操作,进行HPLC-MS/MS分析。以分析物(曲美他嗪)与内标(曲美他嗪-d8)的色谱峰面积比为纵坐标,以血浆中分析物的质量浓度(x)与峰面积比(y)进行线性回归,用加权回归方法进行回归,选取权重因子为1/x2,所得回归方程为y=0.106x+5.78×10-4 (r=0.998)。标准曲线在1～100 ng·mL-1范围内线性良好。取空白血浆加入曲美他嗪配置成3个LLOQ (1 ng·mL-1),与同日随行的线性样品一同进样,考察其精密度和准确度。在此浓度下,S/N可以达到5倍以上,平均精密度和准确度均不超过±20%。因此本试验确定的曲美他嗪的LLOQ为1.00 ng·mL-1。

精密度与回收率配置极低、低、中、高(1,3,15,75 ng·mL-1)4种质量浓度的质控样品,每个浓度6份样本,连续测定3 d,以当日测得的浓度计算日内、日间精密度;另取低、中、高3种质量浓度的质控样品按“血浆样本处理”项下操作,人血浆提取样品再加入待测物和内标后测得的峰面积比率进行比较,计算回收率。考察的精密度和回收率,见表1。

表1曲美他嗪在人血浆中的精密度和回收率

基质效应取6个不同来源的空白血浆,分别考察低、中、高3种质量浓度(3.00 ng·mL-1,15.00 ng·mL-1,75.00 ng·mL-1)的曲美他嗪在基质离子存在时色谱峰响应和在基质离子不存在时色谱峰响应的比值。内标标准化基质效应是用分析物的基质效应除以内标的基质效应。结果显示曲美他嗪的基质效应分别为95.80%,98.50%和101.00%。内标的基质效应分别为98.90%,99.80%和99.70%。

稳定性全血样品在室温储存24 h;血样处理后的检测样品在2～8℃放置73 h,长期于-15～-35℃冷冻放置44 d,在-60～-90℃冷冻放置44 d均较为稳定,误差在15%以内,测定结果符合要求。

6.统计学处理

用Phoenix WinNonlin(7.0版本)软件进行统计分析,并对2种药物进行生物等效性评价。药代动力学参数Cmax、AUC0-t和AUC0-∞经对数转换后进行方差分析,双单侧t检验并计算90%置信区间(confidence interval, CI),对tmax进行非参数检验,进行生物等效性评价。

结果

1.血药浓度-时间曲线

空腹组、餐后组受试者使用受试制剂盐酸曲美他嗪片和参比制剂后的平均血药浓度-时间曲线,分别见图1、图2。可见2组健康受试者血药浓度-时间曲线的变化趋势基本一致。

2.药代动力学参数

空腹组和餐后组各有28例和24例的受试者血药浓度-时间数据参与药代动力学分析。空腹组和餐后组各有28例和23例的受试者血药浓度-时间数据参与生物等效性分析。受试者服用受试制剂和参比制剂后,血浆中曲美他嗪的主要药代动力学参数,见表2。

3.生物等效性评价

空腹组和餐后组曲美他嗪的Cmax、AUC0-t、AUC0-∞在药物间和周期差异无统计学意义,其Cmax、AUC0-t、AUC0-∞比值的90% CI分别为空腹状态下97.94%～109.31%,94.45%～102.24%,94.58%～102.09%;餐后状态下82.69%～98.82%,93.86%～99.40%,94.31%～99.54%。按照生物等效性判定标准,表明2种制剂生物等效。

图1空腹组受试者单次口服受试制剂盐酸曲美他嗪片和参比制剂后平均血药浓度-时间曲线

图2餐后组受试者单次口服受试制剂盐酸曲美他嗪片和参比制剂后平均血药浓度-时间曲线

表2空腹组和餐后组受试者单次口服受试制剂盐酸曲美他嗪片和参比制剂的药动学参数

4.安全性评价

本次试验空腹组进入安全性分析集的28例受试者中,受试制剂共观察到2例受试者(7.14%)发生不良事件3例次;参比制剂共观察到2例受试者(7.14%)发生不良事件2例次。餐后试验进入安全性分析集的24例受试者中,受试制剂共观察到4例受试者(16.67%)发生不良事件5例次;参比制剂共观察到3例受试者(12.50%)发生不良事件3例次。所有不良事件严重程度均为1级。两项试验均未发生严重不良事件和导致退出试验的不良事件。这表明受试制剂盐酸曲美他嗪片采用单次给药20 mg剂量在中国健康受试者中具有良好的耐受性和安全性。

讨论

本研究结果显示受试制剂与参比制剂AUC、Cmax的个体内变异均<30%,提示制剂间个体内变异差异较小,生物等效的接受标准为上述参数几何均值比值的90% CI数值应不低于80.00%,且不超过125.00%[5]。健康受试者空腹或餐后口服20 mg盐酸曲美他嗪片受试制剂/参比制剂后,其Cmax、AUC0-t、AUC0-∞的90% CI均完全落在80.00%～125.00%之间,表明空腹和餐后口服20 mg盐酸曲美他嗪片受试制剂与参比制剂均具有生物等效性。

参考国家食品药品监督管理局于2016年发布的《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》[5],盐酸曲美他嗪片生物等效性研究中检测的分析物为曲美他嗪。本研究成功验证了一个灵敏、专属、可靠的用于人血浆中曲美他嗪浓度测定的HPLC-MS/MS分析方法。该分析方法的线性范围为1～100 ng·mL-1。对该分析方法的称量准确度、纯溶液的短期和长期稳定性、系统适用性评价、选择性、基质效应、回收率、残留、标准曲线、批内、批间准确度和精密度、内标响应、定量下限和灵敏度、稀释可靠性、基质中分析物的短期和长期稳定性、样品采集稳定性、重新进样重现性、处理过的样品在自动进样器温度下的稳定性等各方面进行了全面的方法验证。验证结果表明,应用HPLC-MS/MS测定人血浆中曲美他嗪浓度分析方法的完整验证结果均符合接受标准。

参考文献：

[1]赵海双,李永东.曲美他嗪在冠心病治疗中的应用进展[J].医学综述,2020,26(1):148-158.

[2]戴军,陈凌.曲美他嗪在心血管疾病中的临床应用[J].心血管病学进展,2001,22(5):278-280.

[5]国家食品药品监督管理总局.以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则[EB/OL].北京:国家食品药品监督管理总局,2015-11-27[2019-10-22].

朱珍真,郎丽巍,朱姗薇,王红艳,宋占东,王丽珍,王敏,魏振满.盐酸曲美他嗪片在中国健康志愿者中的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2020,36(16):2477-2481.