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梅毒患者外周血PD-1的表达水平及临床价值研究
摘要：目的：分析梅毒患者外周血程序性死亡分子1(PD-1）的表达水平及临床价值。方法：将2018年6月至2019年6月在该院就诊的60例梅毒患者纳入梅毒组，另选取同期该院30例体检健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测外周血PD-1水平，比较2组外周血PD-1水平及不同临床特征的梅毒患者外周血PD-1水平。采用Spearman相关性分析外周血PD-1与梅毒患者临床特征的相关性。采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+hight调节性T细胞（Treg）、CD4+CD25+lowTreg、CD4+CD25+lowTreg/CD4+CD25(+hight)Treg及其细胞表面上的PD-1水平。结果：梅毒组外周血PD-1水平显著高于对照组（P<0.05）；不同性别、年龄的梅毒患者外周血PD-1水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；但梅毒快速血浆反应试验（RPR）滴度为1∶8患者外周血PD-1水平显著高于1∶1、1∶2、1∶4患者，临床分期Ⅱ期患者外周血PD-1水平显著高于Ⅰ期患者（P<0.05）。Spearman相关分析结果显示，外周血PD-1与RPR滴度、临床分期呈正相关（r=0.659、0.433,P<0.01）。梅毒组外周血CD4+CD25(+hight)Treg、PD-1+/CD4+CD25(+hight)Treg、PD-1+/CD4+CD25+lowTreg细胞高于对照组，CD4+CD25+lowTreg/CD4+CD25(+hight)Treg显著低于对照组（P<0.05）。结论：梅毒患者外周血PD-1存在高表达现象，且表达水平与病情密切相关。
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梅毒系苍白密螺旋体苍白亚种引起的性传播性疾病，临床表现多样，虽病程发展相对较慢，但可导致皮肤黏膜、心血管、神经、骨骼等多系统病变，不仅损害患者自身身心健康，而且危及下一代健康[1]。相关流行病学报道，我国梅毒发病率自2000年的6.43/10万增长至2013年的32.86/10万，年均增长率达13.37%，已成为重要的公共卫生问题[2]。程序性死亡分子1(PD-1）属CD28超家族成员，主要表达于活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞表面，PD-1及其配体PD-L1或PD-L2相互作用，如与PD-L1结合后通过受体分子胞质尾部的酪氨酸激酶抑制基序激发抑制信号，从而介导负性调控[3,4]。但当前PD-1的临床研究多侧重于肿瘤疾病，甚至有以PD-1/PD-L1为治疗靶点的抗肿瘤药物，并取得一定治疗效果[5]。本研究以本院收治的60例梅毒患者为研究对象，对其外周血PD-1水平及临床意义进行分析，旨在为梅毒的临床诊治提供参考依据。
1、资料与方法
1.1一般资料
选择2018年6月至2019年6月在本院就诊的60例梅毒患者为研究对象（梅毒组）。纳入标准：（1）符合《中华人民共和国卫生行业标准WS273-2007》梅毒诊断要求；（2）患者知晓研究内容并签署研究知情同意书。排除标准：（1）合并梅毒以外的其他内外科疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病；（2）既往使用抗菌药物、激素或免疫调节剂；（3）梅毒病程<2年；治疗及随访期间有不洁性生活。梅毒患者男33例，女27例；年龄22～61岁，平均（49.24±12.33）岁；<40岁27例，40～60岁20例，>60岁13例；梅毒快速血浆反应试验（RPR）滴度1∶113例，1∶215例，1∶421例，1∶811例；临床分期Ⅰ期19例，Ⅱ期41例。另选取本院同期30例体检健康志愿者作为对照组，其中男15例，女15例；年龄25～64岁，平均（20.27±12.01）岁。2组研究对象性别、年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2方法
1.2.1仪器与试剂
PD-1酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购自上海瓦兰生物科技有限公司；酶标分析仪为RaytoRT-2100C型，流式细胞仪为CY-TOMICSFC500型，均购自美国BeckmanCoulter公司；PE鼠抗人PD-1单克隆抗体购自美国BD公司；RPMI1640培养液购自美国Gibco公司；佛波酯、离子酶素购自美国Sigma公司。
1.2.2外周血PD-1水平检测
采集研究对象晨间空腹静脉血标本，乙二胺四乙酸抗凝，3000r/min、4℃条件下离心10min分离血浆，ELISA检测外周血血浆中可溶性PD-1水平。
1.2.3流式细胞术检测细胞比例
采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+hight调节性T细胞（Treg）、CD4+CD25+lowTreg、CD4+CD25+lowTreg/CD4+CD25+hightTreg及其细胞上的PD-1水平。使用淋巴细胞分离液分离外周血单核细胞（PBMC),10%胎牛血清的RP
MI1640培养液重悬调整细胞水平至（2.0～6.0）×107/mL,RPMI1640培养液1∶1体积稀释肝素钠抗凝的全血标本，滴加佛波酯、离子酶素充分混匀，终水平分别为10μg/L、1mg/L,37℃、5%CO2细胞培养箱培养4h，用于PD-1分子检测。另取刺激后的肝素钠抗凝全血标本50μL，分别滴加FITC-CD4/APC-CD25+、PE鼠抗人PD-1单克隆抗体，充分混匀后4℃下避光孵育30min，加1.7%NH4Cl溶血剂混匀，室温静置5～10min至溶血完全，1500r/min条件下离心5min，弃上清液，PBS洗涤，300μLPBS液重悬，FACSCanto检测，CYTOMICSFC500型流式细胞仪及配套分析数据，以CD4+T淋巴细胞设门读数。
1.3观察指标
（1）比较梅毒组、对照组外周血PD-1水平；（2）比较不同性别、年龄、RPR滴度、临床分期的梅毒患者外周血PD-1水平；（3）分析梅毒患者外周血PD-1与临床特征的相关性。
1.4统计学处理
采用SPSS20.0统计学软件进行数据分析，计量资料符合正态分布以表示，采用t检验或方差分析；梅毒患者外周血PD-1与临床特征的相关性采用Spearman相关性分析，以P<0.05为差异统计学意义。
2、结果
2.12组外周血PD-1水平比较
梅毒组外周血PD-1水平显著高于对照组[（56.09±8.13)pg/mLvs.(11.20±4.50)pg/mL]，差异有统计学意义（t=-3.212,P=0.001）。
2.2不同临床特征的梅毒患者外周血PD-1水平比较
不同性别、年龄的梅毒患者外周血PD-1水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；但RPR滴度为1∶8患者外周血PD-1水平显著高于1∶1、1∶2、1∶4患者，临床分期Ⅱ期患者外周血PD-1水平显著高于Ⅰ期患者，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
表1不同临床特征的梅毒患者外周血PD-1水平比较
2.3梅毒患者外周血PD-1与RPR滴度、临床分期的相关性分析
Spearman相关性分析结果显示，外周血PD-1与RPR滴度、临床分期呈正相关（r=0.659、0.433,P<0.01）。见图1。
图1梅毒患者外周血PD-1水平与RPR滴度、临床分期的相关性分析
2.42组外周血CD4+CD25+hightTreg、CD4+CD25+lowTreg细胞比较
2组CD4+CD25+lowTreg细胞比较，差异无统计学意义（P>0.05），但梅毒组外周血CD4+CD25+hightTreg细胞显著高于对照组，CD4+CD25+lowTreg/CD4+CD25+hightTreg显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
表22组外周血CD4+CD25+hightTreg、CD4+CD25+lowTreg细胞比较
2.52组外周血PD-1+/CD4+CD25+hightTreg、PD-1+/CD4+CD25+lowTreg细胞上的表达
梅毒组外周血PD-1+/CD4+CD25+hightTreg、PD-1+/CD4+CD25+lowTreg细胞上的表达显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。
表32组外周血PD-1+/CD4+CD25+hightTreg、PD-1+/CD4+CD25+lowTreg细胞上的表达（x±s)
3、讨论
研究指出，PD-1及其配体PD-L1信号通路在帮助机体形成自身免疫耐受的同时，也被慢性感染病毒利用，通过这一通路削弱机体抗感染免疫，促进病毒的持续感染[6]。肖健等[7]报道，HIV感染患者CD8+T细胞PD-1存在过表达现象，不仅与病毒载量呈正相关，且体内阻断PD-1/PD-L1通路或可发挥CD8+T细胞功能，认为基于该信号通路或可为临床治疗HIV感染提供理论指导。梅毒同为慢性病毒感染性疾病，但笔者查阅文献未见PD-1在梅毒患者中的表达的报道。本研究结果显示，梅毒组外周血PD-1水平显著高于对照组，且虽不同性别、年龄的梅毒患者外周血PD-1水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；但RPR滴度为1∶8患者外周血PD-1水平显著高于1∶1、1∶2、1∶4患者，临床分期Ⅱ期患者外周血PD-1水平显著高于Ⅰ期患者，差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman相关性分析结果显示，外周血PD-1与RPR滴度、临床分期呈正相关。
既往研究报道，在病毒性感染疾病中，持续的病毒刺激可导致免疫损伤[8,9]。CD4+CD25+Treg细胞不仅可纠正持续病毒复制引起的免疫系统过度激活，也能抑制抵抗病毒复制的特异性免疫应答，发挥“双刃剑”的作用[10,11]。其中CD4+CD25+hightTreg作为高表达的CD4+Treg主要发挥抑制活性，可抑制自身反应性T细胞的增殖活化，其数量或功能的缺失与自身免疫性疾病的免疫平衡紊乱、疾病发生、发展密切相关[12,13]。在慢性病毒感染性疾病中，为进一步明确梅毒患者外周血PD-1的表达，本研究分析梅毒患者外周血CD4+CD25+hightTreg、CD4+CD25+lowTreg细胞及细胞表面PD-1的表达。结果显示，梅毒组与对照组CD4+CD25+lowTreg细胞比较，差异无统计学意义（P>0.05），但梅毒组外周血CD4+CD25+hightTreg细胞显著高于对照组，CD4+CD25+lowTreg/CD4+CD25+hightTreg显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），这与张明海等[14]的报道结论相似。且梅毒患者外周血PD-1+/CD4+CD25+hightTreg、PD-1+/CD4+CD25+lowTreg细胞上的表达显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。由此可见，梅毒患者不仅外周血PD-1水平存在高表达现象，外周血CD4+CD25+hightTreg、CD4+CD25+lowTreg细胞及细胞表面PD-1也存在过度表达现象。
本研究也存在一定的局限性，除标本数量相对较少外，受标本采集时间影响，本研究未能进一步分析梅毒血浆固定患者外周血PD-1、CD4+CD25+Treg细胞及细胞表面PD-1的表达情况。另外，梅毒感染引起PD-1表达上调的确切机制、PD-1对CD4+CD25+Treg细胞的免疫调控机制等，或两者间的相互协调机制等仍未明确，笔者拟在下阶段工作中持续深入探究。
综上所述，梅毒患者不仅外周血PD-1存在过表达现象，与RPR滴度、临床分期呈正相关，且CD4+CD25+Treg细胞及细胞表面PD-1也存在过表达现象，但基于本研究局限性，其具体机制仍有待持续探究。
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健康是人类始终如一的向往，深切地影响着全体居民的生活质量和幸福感，同时也关乎国家未来的繁荣与发展。党的“二十大”报告明确指出“人民健康是推动经济高质量发展的基本前提，要把保障人民健康放在优先发展的战略位置，完善人民健康促进政策”[1]。
2024-07-09
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2021-10-09
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2021-10-09
目的分析颅脑外伤实习生带教中采用问题式学习结合微信教学对教学质量的影响。方法选取2019年1月至2020年12月本院神经外科实习生40名,均进行颅脑外伤带教,随机分为观察组和对照组,各20例。对照组采取传统带教方法,观察组采用PBL结合微信带教,比较两组带教效果。结果观察组基础知识成绩、病例分析成绩、考核总分、寻找真相、开放思想、分析能力、系统化能力、自信心、求知欲、认知成熟度评分均明显高于对照组(P&lt;0.05)。
2021-10-09
双相情感障碍是以反复发作的躁狂和抑郁为主要临床表现的一种重型精神障碍，一般分为双相Ⅰ型、双相Ⅱ型、混合型、快速循环型等。有研究显示，我国的BD终身患病率约为0.6%[1],BD首次发作后2年内复发率高达40%～50%,5年内复发率高达90%[2],BD患者多次发作导致反复多次住院，且存在与抑郁症状严重程度无关的显著认知功能损害[3]，给家庭及社会带来沉重负担，因此了解BD复发的危险因素，降低复发率是目前亟待解决的临床问题。
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2021-09-30
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2021-09-29
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