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不同厂家试剂盒检测大鼠血清总蛋白、白蛋白的比较
摘要：：目的比较两个厂家生产的总蛋白、白蛋白试剂盒检测大鼠血清是否存在差异。方法使用两个厂家生产的试剂盒同时检测96个大鼠血清样本的总蛋白和白蛋白含量,并对结果进行统计分析。结果两个厂家生产的试剂盒检测大鼠血清总蛋白(totalprotein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)差异均有统计学意义(总蛋白t=7.270,P<0.01;白蛋白t=-10.944,P<0.01)。结论在开展大鼠血清检测工作中,两个厂家生产的总蛋白、白蛋白试剂均可使用,但对照空白组和研究实验组的血清检测以及实验前后对比时要使用同一厂家生产的试剂盒。
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蛋白质(protein)是生命活动中最重要的物质，几乎在所有的生理过程中都起着关键作用。血清总蛋白(totalprotein,TP)包括数量众多的各种蛋白质。白蛋白(albumin,ALB)是血清内含量最多的一种蛋白质，由肝实质细胞合成，在血浆中半衰期为15～19d[1]。很多疾病的发生发展都会引起蛋白质代谢紊乱，因此可以通过检测血液中蛋白质含量变化来帮助诊断疾病和监测分析病情。总蛋白和白蛋白是保健食品、化妆品、农药等毒理学实验，保肝、降脂、抗疲劳实验，以及纺织品功能实验检测的两个常用血液生化指标，在经口暴露实验[2,3,4]、慢性肝损伤[5,6]、药物治疗疾病[7,8,9]、大鼠亚慢性毒性观察[10,11,12]等研究中都有报道。本研究比较两个厂家生产的总蛋白和白蛋白试剂盒检测大鼠血清的结果，旨在保证总蛋白、白蛋白检测结果的一致性，避免因检测误差干扰观察指标的准确性，为毒理研究及结论分析提供数据参考。
1、材料与方法
1.1仪器设备
生化分析仪-日立7600(日立高新技术有限公司，日本)。
1.2试剂、校准品和质控血清
厂家1(总蛋白：国械注进20172400104,白蛋白：国械注进20172400111):总蛋白、白蛋白的试剂、校准品和质控品均由DiaSys[德赛诊断系统(上海)有限公司，德国]提供。TP试剂R1:6×64ml,R2:6×16ml;ALB试剂R1:8×70ml;校准品包装规格：1×3ml;质控品包装规格：6×5ml。厂家2(总蛋白：国械注进20162402017,白蛋白：国械注进20162402012):总蛋白、白蛋白的试剂、校准品和质控品均由WaKo(和光纯药工业株式会社，日本)提供。TP试剂R1:4×600ml,ALB试剂R1:4×300ml;蛋白校准品规格4×3ml;质控品规格10×5ml。
1.3血样
本中心实验室送检的SPF级Wistar大鼠血清96份。由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供[SCXK-(军)2012-0004],实验动物使用许可证号：SYXK(京)2013-0033。
1.4实验方法
1.4.1实验条件
日立7600全自动生化分析仪进行常规维护保养后，按照两个厂家提供的分析参数设置实验条件，厂家1的总蛋白为TP-D、白蛋白为ALB-D;厂家2总蛋白为TP-H、白蛋白为ALB-H。反应温度都是37℃,两个厂家的TP主波长都是546nm,ALB-D主波长600nm,ALB-H主波长660nm。反应时间TP为10min,ALB为5min。
1.4.2校准程序
两个厂家校准品均为冻干粉状，使用前复溶。校准品浓度TP-D为52.9g/L,TP-H为71.1g/L,ALB-D为34.8g/L、ALB-H为47.5g/L。使用各自校准品进行两点定标。在日常检测工作中注意厂家提供的浓度单位换算。
1.4.3质量控制程序
两个厂家的质控品均为冻干粉状复合质控品，使用前准确复溶，分别检测各自质控血清中TP、ALB含量。
1.4.4样品检测
两个厂家生产的试剂都是即用式，分别设置试剂通道，TP-D为双试剂，TP-H、ALB-D、ALB-H均为单试剂。进行批量输入样品编号和检测项目，样品编号为1～96,检测项目选择TP-D、TP-H、ALB-D、ALB-H,使用两个厂家生产的试剂同时检测96份大鼠血清。血清球蛋白(globulininserum,GLB)和血清白/球蛋白比值(albumin/globulinratio,A/G)是计算项目，GLB由血清总蛋白减去血清白蛋白，A/G为血清白蛋白/血清球蛋白。
1.5统计方法
检测结果从LIS导出，数据使用SPSS20.0软件包进行配对t检验统计处理，P<0.05为差异有统计学意义。
2、结果
2.1两个厂家生产的试剂检测结果见表1。
德赛试剂总蛋白检测结果比和光高1.29g/L,白蛋白低0.69g/L,球蛋白高1.98g/L,血清白/球蛋白比值低0.18。
2.2两个厂家生产的试剂检测结果相关系数和配对t检验统计处理见表2。
总蛋白、白蛋白、球蛋白、血清白/球蛋白比值P<0.01,相关系数r≤0.975。
3、讨论
两个厂家生产的总蛋白都是双缩脲法，白蛋白测定是溴甲酚绿法，均是日常工作中的常规方法，虽然试剂盒方法是一样的，但两个厂家生产的试剂测定结果检测大鼠血清差异均有统计学意义(P<0.01)。根据美国临床实验室标准协会(CLSI)EP9-A2文件的要求，r≥0.975或r2≥0.95,检测结果相关性差。
总蛋白双缩脲法(biureamethod)在碱性溶液中蛋白质分子含有的肽键(-CONH-)与铜离子结合，生成蓝紫色的化合物在540nm的吸光度与肽键的数量呈正比关系，计算出蛋白质含量，这一反应称双缩脲反应，这种试剂称双缩脲试剂。试剂中含有氢氧化钠，因此注意减少碳酸盐的污染。和光生产的总蛋白包装大，在使用过程中容易吸收空气中的二氧化碳，造成检测结果不稳定，可采用加盖或随用随加的方式解决。血清中各种蛋白质的相对分子质量不同，血清总蛋白的浓度不能用mol/L表示，用g/L表示，相对的定量。溶血、严重黄疸和脂浊血清对双缩脲法检测结果有干扰[13]。
血清白蛋白溴甲酚绿法，白蛋白分子带正电荷在pH为4.2的缓冲液中与带负电荷的溴甲酚绿(bromcresolgreen,BCG)生成蓝绿色复合物，白蛋白浓度与在波长628nm处的吸光度呈正比，计算出白蛋白的浓度。ALB-D主波长为600nm,ALB-H主波长为660nm。溴甲酚绿法利用的是正负电荷吸引作用，并非是特异性结合反应，除了带正电荷的白蛋白参加反应外，血清中的触珠蛋白、转铁蛋白和纤维蛋白原等都会与溴甲酚绿作用[14,15],利用日立生化分析仪反应时间可调整的特点，在日常工作中将白蛋白反应时间设定为3min,使用第5个测光点解决干扰。球蛋白浓度和白/球蛋白比值利用总蛋白和白蛋白计算得来，检测结果直接受总蛋白和白蛋白的影响。
两种试剂盒检测大鼠血清蛋白结果差异极显著，因此在开展大鼠血清检测工作中两个厂家生产的总蛋白、白蛋白试剂均可使用，但空白对照组和实验组的血清检测以及实验前后对比时要使用同一厂家生产的试剂盒，确保检测结果的一致性[16]。
利益冲突无
参考文献：
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文章来源：李红,敬海明,林长缨,郭婧,张勐,张超,高珊.不同厂家试剂盒检测大鼠血清总蛋白、白蛋白的比较[J].医学动物防制,2021,37(10):970-972.
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期刊名称：当代医学
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主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
主办单位：中国医师协会
出版地方：北京
专业分类：医学
国际刊号：1009-4393
国内刊号：11-4449/R
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创刊时间：1994年
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2021-09-17
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